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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：陈冬梅曹小琴陶燕飞潘源虎刘振利黄伶俐王玉莲袁宗辉农业部兽药残留检测重点实验室/国家兽药残留基准实验室(HZAU) 华中农业大学动物医学院 430070

[目的]黄曲霉毒素和赭曲霉毒素具有多种毒性,对人和动物健康有很大的潜在危害.因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要.目前没有同时检测动物源性食品中7种霉菌毒素残留方法的报道.本方法旨在应用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法建... 详细信息

[目的]黄曲霉毒素和赭曲霉毒素具有多种毒性,对人和动物健康有很大的潜在危害.因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要.目前没有同时检测动物源性食品中7种霉菌毒素残留方法的报道.本方法旨在应用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法建立动物性食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2和赭曲霉毒素A的多残留检测方法.[方法]样品采用快速溶剂萃取,HLB固相萃取柱净化.快速溶剂萃取条件是：11mL萃取斧,萃取溶剂乙腈/正己烷,萃取压力1500psi.采用C18色谱柱分离,乙腈和甲酸溶液为流动相,LC-MS/MS检测.[结果]黄曲霉毒素和赭曲霉毒素在动物源食品中检测限为0.07μg/kg ～0.59μg/kg,回收率大于60％,批间变异系数小于20％.[结论]本方法首次采用快速溶剂萃取提取动物源食品中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素,样品前处理简单,方法回收率高,易于实现自动化操作,有机试剂用量少.本方法采用LC-MS/MS同时测定7种霉菌毒素,检测限低,特异性好,方法性能参数满足兽药残留监控要求.本方法弥补了真菌毒素在动物性食品中定量确证检测方法的空白,为保障人类和动物健康具有十分重要的意义.

关键词：黄曲霉毒素赭曲霉毒素高效液相色谱-串联质谱快速溶剂萃取动物源食品

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喹赛多在大鼠、猪、鸡和鱼肠道中的代谢研究

喹赛多在大鼠、猪、鸡和鱼肠道中的代谢研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：黄玲利胥宁潘源虎陈冬梅刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

[目的]肠道是喹噁啉类药物主要作用部位.为探讨喹噁啉类新品种喹赛多的肠道代谢特点,研究了喹赛多在猪、鸡、鱼和大鼠肠微粒体、肠黏膜、结肠内容物和回肠内容代谢体系中的代谢,为全面揭示喹赛多代谢及药理学机制提供理论依据.[方法]猪... 详细信息

[目的]肠道是喹噁啉类药物主要作用部位.为探讨喹噁啉类新品种喹赛多的肠道代谢特点,研究了喹赛多在猪、鸡、鱼和大鼠肠微粒体、肠黏膜、结肠内容物和回肠内容代谢体系中的代谢,为全面揭示喹赛多代谢及药理学机制提供理论依据.[方法]猪、鸡、鱼、大鼠肠微粒体和肠道黏膜与NADPH再生系统进行孵育,采用CYP3A探针药物硝苯地平验证体系活性.厌氧条件下制备结肠内容物和回肠内容物体外孵育液,通过对肠道细菌典型代表菌计数及与探针酶底物孵育验证体系的代谢活性.在此基础上分别考察喹赛多在各体系中的代谢特点.[结果]喹赛多在四种动物肠微粒体和黏膜代谢中无明显差异,主要发生脱氧代谢.四种动物肠微粒体中均只发现脱一氧代谢物(Cy2);猪、鸡和大鼠肠黏膜中均发现脱二氧代谢产物(Cyl)和脱一氧代谢物(Cy2和Cy10);鱼肠黏膜中发现Cy1和Cy2.猪和鸡结肠内容物中发现Cy1和Cy2外,还发现侧链代谢物Cy4和Cy5,大鼠结肠内容物中还发现Cy10,鱼肠道中另发现侧链氢化代谢物***1和Cy4是猪、鸡和大鼠结肠细菌代谢系统中的主要代谢物.猪、鸡和大鼠回肠内容物中均检测到Cy1、Cy2和Cy10,还检出水解代谢物Cy13和羟化代谢物Cy16.[结论]肠道是喹赛多代谢的重要位点.喹赛多在肠黏膜和微粒体中只发生脱氧代谢,在肠道细菌中主要发生脱氧和氢化代谢.肠道对喹赛多的代谢能力依次为：结肠细菌＞回肠细菌＞肠黏膜＞肠微粒体.

