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作者：刘爱梅吴庆华潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从DNA甲基化和炎症角度诠释T-2所致肝细胞损伤的分子机制,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论... 详细信息

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从DNA甲基化和炎症角度诠释T-2所致肝细胞损伤的分子机制,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论依据。[方法]本研究一方面以大鼠为实验动物模型,开展T-2毒素(2 mg/kg bw) 7天毒性试验,检测T-2毒素对大鼠肝中炎性细胞因子的表达以及炎性因子启动子区甲基化的变化,探索T-2毒素下DNA甲基化和炎性细胞因子的关系;另一方面以BRL细胞为模型,应用qPCR、Western blot、亚硫酸氢盐测序(BSP)和流式细胞术在分子水平检测细胞损伤。此外,用DNA甲基化抑制剂和T-2毒素的联合孵育细胞,来更进一步证明DNA甲基化参与T-2毒素所致的炎性细胞因子的表达。[结果]实验结果表明,T-2毒素导致大鼠肝炎性增生,且炎性细胞因子(IL-6、IL-1β、IL-11、IL-1α和TNF-α)大量表达;同时T-2毒素显著提高全基因组5-甲基胞嘧啶(5-mc)水平和肝损伤部位的DNA甲基转移酶(DNMT1,DNMT3a)水平。值得注意的是,在T-2毒素作用下,DNA去甲基化直接增加了炎性细胞因子IL-11、IL-6、IL-α和TNF-α的表达。DNA甲基化抑制剂联合T-2毒素直接或间接诱导炎症细胞因子的产生,加重细胞凋亡。[结论]综上所述,本研究发现DNA甲基化介导了T-2毒素诱导的肝损伤中炎症细胞因子的表达,表明DNA甲基化是T-2毒素诱导肝毒性的一个潜在机制,这为后期进一步诠释T-2毒素所致的细胞损伤机制以及拮抗T-2毒素炎性的新型药物的研发奠定科学基础。

关键词： DNA甲基化 T-2毒素炎性拮抗

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基于lncRNA的T-2毒素致细胞损伤的机制初步探究

基于lncRNA的T-2毒素致细胞损伤的机制初步探究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陆启荣彭大鹏陶燕飞陈冬梅程古月刘振利谢长清袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从长链非编码RNA (lncRNA)角度诠释T-2所致的细胞损伤的机制研究,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一... 详细信息

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从长链非编码RNA (lncRNA)角度诠释T-2所致的细胞损伤的机制研究,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论依据。[方法]本研究一方面以大鼠为实验动物模型,开展T-2毒素(2mg/kg bw)7天毒性试验,检测T-2毒素对大鼠体重、生长激素、血常规指标和血生化指标的变化以及脑垂体基因芯片检测,寻找与T-2毒素所致的细胞损伤相关的lncRNA;另一方面以GH3细胞为模型,应用cDNA末端快速扩增技术扩增细胞损伤相关的lncRNA全长,并应用生物学软件对其分子特征和编码能力进行分析。此外,采用核质分离实验研究其细胞内分布情况。构建lncRNA的过表达载体并联合10 nM和40 nM T-2毒素研究其对细胞损伤相关基因(CYP450,线粒体呼吸链,凋亡,炎症)的影响,并应用流式细胞仪分析其对活性氧和凋亡的影响。[结果]实验结果表明,T-2毒素能明显导致大鼠体重和生长激素降低,谷草转氨酶和血糖浓度升高,尿素和甘油三酯降低。lncRNA-mRNA基因芯片联合分析显示lncRNA靶基因主要富集于线粒体分裂、代谢进程调控、个体和器官发育、应激反应调控等生物学进程。通过对细胞损伤相关的基因MSTRG10078全长和分子特征分析显示MSTRG10078全长为1964 bp,主要位于大鼠的1号染色体且不具有蛋白编码能力,命名为lncMSTRG10078。lncMSTRG10078在细胞核和细胞质均有分布,其胞核和胞质的分布比大约为5.5:4.5。lncMSTRG10078过表达能够在一定程度的拮抗10 nM和40 nM T-2毒素所引起的细胞损伤,集中体现在逆转40 nMT-2毒素所引起的细胞凋亡、线粒体功能改变、炎性因子释放、活性氧的产生以及线粒体相关代谢酶的变化,以此来拮抗T-2毒素对细胞的损伤作用。[结论]本研究发现lncMSTRG10078在T-2毒素所致的细胞损伤中的潜在机制,对T-2毒素产生的细胞损伤作用具有一定拮抗作用,为后期进一步诠释T-2毒素所致的细胞损伤机制以及新型T-2毒素核酸药物拮抗剂的研发奠定科学基础。

