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中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议

作者：方桂杰袁宗辉王大菊周诗其何庆华华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室

目的:评价喹赛多的生殖毒性和致畸性。方法:Wistar大鼠雌性100只,雄性50只,随机分为5组。分别以喹赛多0,50,150,2500mg/kg和喹乙醇150mg/kg连续混饲90天,交配。1/2孕鼠用于畸胎检查,另1/2自然分娩,产生F1a。F1a断奶后处死,母鼠再次交配... 详细信息

目的:评价喹赛多的生殖毒性和致畸性。方法:Wistar大鼠雌性100只,雄性50只,随机分为5组。分别以喹赛多0,50,150,2500mg/kg和喹乙醇150mg/kg连续混饲90天,交配。1/2孕鼠用于畸胎检查,另1/2自然分娩,产生F1a。F1a断奶后处死,母鼠再次交配产生F1b。F1b各组分别选留雌性25只,雄性10只,处理同亲代,进行第2代致畸试验和产生F2a,F2a断奶后处死全部动物进行检查。结果:各剂量喹赛多和喹乙醇对孕鼠的健康状况,行为和增重均无明显影响。2500mg/kg喹赛多对子代的影响:第1代致畸试验的胎鼠体重、体长、尾长和窝重显著低于空白对照组,吸收胎数显著高于空白对照组;第2代致畸试验的窝重显著低于空白对照组,活胎

关键词：喹赛多生殖毒性喹乙醇

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T-2毒素在猪肝脏和肠道中代谢途径研究

T-2毒素在猪肝脏和肠道中代谢途径研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：吴庆华黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

【目的】T-2毒素是单端孢霉烯族毒素类中毒性最强的一类毒素。它由镰刀菌（Fusarium）产生。T-2毒素能够引起动物的拒食、呕吐、腹泻、共济失调、体重减轻、不育、免疫系统、抑制蛋白质合成、造血系统受到损害等疾病。同时它也是世界上... 详细信息

【目的】T-2毒素是单端孢霉烯族毒素类中毒性最强的一类毒素。它由镰刀菌（Fusarium）产生。T-2毒素能够引起动物的拒食、呕吐、腹泻、共济失调、体重减轻、不育、免疫系统、抑制蛋白质合成、造血系统受到损害等疾病。同时它也是世界上危害粮食作物的最重要的毒素之一。T-2毒素可在动物肝脏和肠道中发生广泛代谢。且已有报道表明T-2毒素被动物摄入后,能够残留在可食性组织内,从而进一步危害人类健康。T-2毒素发生代谢转化后,毒性随之发生变化,有的代谢物甚至毒性升高。所以为了研究清楚T-2毒素在猪体内代谢途径,我们开展了T-2毒素在猪的肝脏和肠道的代谢研究,从而进一步为毒性研究提供数据。【方法】本研究采用了肝脏和肠道内容物的体外培养法。肝脏微粒、胞液和盲肠内容物进行了制备。然后大鼠肝微粒体或胞液（2mg/mL）、0.05 M Tris-HCl（1 mM EDTA、0.15 M KCl,pH7.4）和NADPH生成系统(β-NADP（2 mM）、6-磷酸葡萄糖（10 mM）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（1 U）、MgCl（5 mM）)。体系在37℃下预孵育5 min后,然后加入T-2毒素,浓度100μM,开始孵育。整个孵育体系体积为200μL。不加T-2毒素的肝微粒体作为空白对照。整个孵育过程持续120 min,终止反应。反应溶液经涡旋混匀,1 5000 r离心15 min,取上清液,并过0.22μM滤膜。滤液通过LC/MS-ITTOF检测分析。50μL T-2毒素（100μM）加入450μL盲肠内容物中,进行孵育。在20 min,40 min,1,2,4,8,24 h分别终止孵育,放入-80冰箱。HPLC-QTrap MS系统（API 4000,Darmstadt,Germany）分析T-2毒素及其代谢物。样品分离通过ZORBAX EclipseXDB-C18色谱柱（150 mm×2.1 mm;3.5μm）进行分离。流动相A为水,B为乙腈。采用梯度洗脱,0-5 min,10%B;5-30 min,10%-100%B。进样体积10μL。PDA检测器扫描波长为200-400nm,柱温40℃,分析时间30min。【结果】经过2小时的孵育后,在猪的微粒体中,除T-2毒素外,发现了HT-2 toxin、neosolaniol（NEO）、3'-OH-T-2和3'-OH-HT-2毒素四种代谢物。在猪肝胞液中,发现了其中HT-2毒素、NEO、3'-OH-T-2三种代谢物,并且两个体系中,HT-2毒素均为主要代谢物,含量最高。肝微粒体的代谢能力比胞液强。经过24小时的盲肠内容物孵育后,发现T-2毒素的盲肠内容物被逐步降解,只发现了HT-2毒素。几头猪对T-2毒素的降解差异很大。HT-2毒素的生成量与T-2毒素的降解呈反比。【结论】猪肝脏和肠道均能有效代谢T-2毒素,但肝脏代谢能力更强。HT-2毒素是肝脏和肠道内的主要代谢物,表明T-2毒素对猪的毒性,是由T-2和HT-2毒素共同作用。