关键词：喹赛多 LC/MS-IT-TOF 代谢肠微粒体肠粘膜肠内容物

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JAK/STAT信号通路在DON和T-2毒素对RAW264.7细胞毒性作用中的机制研究

JAK/STAT信号通路在DON和T-2毒素对RAW264.7细胞毒性作用中的机制...

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：王旭袁宗辉柳琴 Awais Ihsan 黄玲利戴梦红郝海红程古月刘振利王玉连华中农业大学国家兽药残留基准实验室/农业部兽药残留检测重点实验室湖北武汉434000

目的：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和T-2毒素严重损伤机体的免疫系统.JAK/STAT是一条与炎性细胞因子传导密切相关的信号通路,它在单端孢类霉烯毒素所介导的毒性效应中是否起到调控作用,值得探讨.方法：以RAW264.7细胞为模型... 详细信息

目的：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和T-2毒素严重损伤机体的免疫系统.JAK/STAT是一条与炎性细胞因子传导密切相关的信号通路,它在单端孢类霉烯毒素所介导的毒性效应中是否起到调控作用,值得探讨.方法：以RAW264.7细胞为模型,用AG490和Stattic等通路特异性抑制剂,揭示JAK/STAT通路在DON和T-2毒素诱导巨噬细胞凋亡及增殖过程中的分子机制.结果：DON和T-2毒素能剂量依赖性的激活IL-6、IL-1β、TNF-α、JAK1、JAK2、STAT1～STAT3和SOCS基因的表达,显著增强p-STAT1和p-STAT3的蛋白表达;AG490和Stattic能够抑制DON和T-2毒素诱导的JAK2和STAT1～3的基因表达,降低p-STAT1和p-STAT3的表达水平;在AG490和Stattic的干预下,由DON和T-2毒素诱导的IL-6、IL-1β和TNF-α基因表达均显著受到抑制.DON诱导的STAT1的激活非依赖于p38和ERK,对STAT3的激活依赖于p38却非依赖于ERK.T-2毒素诱导的STAT1的表达依赖于p38和ERK的调控,其引起的STAT3的激活依赖于ERK,非依赖于***和T-2毒素显著降低线粒体膜电位并诱导细胞凋亡.AG490和Stattic干预后,Bcl-xl/Bax和Bcl-2/Bax的基因表达相对比值显著降低.DON和T-2毒素使RAW264.7细胞分别阻滞在G2/M期和G0/G1期.结论：首次发现JAK/STAT通路能调控DON和T-2毒素所诱导的炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α基因表达.JAK/STAT可能是继DON和T-2毒素快速激活MAPK路径之后的一个下游分子作用靶点.

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 T-2毒素两面神激酶信号传导及转录激活因子信号通路炎性细胞因子基因表达分子机制

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喹烯酮在大鼠、猪和鸡体内的代谢研究

喹烯酮在大鼠、猪和鸡体内的代谢研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：李娟黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室华中农业大学动物医学院武汉湖北430070

[目的]喹烯酮(Quinocetone)是中国农科院兰州畜牧与兽药研究所研制的畜禽抗菌、止泻、促生长新药,是我国首创的一类动物专用药,但迄今无残留靶组织、残留标示物等食品安全性标准.本研究采用放射性示踪技术和液质联用技术,开展[3H]-喹烯... 详细信息

