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中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议

作者：方桂杰袁宗辉王大菊周诗其何庆华华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室

目的:评价喹赛多的生殖毒性和致畸性。方法:Wistar大鼠雌性100只,雄性50只,随机分为5组。分别以喹赛多0,50,150,2500mg/kg和喹乙醇150mg/kg连续混饲90天,交配。1/2孕鼠用于畸胎检查,另1/2自然分娩,产生F1a。F1a断奶后处死,母鼠再次交配... 详细信息

目的:评价喹赛多的生殖毒性和致畸性。方法:Wistar大鼠雌性100只,雄性50只,随机分为5组。分别以喹赛多0,50,150,2500mg/kg和喹乙醇150mg/kg连续混饲90天,交配。1/2孕鼠用于畸胎检查,另1/2自然分娩,产生F1a。F1a断奶后处死,母鼠再次交配产生F1b。F1b各组分别选留雌性25只,雄性10只,处理同亲代,进行第2代致畸试验和产生F2a,F2a断奶后处死全部动物进行检查。结果:各剂量喹赛多和喹乙醇对孕鼠的健康状况,行为和增重均无明显影响。2500mg/kg喹赛多对子代的影响:第1代致畸试验的胎鼠体重、体长、尾长和窝重显著低于空白对照组,吸收胎数显著高于空白对照组;第2代致畸试验的窝重显著低于空白对照组,活胎

关键词：喹赛多生殖毒性喹乙醇

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T-2毒素在猪肝脏和肠道中代谢途径研究

T-2毒素在猪肝脏和肠道中代谢途径研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：吴庆华黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

【目的】T-2毒素是单端孢霉烯族毒素类中毒性最强的一类毒素。它由镰刀菌（Fusarium）产生。T-2毒素能够引起动物的拒食、呕吐、腹泻、共济失调、体重减轻、不育、免疫系统、抑制蛋白质合成、造血系统受到损害等疾病。同时它也是世界上... 详细信息

【目的】T-2毒素是单端孢霉烯族毒素类中毒性最强的一类毒素。它由镰刀菌（Fusarium）产生。T-2毒素能够引起动物的拒食、呕吐、腹泻、共济失调、体重减轻、不育、免疫系统、抑制蛋白质合成、造血系统受到损害等疾病。同时它也是世界上危害粮食作物的最重要的毒素之一。T-2毒素可在动物肝脏和肠道中发生广泛代谢。且已有报道表明T-2毒素被动物摄入后,能够残留在可食性组织内,从而进一步危害人类健康。T-2毒素发生代谢转化后,毒性随之发生变化,有的代谢物甚至毒性升高。所以为了研究清楚T-2毒素在猪体内代谢途径,我们开展了T-2毒素在猪的肝脏和肠道的代谢研究,从而进一步为毒性研究提供数据。【方法】本研究采用了肝脏和肠道内容物的体外培养法。肝脏微粒、胞液和盲肠内容物进行了制备。然后大鼠肝微粒体或胞液（2mg/mL）、0.05 M Tris-HCl（1 mM EDTA、0.15 M KCl,pH7.4）和NADPH生成系统(β-NADP（2 mM）、6-磷酸葡萄糖（10 mM）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（1 U）、MgCl（5 mM）)。体系在37℃下预孵育5 min后,然后加入T-2毒素,浓度100μM,开始孵育。整个孵育体系体积为200μL。不加T-2毒素的肝微粒体作为空白对照。整个孵育过程持续120 min,终止反应。反应溶液经涡旋混匀,1 5000 r离心15 min,取上清液,并过0.22μM滤膜。滤液通过LC/MS-ITTOF检测分析。50μL T-2毒素（100μM）加入450μL盲肠内容物中,进行孵育。在20 min,40 min,1,2,4,8,24 h分别终止孵育,放入-80冰箱。HPLC-QTrap MS系统（API 4000,Darmstadt,Germany）分析T-2毒素及其代谢物。样品分离通过ZORBAX EclipseXDB-C18色谱柱（150 mm×2.1 mm;3.5μm）进行分离。流动相A为水,B为乙腈。采用梯度洗脱,0-5 min,10%B;5-30 min,10%-100%B。进样体积10μL。PDA检测器扫描波长为200-400nm,柱温40℃,分析时间30min。【结果】经过2小时的孵育后,在猪的微粒体中,除T-2毒素外,发现了HT-2 toxin、neosolaniol（NEO）、3'-OH-T-2和3'-OH-HT-2毒素四种代谢物。在猪肝胞液中,发现了其中HT-2毒素、NEO、3'-OH-T-2三种代谢物,并且两个体系中,HT-2毒素均为主要代谢物,含量最高。肝微粒体的代谢能力比胞液强。经过24小时的盲肠内容物孵育后,发现T-2毒素的盲肠内容物被逐步降解,只发现了HT-2毒素。几头猪对T-2毒素的降解差异很大。HT-2毒素的生成量与T-2毒素的降解呈反比。【结论】猪肝脏和肠道均能有效代谢T-2毒素,但肝脏代谢能力更强。HT-2毒素是肝脏和肠道内的主要代谢物,表明T-2毒素对猪的毒性,是由T-2和HT-2毒素共同作用。