关键词： T-2毒素肝脏肠道代谢

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兽药人工抗原合成的研究进展

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中国兽药杂志 2006年第5期40卷 44-47页

作者：张泽英袁宗辉华中农业大学兽药研究所国家兽药残留基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室湖北武汉430070

在兽药的免疫化学残留分析中,能否合成稳定的具有良好免疫原性的人工抗原是制备抗体和建立免疫分析方法的最关键步骤。综述了国内外兽药人工抗原合成过程中载体的选择、半抗原的设计(强调偶联部位和间隔臂的引入)、半抗原与载体的偶联... 详细信息

在兽药的免疫化学残留分析中,能否合成稳定的具有良好免疫原性的人工抗原是制备抗体和建立免疫分析方法的最关键步骤。综述了国内外兽药人工抗原合成过程中载体的选择、半抗原的设计(强调偶联部位和间隔臂的引入)、半抗原与载体的偶联方法、人工抗原的纯化与鉴定等方面的研究进展。

关键词：兽药半抗原人工抗原合成进展

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体外模型中金霉素对人源志贺菌耐药选择作用研究

体外模型中金霉素对人源志贺菌耐药选择作用研究

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第三届全国细菌耐药监测与临床专题学术会议

作者：戴梦红胡丽霞王玉莲袁宗辉 430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室

志贺菌(Shigella)是人类肠道有代表性的条件致病菌。志贺菌属细菌是细菌性痢疾的病原体。细菌性痢疾在全世界范围内均有暴发，主要流行于发展中国家，但发达国家也时有暴发。志贺菌属细菌也称为痢疾杆菌，包括痢疾志贺菌(***)、福氏志贺... 详细信息

志贺菌(Shigella)是人类肠道有代表性的条件致病菌。志贺菌属细菌是细菌性痢疾的病原体。细菌性痢疾在全世界范围内均有暴发，主要流行于发展中国家，但发达国家也时有暴发。志贺菌属细菌也称为痢疾杆菌，包括痢疾志贺菌(***)、福氏志贺菌(***)、鲍氏志贺菌(***)及宋内志贺菌(***)。其中福氏志贺菌和宋内志贺菌在我国最常见。四环素类药物是人畜共用的抗生素，并且细菌对四环素产生耐药的机制主要是由质粒介导的，肠道致病菌经诱导产生耐药性后在同类或不同类细菌之间传播的可能性大，与人类健康密切相关。金霉素(Chlortetracycline, CTC)是该类药物中天然形成的药物，具有典型的四环素类药物的特征。目前除了欧盟之外，金霉素作为饲料添加剂在美国、日本及我国广泛使用。本研究通过体外模型评价低剂量金霉素是否影响人类肠道致病菌的生长以及诱导其出现耐药性而影响人类健康，为在动源性食品生产中合理使用金霉素、避免或延缓对金霉素耐药的致病菌的出现、保障动物性食品安全提供科学参考。