关键词： lncRNA T-2毒素细胞损伤拮抗

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聚醚类抗生素残留分析方法研究进展

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中国畜牧兽医 2018年第7期45卷 2015-2024页

作者：李浪红倪腾腾彭大鹏袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

聚醚类抗生素是从链霉菌中提取出来的离子载体类抗生素,包括莫能菌素(monensin,MON)、马杜霉素(maduramicin,MAD)、盐霉素(salinomycin,SAL)、拉沙菌素(lasalocid,LAS)等,具有较广的抗虫谱,对常见的鸡艾美耳球虫有抗虫活性,对反刍动物... 详细信息

聚醚类抗生素是从链霉菌中提取出来的离子载体类抗生素,包括莫能菌素(monensin,MON)、马杜霉素(maduramicin,MAD)、盐霉素(salinomycin,SAL)、拉沙菌素(lasalocid,LAS)等,具有较广的抗虫谱,对常见的鸡艾美耳球虫有抗虫活性,对反刍动物及猪有促生长作用。由于聚醚类抗生素的不规范使用,导致其在动物性食品中残留蓄积,引起人类健康问题,因此,要加大该类抗生素残留检测强度。聚醚类抗生素的残留分析方法主要包括分光光度法、微生物检测法、色谱法(薄层层析法、高效液相色谱、液相色谱—串联质谱法)及免疫学方法。文章总结了该类抗生素的残留分析方法,并对聚醚类抗生素残留检测技术未来的研究发展方向做出展望,以期为今后多残留检测聚醚类抗生素提供参考依据。

关键词：聚醚类抗生素蓄积残留检测

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胞内劳森菌检测方法研究进展

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中兽医医药杂志 2019年第2期38卷 93-96页

作者：罗万和程会娟李振霞李超周凯翔谢书宇华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)国家兽药安全评价实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室湖北武汉430070 郑州师范学院河南郑州450044

胞内劳森菌感染给畜牧业造成了巨大损失,其早期的检测与诊断显得尤为重要。本文对胞内劳森菌现有的检测方法组织病理学、血清免疫学和分子生物学等方法进行阐述,分析了各种方法的优势与不足,为临床胞内劳森菌感染的有效鉴定提供指导。

关键词：胞内劳森菌检测组织病理学血清免疫学

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土拉霉素对离体恒化器模型中人肠道菌群的影响

土拉霉素对离体恒化器模型中人肠道菌群的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘春贝周生喜程古月王玉莲郝海红袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品兽药残留检测重点实验室/华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 湖北省武汉市洪山区华中农业大学动物医学院

[背景]土拉霉素作为新一代大环内酯类动物专用抗生素具有众多优点,然而其微生物安全性评价尚有不足,因此有必要进行土拉霉素残留对人肠道菌群影响的系统全面的研究,从而为制定更合理的ADI提供参考数据。[材料方法]采用体外连续培养的恒... 详细信息

[背景]土拉霉素作为新一代大环内酯类动物专用抗生素具有众多优点,然而其微生物安全性评价尚有不足,因此有必要进行土拉霉素残留对人肠道菌群影响的系统全面的研究,从而为制定更合理的ADI提供参考数据。[材料方法]采用体外连续培养的恒化模型来评估土拉霉素对人肠道菌群的影响。模型中添加不同浓度土拉霉素(0,0.1,1,10和100μg/mL),对给药前后两个重要的微生物学端点(定植屏障功能和耐药性变化)进行考察。通过监测四种优势菌数量变化、代谢产物短链脂肪酸的变化和致病菌沙门氏菌的

关键词：土拉霉素大环内酯类耐药性屏障功能离体恒化器模型人肠道菌群

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鸡毒支原体对达氟沙星的耐药判定标准研究

鸡毒支原体对达氟沙星的耐药判定标准研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王淑歌谷宇锋黄安雄黄玲利谢书宇陶燕飞陈冬梅袁宗辉郝海红国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品兽药残留检测重点实验室/华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 湖北省武汉市洪山区华中农业大学动物医学院