[目的]喹烯酮(Quinocetone)是中国农科院兰州畜牧与兽药研究所研制的畜禽抗菌、止泻、促生长新药,是我国首创的一类动物专用药,但迄今无残留靶组织、残留标示物等食品安全性标准.本研究采用放射性示踪技术和液质联用技术,开展[3H]-喹烯酮在大鼠、猪和鸡体内的代谢研究,旨在阐明喹烯酮的体内特点和可能的代谢机制,探讨其代谢的种属差异,为评价喹烯酮的食品安全性提供理论依据.[方法]大鼠、猪和鸡按200mg/kg饲料单次灌服氚标喹烯酮,收集给药后不同时间段粪尿.测定各样品中放射性物质含量变化.样品提取净化后,采用LC/MS-IT-TOF对样品中化合物进行分离和鉴定.[结果]65％以上药物经粪便排泄.给药后72h,80％以上药物排出体外,14d内,药物排出率达95％,即达到物料平衡.大鼠和猪尿排泄率分别为25.0％和27％,粪排泄率均为65％.在大鼠、猪和鸡体内分别发现5种代谢物.喹烯酮在动物体内主要发生N1和N4-脱氧、羰基还原、双键还原和苯环羟基化.[结论]喹烯酮在动物体内吸收、排泄迅速,主要经粪便排泄.在动物体内可发生广泛代谢,代谢产物存在种属差异.本研究为评价喹烯酮食品安全性提供了科学可靠的资料,为揭示喹烯酮药理和毒性作用机制奠定了理论基础.

关键词： [3H]-喹烯酮示踪物料平衡 LC/MS-IT-TOF 代谢

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T-2毒素在猪、鸡、鱼和大鼠肝脏中的代谢研究

T-2毒素在猪、鸡、鱼和大鼠肝脏中的代谢研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：吴庆华黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学武汉430070

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃... 详细信息

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃)下预孵育5 min后,加入T-2毒素开始孵育,时间持续120 min,沉淀蛋白终止反应.离心结束后,取上清液,并过0.22 μm滤膜.滤液中T-2毒素及其代谢物最终通过LC/MS-IT-TOF检测分析.[结果]T-2毒素还主要被代谢成了HT-2毒素、Newsolaniol(NEO)、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2、T-2 triol五种代谢物.在肝微粒体中,HT-2、NEO、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2毒素在大鼠、鸡和猪中均被发现.在草鱼没有发现3'-OH-HT-2毒素,而在鲤中,未发现HT-2毒素.此外,在鲤鱼和草鱼的肝微粒体中,羟基化代谢物占主要部分,而猪,鸡和大鼠中,则HT-2毒素为主要代谢物.在肝细胞中,NEO和HT-2毒素被发现.[结论]本研究首次揭示了T-2毒素在不同种属动物肝脏中的代谢特点.同时,本研究首次研究了T-2毒素在鲤肝脏中的代谢途径.水解代谢产物HT-2毒素是陆地动物猪、鸡、大鼠的共同主要代谢物.相比水解代谢,陆地动物猪、鸡、大鼠对T-2毒素的羟基化能力要低很多.但鱼类去刚好有相反的代谢趋势,我们发现猪、鸡、大鼠中常见的代谢物HT-2毒素,在草鱼和鲤鱼的肝脏中很少产生,但3'-OH-T-2毒素却占主导方式,这预示着,鱼类对T-2毒素的代谢与陆地动物存在较大差异.

关键词： T-2毒素肝脏代谢

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喹诺酮类抗菌作用机理的研究进展

喹诺酮类抗菌作用机理的研究进展

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：程古月郝海红戴梦红刘振利袁宗辉农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室武汉国家兽药残留基准实验室(HZAU)和农业部食品兽药残留检测重点实验室华中农业大学湖北、武汉430070 农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室武汉国家兽药残留基准实验室(HZAU)和农业部食品兽药残留检测重点实验室华中农业大学湖北、武汉430070

喹诺酮类化合物是一类广谱抗菌药物,广泛应用于人医和兽医中,但是其抗菌机理尚未完全阐明.本文对喹诺酮类的作用靶点以及药物导致细菌生长抑制和死亡过程中的网络事件进行总结和更新.喹诺酮类在细菌中首先作用于Ⅱ型拓扑异构酶,其对革... 详细信息

