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甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：韩肖亚刘振利谢长清董国良袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合成半抗原DVD-HS,又以甲氧苄啶（TMP）为原料合成半抗原TMPCOOH。DVD-HS和TMPCOOH分别与BSA、OVA等大分子蛋白偶联,制备完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-HS-DCC-OVA、TMPCOOH-DCC-BSA和TMPCOOH-DCC-OVA。以二甲氧苄啶（DVD）为半抗原,BSA和OVA连接,制备完全抗原DVD-GA-BSA和DVD-GA-OVA。将完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-GA-BSA和TMPCOOH-DCC-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以TMPCOOH-DCC-OVA为包被原、TMP为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉和鸡肝脏样品中添加TMP标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株TMP/2Gl,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为103.4。经鉴定亚型为IgGl。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为100 g/L,单克隆抗体的最佳稀释度为1:16000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（1000x/C）^B]+D,A=0.9244,B=6.5644,C=2.34793,D=0.09546,R=1.00000,IC值为0.232±0.007 g/L（n=5）,线性范围为0.0125～3.2 g/L,灵敏度为0.053 g/L。该抗体对其他五种甲氧苄啶类药物的IC50值分别为DVD （0.527μg/L）、ADP （1.479μg/L）、BQP （4.354μg/L）、OMP （0.965μg/L）、BMP （0.119μg/L）,交叉反应率分别为DVD（44%）、ADP（15.7%）、OMP（24%）、BQP（5.3%）、BDP（195%）,且与磺胺类药物无交叉反应。样品添加实验结果表明药物回收率为81.4%～107.7%,批内和批间变异系数均小于20%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,R2=0.994,相关性良好,由此可说明本试验建立的检测方法是真实可靠的。[结论]本研究通过分子模拟技术,设计出了一种新颖的半抗原,基于此半抗原,获得了一种可识别6种甲氧苄啶类药物的广谱性抗体,与现有的同类单克隆抗体相比较其灵敏度较高、广谱性较强,具有一定的学术意义。基于该抗体,本研究建立了牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉、鸡肝脏中甲氧苄啶类药物的多残留ELISA检测方法,该方法样品前处理简单、检测限较低、准确性和重复性较好,具有广阔的应用前景。

关键词：甲氧苄啶类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物可食性组织

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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及其在动物组织与饲料中的ELISA快速检测方法研究

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及其在动物组织与饲料中的ELISA快...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：董国良刘振利谢长清韩肖亚袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺（CMO）,合成半抗原ZEN-CMO,分别与大分子蛋白KLH、BSA、HSA和OVA进行偶联,制备完全抗原ZEN-CMO-KLH、ZEN-CMO-BSA、ZEN-CMO-HSA和ZEN-CMO-OVA。以玉米赤霉烯酮为原料合成半抗原7-NH-ZEN,通过戊二醛（GA）法与BSA连接,制备完全抗原7-NH-ZEN-GA-BSA。将人工抗原ZEN-CMO-BSA/HSA/KLH和7-NH-ZEN-GA-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以ZEN-CMO-OVA为包被原、ZEN为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向玉米、猪饲料、猪肉、猪肝脏、猪肾脏和牛奶样品中添加ZEN标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株ZEN/6C2,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为100.7,经鉴定亚型为IgG。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为1μg mL,单克隆抗体的最佳稀释度为1:64000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（x/C）]+D,A=0.97351,B=7.47822,C=2.03041,D=0.07020,R=0.99977,IC值为114.0±5.0ng L（n=5）,线性范围10～6250ng L。标准曲线的板内和板间变异系数均小于15%,灵敏度为11.3ng L。该抗体对α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的交叉反应率分别为89.5%、39.3%、99.2%、55.5%和44.3%。样品添加实验结果表明药物回收率为62.9%～113.6%,批内和批间变异系数均小于15%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,该ELISA方法与LC-MS/MS方法相关性良好,相关系数为0.995,表明该ELISA方法的检测结果切实可靠。[结论]本研究制备了一种能够同时识别玉米赤霉烯酮及其5种代谢产物的广谱单克隆抗体,与国内外同类抗体相比灵敏度较高,广谱性好;基于该抗体建立了玉米、饲料、动物可食性组织及牛奶中玉米赤霉烯酮及其5种代谢物的ELISA检测方法,填补了该方法在动物可食性组织和牛奶中玉米赤霉烯酮类霉菌毒素检测的空白,为玉米赤霉烯酮类霉菌毒素多残留酶联免疫检测产品的研发奠定了基础,具有较高的学术价值和广阔的应用前景。