[背景]为合理应用达氟沙星治疗鸡毒支原体（MG）感染并减缓其耐药性产生,本课题系统研究了达氟沙星对鸡毒支原体的野生型临界值CO、药效学临界值CO和临床临界值CO,并制定了鸡毒支原体对达氟沙星的耐药判定标准。[材料方法]微量肉汤稀释... 详细信息

[背景]为合理应用达氟沙星治疗鸡毒支原体（MG）感染并减缓其耐药性产生,本课题系统研究了达氟沙星对鸡毒支原体的野生型临界值CO、药效学临界值CO和临床临界值CO,并制定了鸡毒支原体对达氟沙星的耐药判定标准。[材料方法]微量肉汤稀释法测定了达氟沙星对111株临床分离鸡毒支原体的最小抑菌浓度,ECOFFinder分析其MIC分布,非线性回归分析得到不同置信区间下野生型临界值CO。鸡胚毒力实验筛选出强致病株MG19。应用HPLC方法和Winnolin软件等分析了在体内和半体内环境中达氟沙星对

关键词：鸡毒支原体氟沙星判定标准

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CRISPR-cas系统对空肠弯曲杆菌耐药性研究

CRISPR-cas系统对空肠弯曲杆菌耐药性研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：郭金丽 Muhammad AB Shabbir 黄玲利潘源虎袁宗辉郝海红国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品兽药残留检测重点实验室/华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 湖北省武汉市洪山区华中农业大学动物医学院

[背景]为了监测空肠弯曲杆菌耐药性产生,指导临床用药和新药的开发,本课题分析了空肠弯曲杆菌NCTC11168 cas9基因与抗菌素耐药性的关系。[材料方法]微量肉汤二倍稀释法检测了临床分离的17株空肠弯曲杆菌的MIC,MBC以及MPC。测序分析临床... 详细信息

[背景]为了监测空肠弯曲杆菌耐药性产生,指导临床用药和新药的开发,本课题分析了空肠弯曲杆菌NCTC11168 cas9基因与抗菌素耐药性的关系。[材料方法]微量肉汤二倍稀释法检测了临床分离的17株空肠弯曲杆菌的MIC,MBC以及MPC。测序分析临床分离株中CRISPR间隔序列。使用qRT-PCR检测细菌暴露于抗生素后,CRISPR基因表达量的变化。成功构建cas9基因缺失载体,以及补体突变菌株;肉汤稀释法检测cas9突变菌株对抗生素的敏感性以及其在含药和不含药的条件下,体外耐药性的产生和转移力差异。[结果与讨论]临床分离株(除AB172,AB173,AB191和AB192外)均显示对四环素耐药;所

关键词：空肠弯曲杆菌 CRISPR-cas 耐药性

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副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准的建立

副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准的建立

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：米坤孙达郝海红蒲善菊袁宗辉黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]副猪嗜血杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢喹肟为第四代头孢菌素类药物,能有效的治疗由副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。耐药判定标准能够判定副猪嗜... 详细信息

[目的]副猪嗜血杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢喹肟为第四代头孢菌素类药物,能有效的治疗由副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。耐药判定标准能够判定副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药与否,科学预测副猪嗜血杆菌耐药性发展趋势,并保护头孢喹肟的有效性。[方法]测定头孢喹肟对副猪嗜血杆菌的MIC分布,根据ECOFFinder,得到野生型临界值;根据Eric-PCR鉴定实验和小鼠毒力实验选择在MIC下血清型5型且具有毒力的实验菌株,分别进行头孢喹肟对实验菌株的药效学试验以及在健康猪和患副猪嗜血杆菌病仔猪体内的药动学试验,收集给药后的不同时间点样品,通过HPLC测定血浆样品中头孢喹肟浓度。建立药动学-药效学同步模型,得到不同治疗效果时的PK-PD参数,通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值;选择MIC,MIC,野生型临界值,相对敏感,相对耐药分别对应的MIC中具有毒力的副猪嗜血杆菌,对仔猪进行攻毒感染,使用头孢喹肟治疗患病仔猪,统计治疗结果,通过WindoW,得到野生型临界值。综合评价CO,CO和CO,得到最终的耐药判定标准。[结果]测定得到头孢喹肟对131株副猪嗜血杆菌MIC=0.125μg/ml,MIC=1μg/ml,通过ECOFFinder软件计算得到野生型临界值(CO)为4μg/ml;选择具有代表性的实验菌株为HPS42,分别进行药效学实验和药动学实验,根据不同时间点所对应PK-PD参数与相应细菌变化量,建立PK-PD同步模型,得到不同治疗效果（抑菌,杀菌,根除）所对应的PK-PD参数值分别为,健康组:23h,41h,51h和患病组:39h,70h,110h。通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值为(CO)为0.125μg/ml;通过WindoW分析头孢喹肟对不同MIC感染下的患病仔猪的治愈率,得到临床临界值(CO)为0.25μg/ml～4μg/ml。综合评价CO,CO和CO.,副猪嗜血杆菌对头孢喹肟的耐药判定标准为4μg/ml。[结论]根据本研究所建立的副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准,可判断副猪嗜血杆菌的敏感程度并提供相应的给药方案,保护头孢喹肟的有效性,减缓副猪嗜血杆菌耐药性的产生。本研究为耐药判定标准的建立提供科学指导。