关键词：志贺菌体外模型金霉素耐药选择剂量评价

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莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陶燕飞朱方伟陈冬梅谢书宇王旭潘元虎刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中... 详细信息

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中残留消除规律的评估也被再次提及。本研究在建立β-受体兴奋剂类药物多残留定量确证方法的同时,对莱克多巴胺在猪可食性组织中的定量确证方法进行单独研究,目的是为研究莱克多巴胺在猪中的残留消除规律提供手段,并可作为检测工具监测其在畜牧生产中是否有滥用的现象,保障食品安全。各组织样品经过酶解、提取和净化,高效液相色谱-串联质谱ESI正离子和负离子模式同时进行检测,采用C色谱柱（150mm×2.1nm,粒径5μm,或相当者）,流动相为0.1%甲酸+5mmol/L乙酸铵溶液+甲醇（%）,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb。实验结果表明该方法测定可食性组织中的莱克多巴胺残留量准确可靠,各组织中,莱克多巴胺检测限为0.25μg/kg,定量限为0.5μg/kg,在猪各组织中分别添加莱克多巴胺0.5μg/kg、1μg/kg和2μg/kg获得平均回收率为96.4%8.9%,变异系数≤2.6%。该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪各组织中莱克多巴胺残留定量测定。

关键词：莱克多巴胺可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质

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动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：陶燕飞陈冬梅黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹... 详细信息

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹干后流动相定容,液相色谱串联质谱检测,采用C18色谱柱(150mm×2.1mm,粒径5μm,或相当者),流动相为乙腈/水(40/60,V/V),离子源采用电喷雾离子源,正离子扫描,选择反应监测,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb,硝呋烯腙的定性离子对分别为361.0>221.9,361.0>196.7。【结果】由线性实验和回收率实验结果表明该方法测定可食性组织中的硝呋烯腙残留量准确可靠,各组织中定量限为0.5μg/kg,在猪、鸡的肌肉和肝脏组织中分别添加硝呋烯腙浓度为0.5μg/kg～2μg/kg的回收率为64.6%to 91.3%。【结论】该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪、鸡各组织中硝呋烯腙残留量的定量测定。

关键词：硝呋烯腙可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质谱

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苯二氮卓类单克隆抗体的制备及其在动物饲料和动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

苯二氮卓类单克隆抗体的制备及其在动物饲料和动物可食性组织中的...

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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：王涓王玉莲袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

引言苯二氮卓类药物属于作用于中枢神经系统的药物,它们与相应受体结合产生作用,能够使动物镇静、嗜睡,或对周围的环境冷漠。兽医临床上,常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用,以减少应激反应,降低死亡率。若长期... 详细信息

引言苯二氮卓类药物属于作用于中枢神经系统的药物,它们与相应受体结合产生作用,能够使动物镇静、嗜睡,或对周围的环境冷漠。兽医临床上,常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用,以减少应激反应,降低死亡率。若长期摄入苯二氮卓类药物,可产生依赖性,突然停药表现为抑郁、精神激动、失眠等。这类药物在动物可食性组织中的残留可严重威胁消费者和动物的健康。因此,加强对这类药物在动物可食性组织残留的快速检测方法研究十分重要。材料与方法以硝西泮（NZP）为原料,制备半抗原7-NH-NZP,连接牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）,

关键词：可食性组织动物饲料 ELISA 单克隆抗体快速检测方法

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喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王旭白毅杰程古月郝海红刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细... 详细信息