喹诺酮类化合物是一类广谱抗菌药物,广泛应用于人医和兽医中,但是其抗菌机理尚未完全阐明.本文对喹诺酮类的作用靶点以及药物导致细菌生长抑制和死亡过程中的网络事件进行总结和更新.喹诺酮类在细菌中首先作用于Ⅱ型拓扑异构酶,其对革兰氏阴性菌的主要靶点是DNA旋转酶,对革兰氏阳性菌的主要靶点是拓扑异构酶Ⅳ.喹诺酮类与细菌Ⅱ型拓扑异构酶形成酶-药物-DNA断裂复合体,导致复制叉移动受阻,细菌DNA复制不能进行,从而发挥抑菌作用.然而,这种作用是可逆的,当药物移除以后细菌生长得以恢复.低剂量(MBC)的药物在长时间作用下仍会引起细菌缓慢死亡,其机制暂不清楚.三元复合体中的DNA断裂位点有一定的序列保守性,复合体的稳定性与药物对复制叉移动的抑制能力密切相关.目前已有数个三元复合体晶体结构被解析,但尚未得到统一结果,最新的是非催化镁离子模型,解释了很多耐药突变位点的构效关系.当使用大剂量的喹诺酮类药物时,细菌染色体大量断裂,导致杀菌作用.

关键词：喹诺酮类化合物抗菌机理三元复合体脱氧核糖核酸断裂位点

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甲氧西林耐药金葡菌的关键基因成分和调控系统研究进展

甲氧西林耐药金葡菌的关键基因成分和调控系统研究进展

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：郝海红戴梦红王玉莲黄伶利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品兽药残留检测重点实验室湖北省武汉市洪山区华中农业大学动物医学院 430070

超级细菌MRSA,包括医源性-MRSA(HA-MRSAs)、社区源性MRSA(CA-MRSA)和家畜源性MRSA(LA-MRSA),具有多重耐药性、高致病性和高转移性,给动物和人类健康造成了巨大的威胁.MRSA对β-内酰胺类药物的耐药机制包括表达β-内酰胺酶和PBP2a蛋白.β... 详细信息

超级细菌MRSA,包括医源性-MRSA(HA-MRSAs)、社区源性MRSA(CA-MRSA)和家畜源性MRSA(LA-MRSA),具有多重耐药性、高致病性和高转移性,给动物和人类健康造成了巨大的威胁.MRSA对β-内酰胺类药物的耐药机制包括表达β-内酰胺酶和PBP2a蛋白.β-内酰胺酶的表达受blaZblaI-blaR1的调控.PBP2a的表达受mecA-mecI-mecRI系统调控.其他基因成分,如murE和femA,对介导β-内酰胺耐药性的贡作用机制尚待研究.金葡菌SCCmec基因盒的进化决定了MRSA的多重耐药性和流行性.Mec复合体和ccr复合体构成SCCmec基因盒的保守区.SCCmnec基因盒的可变区往往含有质粒(pT181,pUB110、p1258)、转座子(Tn554、Tn4001)和耐药基因(aacA-aphD、ermA)等.目前十多种SCCmec基因盒已被鉴别出来.质粒携带的cfr基因对MRSA的多重耐药性和转移性也具有重要意义.agr系统通过群体感应机制,调控PVL和δ-溶血素等毒力因子的表达,影响MRSA的致病性、生物被膜形成、SCVs形成以及异质性耐药.SaeR/S可影响毒力因子(hla,hlgA,hlgB,hlgC,sbi)和粘附因子的表达,并调控mecA基因的表达.VraSR系统可以正向调控细胞壁肽聚糖的合成.