关键词： T-2毒素肝脏肠道代谢

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莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陶燕飞朱方伟陈冬梅谢书宇王旭潘元虎刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中... 详细信息

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中残留消除规律的评估也被再次提及。本研究在建立β-受体兴奋剂类药物多残留定量确证方法的同时,对莱克多巴胺在猪可食性组织中的定量确证方法进行单独研究,目的是为研究莱克多巴胺在猪中的残留消除规律提供手段,并可作为检测工具监测其在畜牧生产中是否有滥用的现象,保障食品安全。各组织样品经过酶解、提取和净化,高效液相色谱-串联质谱ESI正离子和负离子模式同时进行检测,采用C色谱柱（150mm×2.1nm,粒径5μm,或相当者）,流动相为0.1%甲酸+5mmol/L乙酸铵溶液+甲醇（%）,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb。实验结果表明该方法测定可食性组织中的莱克多巴胺残留量准确可靠,各组织中,莱克多巴胺检测限为0.25μg/kg,定量限为0.5μg/kg,在猪各组织中分别添加莱克多巴胺0.5μg/kg、1μg/kg和2μg/kg获得平均回收率为96.4%8.9%,变异系数≤2.6%。该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪各组织中莱克多巴胺残留定量测定。

关键词：莱克多巴胺可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质

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体外模型中金霉素对人源志贺菌耐药选择作用研究

体外模型中金霉素对人源志贺菌耐药选择作用研究

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第三届全国细菌耐药监测与临床专题学术会议

作者：戴梦红胡丽霞王玉莲袁宗辉 430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室

志贺菌(Shigella)是人类肠道有代表性的条件致病菌。志贺菌属细菌是细菌性痢疾的病原体。细菌性痢疾在全世界范围内均有暴发，主要流行于发展中国家，但发达国家也时有暴发。志贺菌属细菌也称为痢疾杆菌，包括痢疾志贺菌(***)、福氏志贺... 详细信息

志贺菌(Shigella)是人类肠道有代表性的条件致病菌。志贺菌属细菌是细菌性痢疾的病原体。细菌性痢疾在全世界范围内均有暴发，主要流行于发展中国家，但发达国家也时有暴发。志贺菌属细菌也称为痢疾杆菌，包括痢疾志贺菌(***)、福氏志贺菌(***)、鲍氏志贺菌(***)及宋内志贺菌(***)。其中福氏志贺菌和宋内志贺菌在我国最常见。四环素类药物是人畜共用的抗生素，并且细菌对四环素产生耐药的机制主要是由质粒介导的，肠道致病菌经诱导产生耐药性后在同类或不同类细菌之间传播的可能性大，与人类健康密切相关。金霉素(Chlortetracycline, CTC)是该类药物中天然形成的药物，具有典型的四环素类药物的特征。目前除了欧盟之外，金霉素作为饲料添加剂在美国、日本及我国广泛使用。本研究通过体外模型评价低剂量金霉素是否影响人类肠道致病菌的生长以及诱导其出现耐药性而影响人类健康，为在动源性食品生产中合理使用金霉素、避免或延缓对金霉素耐药的致病菌的出现、保障动物性食品安全提供科学参考。

关键词：志贺菌体外模型金霉素耐药选择剂量评价

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动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：陶燕飞陈冬梅黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹... 详细信息

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹干后流动相定容,液相色谱串联质谱检测,采用C18色谱柱(150mm×2.1mm,粒径5μm,或相当者),流动相为乙腈/水(40/60,V/V),离子源采用电喷雾离子源,正离子扫描,选择反应监测,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb,硝呋烯腙的定性离子对分别为361.0>221.9,361.0>196.7。【结果】由线性实验和回收率实验结果表明该方法测定可食性组织中的硝呋烯腙残留量准确可靠,各组织中定量限为0.5μg/kg,在猪、鸡的肌肉和肝脏组织中分别添加硝呋烯腙浓度为0.5μg/kg～2μg/kg的回收率为64.6%to 91.3%。【结论】该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪、鸡各组织中硝呋烯腙残留量的定量测定。

关键词：硝呋烯腙可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质谱

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肝细胞色素P450酶的蛋白组学研究进展

肝细胞色素P450酶的蛋白组学研究进展

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第八次全国药物与化学异物代谢学术会议

作者：戴梦红王玉莲袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室／农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学国家兽药残留基准实验室／农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学国家兽药残留基准实验室／农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

细胞色素P450酶参与内源物质和异物的氧化代谢, 主要位于肝细胞内质网膜,在膜蛋白中占有特定的位置。蛋白组学是近年来发展起来的研究蛋白质表达模式、结构和功能的新型学科。本文详细地分析了蛋白组学在细

关键词： P450酶蛋白组学进展

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甲磺酸达氟沙星注射用微球的制备

甲磺酸达氟沙星注射用微球的制备

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：方萤玉王玉莲黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