关键词：玉米赤霉烯酮类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物组织饲料

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动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留检测方法——气相色谱法

动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留检测方法——气相色谱法

引用

2008年全国饲料及畜产品质量安全检测新技术研讨会

作者：陶燕飞于刚陈冬梅王玉莲袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

大观霉素、林可霉素两者联合使用是兽医上常用的复方制剂.但是不规范用药可导致在动物组织或其产品中残留,会产生较明显副作用,不仅影响动物性产品的加工生产,而且还会严重影响消费者的身体健康.实验建立了检测动物可食性组织中林可霉... 详细信息

大观霉素、林可霉素两者联合使用是兽医上常用的复方制剂.但是不规范用药可导致在动物组织或其产品中残留,会产生较明显副作用,不仅影响动物性产品的加工生产,而且还会严重影响消费者的身体健康.实验建立了检测动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留量的气相色谱法,线性实验和回收率实验结果表明,该方法测定可食性组织中的林可霉素和大观霉素的残留量准确可靠,组织中添加林可霉素的定量限为30μg/kg,大观霉素定量限为40μg/kg.在组织中添加30～3 000μg/kg林可霉素或40～10 000μg/kg大观霉素,回收率为73.2％-85.7％.该法能同时检测林可霉素和大观霉素两种药物,缩短了分析时间,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高.

关键词：林可霉素大观霉素可食性组织残留检测固相萃取气相色谱

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猪饲料中有机胂类药物残留检测方法——高效液相色谱法

猪饲料中有机胂类药物残留检测方法——高效液相色谱法

引用

2008年全国饲料及畜产品质量安全检测新技术研讨会

作者：陈冬梅陶燕飞王玉莲刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

有机胂类药物是一类抗菌促生长药物,具有促生长、改善饲料效率的作用,并且对产蛋和猪毛色均有较好作用.但是长期使用含有有机胂砷制剂的饲料喂养动物,这些药物会残留于动物的器官、组织中,通过食物链危害人类健康.建立高效液相色谱法对... 详细信息

有机胂类药物是一类抗菌促生长药物,具有促生长、改善饲料效率的作用,并且对产蛋和猪毛色均有较好作用.但是长期使用含有有机胂砷制剂的饲料喂养动物,这些药物会残留于动物的器官、组织中,通过食物链危害人类健康.建立高效液相色谱法对猪饲料中4种有机胂类药物[对氨基苯胂酸(阿散酸)、3-硝基-4-羟基苯胂酸(洛克沙胂)、4-硝基硝苯胂酸(硝苯胂酸)、对脲基苯胂酸(卡巴胂)]的残留进行了检测.实验结果表明,饲料样品以甲醇和乙酸混合溶液为提取剂,CuSO4沉淀蛋白,通过采用高效液相色谱-紫外法检测,4种有机胂类药物线性范围为0.1～20μg/mL,定量限为5μg/g，平均回收率>80％,相对标准偏差<10％.该方法能同时检测猪饲料中4种有机胂类药物残留,前处理简单,回收率高,检出限低,可为饲料样品中有机胂类药物残留的监测与控制提供有效的检测方法.

关键词：有机胂残留检测高效液相色谱猪饲料

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猪饲料中喹噁啉类药物酶联免疫检测方法的建立

猪饲料中喹噁啉类药物酶联免疫检测方法的建立

引用

2008年全国饲料及畜产品质量安全检测新技术研讨会

作者：赵春保彭大鹏陶燕飞陈冬梅袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

饲料中喹乙醇、卡巴氧等喹嗯啉类药物的使用易导致在动物可食性组织的残留,具有致癌、致畸、致突变性,WHO、FAO和EU已禁止使用,我国也对其在动物肌肉和肝脏中的最大残留限量(MRL)做了规定.因此,有必要对此类药物进行监测.通过对包被原QC... 详细信息