关键词：副猪嗜血杆菌头孢喹肟耐药判定标准 MIC分布 PK-PD同步模型

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土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：马文瑾黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲... 详细信息

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲烷进行液液萃取,采用Agilent SB-C18（2504.6mm）色谱柱和等度洗脱（A:B=65%:35%）分离待测样品中的各组分。流动相A是磷酸盐缓冲液（pH=4.5）,B是乙腈,流速为0.8mL/min,进样量为20μL。[结果]在选定的色谱条件下,氟苯尼考及氟苯尼考胺在25-5000 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999。本方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为15ng/mL和50ng/mL。在空白土壤中药物添加浓度分别为1倍、2倍、4倍定量限（50、100、200ng/mL）。在壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.08±7.22%,95.10±4.45%,99.37±5.74%,日内变异系数<2.74%,日间变异系数<9.12%,添加FFA的批间回收率分别为88.77±6.97%,92.57±6.27%,96.86±4.79%,日内变异系数<7.63%,日间变异系数<8.23%。在砂土中,添加FF的批间回收率分别为94.22±6.92%,93.34±4.30%,95.95±2.42%,日内变异系数<6.64%,日间变异系数<9.41%,添加FFA的批间回收率分别为87.16±4.76%,87.10±13.95%,88.39±6.97%,日内变异系数<7.77%,日间变异系数<9.35%。在砂壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.55±6.72%,91.01±8.41%,90.16±4.77%,日内变异系数<2.36%,日间变异系数<10.52%,添加FFA的批间回收率分别为67.63±5.28%,81.42±9.65%,75.07±3.73%日内变异系数<7.83%,日间变异系数<8.68%。[结论]方法学研究结果表明,本试验建立的土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法适用于土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的测定。

关键词：氟苯尼考氟苯尼考胺土壤 HPLC

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副猪嗜血杆菌对达氟沙星的耐药判定标准研究

副猪嗜血杆菌对达氟沙星的耐药判定标准研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：黄啸徐紫慧黄玲利谢书宇陶燕飞陈冬梅袁宗辉郝海红国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品兽药残留检测重点实验室/华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 湖北省武汉市洪山区华中农业大学动物医学院

[背景]为更科学指导临床用药和有效监测副猪嗜血杆菌耐药性,本课题研究了副猪嗜血杆菌对达氟沙星的野生型临界值CO、药效学临界值CO和临床临界值CO,并制定了副猪嗜血杆菌对达氟沙星的耐药判定标准。[材料方法]琼脂稀释法对临床分离及其... 详细信息

[背景]为更科学指导临床用药和有效监测副猪嗜血杆菌耐药性,本课题研究了副猪嗜血杆菌对达氟沙星的野生型临界值CO、药效学临界值CO和临床临界值CO,并制定了副猪嗜血杆菌对达氟沙星的耐药判定标准。[材料方法]琼脂稀释法对临床分离及其它实验室赠送的143株副猪嗜血杆菌进行MIC测定,利用统计学分析软件对测得的MIC数据进行非线性回归分析确定其野生型折点CO。测定了体外和半体内环境中达氟沙星对副猪嗜血杆菌H80株药效学指标PD,特别是杀菌曲线。建立血浆药动模型和肺部

关键词：副猪嗜血杆菌氟沙星判定标准

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