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细胞系为细胞模型进行基因组学研究。结果显示,10μM喹烯酮处理组与空白组相比有349个差异表达基因,其中上调基因有210个(名称和功能己知的基因有150个),下调基因有139个(己知基因有98个);20μM喹烯酮处理组与空白组相比有4583个差异表达基因,上调的有2835个(名称和功能已知的基因有1931个),下调的有1748个(已知基因有1095个)。将这些差异基因按生物学进程分为6类:与细胞内物质和能量合成代谢相关、与转运相关、与细胞应激相关、与信号转导相关、与细胞发育过程相关及与转录调控相关。分析相关基因功能,与无机离子、氨基酸、神经递质、糖类、嘌呤和脂肪酸等物质转运相关的基因的表达量发生改变,提示喹烯酮干扰了细胞内正常的生命活动。参与类固醇激素合成和代谢的基因表达量也发生了改变,特别是与胆固醇合成相关的一些基因的表达量均上调,而负责将胆固醇外排出细胞的脂质转运体也发生上调表达;同时,胆固醇合成原料乙酰辅酶A提供者-脂肪酸在一种高度上调表达的SREBF1的作用下合成甘油三酯的进程加剧,三者协同作用影响醛固酮合成原料-胆固醇的浓度;控制类固醇激素合成方向的基因CYP17A1表达量上调,导致醛固酮合成受阻;另外调控CYP11B2转录的一种重要转录因子NR4A2的表达量下调,抑制其转录;同时与氧化应激相关的一些基因表达量下调,提示QCT可能通过抑制Nrf2/Keap1/ARE通路的下游基因NQO1、HMOX1、G6PD和SRXN1等的表达,加剧药物造成的氧化应激现象,进而造成ROS的大量蓄积,引起肾上腺皮质细胞毒性。综上所述,本研究首次运用基因组技术发现ABCG1、SREBF1等与调控胆固醇浓度的相关基因及CYP1 7A1、NR4A2、G6PD等与醛固酮合成相关基因是喹烯酮下调醛固酮合成和分泌的重要分子靶点。

关键词：喹烯酮 H295R细胞毒性醛固酮基因组肾上腺

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喹赛多毒理学研究

喹赛多毒理学研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：王旭黄伶俐王玉莲方桂杰袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

喹赛多为华中农业大学兽药研究所在国内首次合成。文章就近年来喹赛多的急性毒性、亚慢性毒性、遗传毒性、繁殖与致畸、长期毒性、光敏毒性等毒理学研究进行综述。

关键词：喹赛多毒理学综述

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喹乙醇在大鼠的代谢研究

喹乙醇在大鼠的代谢研究

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第九届全国药物和化学异物代谢学术会议

作者：刘兆颖黄玲利陈冬梅戴梦红陶燕飞王玉莲袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室/农业部食品安全评价重点开发实验室

大鼠按10mg/kg b.w.单次口服给药后,对其尿液中的代谢物进行检测。结果显示,在大鼠尿液中共检出18种代谢物,其中O1和O2是雌性大鼠的主要代谢物,O2、O9和O13是雄性大鼠的主要代谢物;除了3种还原代谢物、4种羧酸衍生物和3-甲基喹噁啉-2-羧... 详细信息

大鼠按10mg/kg b.w.单次口服给药后,对其尿液中的代谢物进行检测。结果显示,在大鼠尿液中共检出18种代谢物,其中O1和O2是雌性大鼠的主要代谢物,O2、O9和O13是雄性大鼠的主要代谢物;除了3种还原代谢物、4种羧酸衍生物和3-甲基喹噁啉-2-羧酸(O19)外,其它10种代谢物都是在体内首次报道。同时,除大鼠肝微粒体中的O6和O7外,其它所有在肝微粒体中检测到的代谢物在体内均可检出;喹乙醇的代谢存在性别差异,雄性鸡的代谢和排泄速度比雌性慢。其研究结果证明了喹乙醇体外肝微粒体方法与其体内方法存在相关性,揭示了喹乙醇在体内的命远,解决了喹乙醇悬而未决的代谢问题,为确定其代谢部位和代谢与毒性的关系提供了重要的参考依据。

关键词：喹乙醇代谢大鼠尿液

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