饲料中喹乙醇、卡巴氧等喹嗯啉类药物的使用易导致在动物可食性组织的残留,具有致癌、致畸、致突变性,WHO、FAO和EU已禁止使用,我国也对其在动物肌肉和肝脏中的最大残留限量(MRL)做了规定.因此,有必要对此类药物进行监测.通过对包被原QCA-OVA、抗QCA-BSA抗体、羊抗兔HRP-IgG的工作浓度以及反应时间进行优化,建立了饲料中喹嗯啉类药物的ELISA分析方法.ELISA方法的线性范围为0.2～625mg/L,ICm为40.3 mg/L,与喹乙醇、卡巴氧、痢菌净、喹烯酮和喹赛多等的交叉反应率分别为100％、244.2％、98.8％、319.6％和266.9％,猪饲料中喹嚅类药物的LOD为1.46～7.38 mg/kg,回收率为71.O％～92.3％.批间变异系数为9.73％～20.0％.对5个厂家饲料样品检测结果与HPLC方法一致.本方法可检测饲料中的喹噁啉类药物残留,样品处理方法简单省时,结果灵敏可靠.

关键词：饲料喹噁啉类酶联免疫检测方法

来源：评论

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T-2毒素在猪、鸡、鱼和大鼠肝脏中的代谢研究

T-2毒素在猪、鸡、鱼和大鼠肝脏中的代谢研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：吴庆华黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学武汉430070

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃... 详细信息

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃)下预孵育5 min后,加入T-2毒素开始孵育,时间持续120 min,沉淀蛋白终止反应.离心结束后,取上清液,并过0.22 μm滤膜.滤液中T-2毒素及其代谢物最终通过LC/MS-IT-TOF检测分析.[结果]T-2毒素还主要被代谢成了HT-2毒素、Newsolaniol(NEO)、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2、T-2 triol五种代谢物.在肝微粒体中,HT-2、NEO、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2毒素在大鼠、鸡和猪中均被发现.在草鱼没有发现3'-OH-HT-2毒素,而在鲤中,未发现HT-2毒素.此外,在鲤鱼和草鱼的肝微粒体中,羟基化代谢物占主要部分,而猪,鸡和大鼠中,则HT-2毒素为主要代谢物.在肝细胞中,NEO和HT-2毒素被发现.[结论]本研究首次揭示了T-2毒素在不同种属动物肝脏中的代谢特点.同时,本研究首次研究了T-2毒素在鲤肝脏中的代谢途径.水解代谢产物HT-2毒素是陆地动物猪、鸡、大鼠的共同主要代谢物.相比水解代谢,陆地动物猪、鸡、大鼠对T-2毒素的羟基化能力要低很多.但鱼类去刚好有相反的代谢趋势,我们发现猪、鸡、大鼠中常见的代谢物HT-2毒素,在草鱼和鲤鱼的肝脏中很少产生,但3'-OH-T-2毒素却占主导方式,这预示着,鱼类对T-2毒素的代谢与陆地动物存在较大差异.

关键词： T-2毒素肝脏代谢

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基于磁性石墨烯固相萃取动物性食品中50种非甾体类抗炎药残留的检测方法研究

基于磁性石墨烯固相萃取动物性食品中50种非甾体类抗炎药残留的检...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：陶燕飞谢书宇陈冬梅潘源虎王旭彭大鹏黄玲利王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学武汉430070

[目的]非甾体抗炎剂(NSAIDs)是一类不含甾体结构的抗炎药，广泛应用于畜禽养殖产业，为了确保畜禽肉产品中非甾体抗炎剂残留量在安全食用范围内，建立一种简单、快速、可靠的检测方法对于监测非甾体抗炎剂的使用和残留水平十分必要。[方...

[目的]非甾体抗炎剂(NSAIDs)是一类不含甾体结构的抗炎药，广泛应用于畜禽养殖产业，为了确保畜禽肉产品中非甾体抗炎剂残留量在安全食用范围内，建立一种简单、快速、可靠的检测方法对于监测非甾体抗炎剂的使用和残留水平十分必要。[方法]本研究采用化学共沉淀法制备了稳定的磁性石墨烯，并将磁性石墨烯分散固相萃取-液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)结合，建立了动物性食品中50种NSAIDs残留的测定方法，综合考察了不同的影响因素对磁性分散微固相萃取效率的影响，并从负载量、回收率、基质效应等方面对磁性石墨烯萃取材料与其他固相萃取柱进行了比较。对萃取机理的进行了探讨。