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喹赛多及其两种代谢产物在大鼠体内消除规律研究

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中国兽药杂志 2017年第4期51卷 42-49页

作者：斯琴朝克图黄玲利袁宗辉湖北工程学院生命科学技术学院湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心湖北孝感432000 国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室国家兽药安全评价实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

通过喹赛多(Cyadox,CYX)在大鼠体内消除规律研究,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础,研究建立了喹赛多及其两种主要代谢产物脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)的提取和HPLC检测方法,... 详细信息

通过喹赛多(Cyadox,CYX)在大鼠体内消除规律研究,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础,研究建立了喹赛多及其两种主要代谢产物脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)的提取和HPLC检测方法,并以大鼠作为研究载体,按推荐剂量连续混饲给药7 d后,研究喹赛多及其两种代谢物在血浆、肌肉、肝脏中消除规律;一次性灌胃给药后研究喹赛多及其两种代谢物在排泄物中的消除规律特点。结果表明,CYX和BDCYX在0~24 h和24~48 h时间段的粪便中可大量检出,在血浆、肌肉、肝脏和尿液中未检出;QCA在6 h的肌肉中有少量残留,在肝脏中一直到72 h还有一定量的残留,在血浆和粪便中未发现其存在。本研究结果为今后喹赛多在体内处置研究提供了可直接借鉴的技术手段和理论基础。

关键词：喹赛多脱二氧喹赛多喹噁啉-2-羧酸消除规律

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动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留检测方法——气相色谱法

动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留检测方法——气相色谱法

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2008年全国饲料及畜产品质量安全检测新技术研讨会

作者：陶燕飞于刚陈冬梅王玉莲袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

大观霉素、林可霉素两者联合使用是兽医上常用的复方制剂.但是不规范用药可导致在动物组织或其产品中残留,会产生较明显副作用,不仅影响动物性产品的加工生产,而且还会严重影响消费者的身体健康.实验建立了检测动物可食性组织中林可霉... 详细信息

大观霉素、林可霉素两者联合使用是兽医上常用的复方制剂.但是不规范用药可导致在动物组织或其产品中残留,会产生较明显副作用,不仅影响动物性产品的加工生产,而且还会严重影响消费者的身体健康.实验建立了检测动物可食性组织中林可霉素和大观霉素残留量的气相色谱法,线性实验和回收率实验结果表明,该方法测定可食性组织中的林可霉素和大观霉素的残留量准确可靠,组织中添加林可霉素的定量限为30μg/kg,大观霉素定量限为40μg/kg.在组织中添加30～3 000μg/kg林可霉素或40～10 000μg/kg大观霉素,回收率为73.2％-85.7％.该法能同时检测林可霉素和大观霉素两种药物,缩短了分析时间,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高.

关键词：林可霉素大观霉素可食性组织残留检测固相萃取气相色谱

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甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：韩肖亚刘振利谢长清董国良袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合成半抗原DVD-HS,又以甲氧苄啶（TMP）为原料合成半抗原TMPCOOH。DVD-HS和TMPCOOH分别与BSA、OVA等大分子蛋白偶联,制备完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-HS-DCC-OVA、TMPCOOH-DCC-BSA和TMPCOOH-DCC-OVA。以二甲氧苄啶（DVD）为半抗原,BSA和OVA连接,制备完全抗原DVD-GA-BSA和DVD-GA-OVA。将完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-GA-BSA和TMPCOOH-DCC-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以TMPCOOH-DCC-OVA为包被原、TMP为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉和鸡肝脏样品中添加TMP标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株TMP/2Gl,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为103.4。经鉴定亚型为IgGl。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为100 g/L,单克隆抗体的最佳稀释度为1:16000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（1000x/C）^B]+D,A=0.9244,B=6.5644,C=2.34793,D=0.09546,R=1.00000,IC值为0.232±0.007 g/L（n=5）,线性范围为0.0125～3.2 g/L,灵敏度为0.053 g/L。该抗体对其他五种甲氧苄啶类药物的IC50值分别为DVD （0.527μg/L）、ADP （1.479μg/L）、BQP （4.354μg/L）、OMP （0.965μg/L）、BMP （0.119μg/L）,交叉反应率分别为DVD（44%）、ADP（15.7%）、OMP（24%）、BQP（5.3%）、BDP（195%）,且与磺胺类药物无交叉反应。样品添加实验结果表明药物回收率为81.4%～107.7%,批内和批间变异系数均小于20%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,R2=0.994,相关性良好,由此可说明本试验建立的检测方法是真实可靠的。[结论]本研究通过分子模拟技术,设计出了一种新颖的半抗原,基于此半抗原,获得了一种可识别6种甲氧苄啶类药物的广谱性抗体,与现有的同类单克隆抗体相比较其灵敏度较高、广谱性较强,具有一定的学术意义。基于该抗体,本研究建立了牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉、鸡肝脏中甲氧苄啶类药物的多残留ELISA检测方法,该方法样品前处理简单、检测限较低、准确性和重复性较好,具有广阔的应用前景。

关键词：甲氧苄啶类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物可食性组织

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