关键词：甲氧西林耐药金葡菌 β-内酰胺类药物耐药机制基因表达调控系统

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基于量子点标记的新型核酸探针原位杂交方法

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中国科技论文在线精品论文 2013年第11期6卷 1064-1069页

作者：贺佳玮邹铅刘军安王旭曹建华赵书红华中农业大学动物科技学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070 华中农业大学理学院武汉430070 华中农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室武汉430070

量子点(quantum dot,QD)具有荧光稳定性强、检测灵敏度高、光谱宽和生物相容性好等诸多优点.研究通过化学合成CdSe/ZnS核壳型QD核心,共价结合靶基因核酸片段形成QD连接的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,... 详细信息

量子点(quantum dot,QD)具有荧光稳定性强、检测灵敏度高、光谱宽和生物相容性好等诸多优点.研究通过化学合成CdSe/ZnS核壳型QD核心,共价结合靶基因核酸片段形成QD连接的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因探针,经电泳检测及荧光表征,证实该探针具有QD和核酸探针双重特性.在原位杂交实验中,使用该新型QD-核酸探针对大白母猪背最长肌石蜡切片中的靶基因进行检测,成功检测到阳性信号.研究为基于QD标记的核酸探针原位杂交实验提供了实验基础,为QD这一新型荧光材料在生物领域的应用提供了依据,同时为原位杂交应用于育种实践提供了可行的方法.

关键词：家畜育种学量子点甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因核酸探针原位杂交

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欧盟兽用抗菌药耐药性管理概述

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中国兽药杂志 2013年第2期47卷 38-42页

作者：张苗苗戴梦红黄玲利王玉莲袁宗辉湖北生物科技职业学院动物科学系武汉430070 华中农业大学动物科技-动物医学院国家兽药残留基准实验室武汉430070

介绍负责管理欧盟兽用抗菌药耐药性的欧洲药品局下设的兽用药品委员会、健康与消费者保护司和食品安全局等相关管理机构以及成立耐药性管理工作组、进行耐药性风险分析、制定相关文件和实施耐药性监测等的管理措施,为我国兽药耐药性相... 详细信息

介绍负责管理欧盟兽用抗菌药耐药性的欧洲药品局下设的兽用药品委员会、健康与消费者保护司和食品安全局等相关管理机构以及成立耐药性管理工作组、进行耐药性风险分析、制定相关文件和实施耐药性监测等的管理措施,为我国兽药耐药性相关政策的制定和措施的实行提供参考。

关键词：欧盟兽用抗菌药耐药性管理机构管理措施

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病原菌的群体感应及其抑制剂的研究进展

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科学通报 2012年第21期57卷 1964-1977页

作者：程古月郝海红戴梦红刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU) 农业部食品兽药残留检测重点实验室武汉430070

随着病原菌耐药性特别是多重耐药性的日益严重,抗菌药作用新靶点的发现和新型抗菌药物的研发显得尤为重要.病原菌的致病作用常受到与其群体密度相关的群体感应(quorum-sensing,QS)系统的调控.细菌通过释放和交换自诱导信号分子(autoindu... 详细信息

随着病原菌耐药性特别是多重耐药性的日益严重,抗菌药作用新靶点的发现和新型抗菌药物的研发显得尤为重要.病原菌的致病作用常受到与其群体密度相关的群体感应(quorum-sensing,QS)系统的调控.细菌通过释放和交换自诱导信号分子(autoinducers,AIs)以调控致病相关基因的表达,从而影响细菌的毒力、黏附和生物膜的形成等.不同种类的AIs介导不同的QS系统,阻止AIs的积累或其与受体的识别和结合就可以抑制QS调控的致病基因的表达.因此,QS抑制剂(quorum-sensing inhibitors,QSIs)有望成为控制病原菌感染和耐药性产生的有效武器.迄今发现的QSIs有非肽类小分子化合物、肽类化合物和蛋白质(包括淬灭QS的酶和抗体).此外,一些竞争性的细菌或动物也可以清除AIs从而起到QSIs的作用.QSIs可以通过天然的QSIs指示菌株、人工构建的工程菌或者计算机模拟等方法进行筛选.对QS介导的病原菌致病机理的不断深入研究将为新型的QSI靶标的选择提供帮助,通过将QSIs和传统抗菌药物联合使用有望达到更好的治疗效果并预防细菌耐药性的产生.

关键词：群体感应群体感应抑制剂病原菌筛选方法

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