关键词：

来源：评论

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猪可食性组织中四环素类残留检测-液相色谱-串联质谱法

猪可食性组织中四环素类残留检测-液相色谱-串联质谱法

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：余欢陶燕飞陈冬梅王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学兽药研究所

【目的】四环素类药物(Tetracyclines,TCs)是一类碱性广谱、快速抑菌剂,能有效抵抗革兰氏阳性菌和阴性菌及立克次氏体、支原体属、螺旋体等。用于控制动物感染疾病而提高增重率。但使用不当会导致其在动物可食性组织中的残留,对人类健... 详细信息

【目的】四环素类药物(Tetracyclines,TCs)是一类碱性广谱、快速抑菌剂,能有效抵抗革兰氏阳性菌和阴性菌及立克次氏体、支原体属、螺旋体等。用于控制动物感染疾病而提高增重率。但使用不当会导致其在动物可食性组织中的残留,对人类健康造成危害。欧盟和我国农业部规定猪肌肉中四环素、土霉素和金霉素的最大残留均为100μg/kg,肝脏为300μg/kg,肾脏为600μg/kg。四环素类药物稳定性差,长时间的样品前处理会使四环素类药物的回收率大大降低。本文将快速溶剂萃取法与串联质谱检测法相结合,建立猪可食性组织中7种四环素类药物残留的定量确证方法,方法集快速溶剂萃取法的快捷及质谱分析法的准确于一体,提高样品前处理的回收率,为残留监控提供有力的技术支撑。【方法】采用快速溶剂萃取法,以甲醇和三氯乙酸为提取溶剂提取动物组织中的7种四环素类药物,提取温度为60℃,压力为65 Bar,固相萃取净化,乙腈和甲酸水溶液洗脱。液相色谱-串联质谱检测。色谱柱:ZORBAX SB-C18,5μm,4.6 mm×250 mm;柱温:35℃:流动相:C:乙腈:D:0.1%甲酸水溶液。梯度洗脱程序:0～8.0 min,13%C～65%C:8～15.0 min,65%C～65%C:15.0～15.1min,65%C～13%C;15.1～20min,13%C～13%C。流速:0.2 mL/min:柱温:40℃:进样体积:10μL。【结果】该方法对猪肌肉、肝脏和肾脏中的7种四环素类药物的检测限均为0.2μg/kg,定量限均为0.5μg/kg。组织样品在0.5～2.0μg/kg的添加浓度范围内,平均回收率在78.8～105.2%之间,变异系数在5.7～10.8%之间。【结论】本方法前处理时间短,消耗溶剂少,提取效率高,分析简便,检测限低,符合残留分析的要求。

关键词：四环素快速溶剂萃取法猪组织液相色谱-串联质谱残留分析

来源：评论

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吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法研究

吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：王涓王玉莲袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学中国武汉430070

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。... 详细信息

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。若长期摄入吩噻嗪类药物，会导致对心血管系统、循环系统、神经系统等产生副作用，还可引起远期毒性作用，以及诱导致畸、致癌、致突变作用;且该类药物可通过胎盘屏障和血脑屏障，进入乳汁，对婴儿或幼畜产生呼吸抑制作用。因此，这类药物在动物可食性组织中的残留可严重威胁消费者和动物的健康。故加强对这类药物在动物饲料中的快速检测方法研究十分重要。

关键词：吩噻嗪类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物饲料

来源：评论

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生物等效性研究进展

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第十一届全国数学药理学学术会议

作者：郑欢庆黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU) 农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学湖北武汉 430070

生物等效性的评价已越来越引起全世界特别是欧美等国的药品管理和监测部门的关注。在美国药品管理法规中说明，两种药物产品或制剂的生物利用度相等时，即这两种药物制剂的生物等效性相同。欧盟有关药品法规中将药物生物等效性定义为：... 详细信息

生物等效性的评价已越来越引起全世界特别是欧美等国的药品管理和监测部门的关注。在美国药品管理法规中说明，两种药物产品或制剂的生物利用度相等时，即这两种药物制剂的生物等效性相同。欧盟有关药品法规中将药物生物等效性定义为：在相同的实验条件下，两种药物制剂中的活性成分的生物利用度均值之差异经统计检验，差异不显著。本文对兽药生物等效性的研究情况进行了简要论述。

关键词：生物等效性药品管理兽药药动学药物安全

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