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兽用二氨基嘧啶类抗菌增效剂毒理学研究进展

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中国兽药杂志 2019年第1期53卷 77-84页

作者：郭京超孙亚奇刘振利王旭袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院武汉430070

二氨基嘧啶类抗菌增效剂是一类广谱、高效的药物,广泛应用于临床。综述二氨基嘧啶类抗菌增效剂的毒性作用,主要包括急性毒性、长期毒性、遗传毒性等,以期为评价其安全性,指导临床合理使用,开发新药,避免应用危害提供参考。

关键词：甲氧苄啶二甲氧苄啶巴喹普林奥美普林艾地普林毒性

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欧盟准用饲料药物添加剂使用和管理现状

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中国兽药杂志 2019年第1期53卷 37-43页

作者：戴梦红王湘如崔潞晴赵月冯家伟程古月黄玲利王玉莲彭大鹏王旭袁宗辉华中农业大学动物医学院武汉430070 国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室武汉430070 湖北省生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

欧盟允许在饲料和饮水中添加抗菌药和抗球虫药治疗、预防和防治动物疾病。本文收集和整理了欧盟常见的准用饲料药物添加剂清单,说明其适应症和用法用量,并对其授权程序和使用等管理现状进行简单概述,为中国饲料药物添加剂的使用和管理... 详细信息

欧盟允许在饲料和饮水中添加抗菌药和抗球虫药治疗、预防和防治动物疾病。本文收集和整理了欧盟常见的准用饲料药物添加剂清单,说明其适应症和用法用量,并对其授权程序和使用等管理现状进行简单概述,为中国饲料药物添加剂的使用和管理提供借鉴和参考。

关键词：欧盟饲料药物添加剂兽药管理

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鸡支原体对氟喹诺酮类药物的耐药判定标准研究现状

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畜牧兽医学报 2018年第2期49卷 231-242页

作者：王淑歌谷宇锋黄玲利黄安雄王旭刘振利郝海红袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部兽药残留检测重点实验室(华中农业大学)国家兽药安全评价实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 武汉430070

随着氟喹诺酮类药物在鸡支原体疾病治疗方面的广泛和不合理应用,鸡支原体对氟喹诺酮类药物的耐药现象越来越严重。为了规范氟喹诺酮类药物在鸡支原体疾病治疗上的应用和在一定程度上减缓耐药现象的产生,有必要制定鸡支原体对氟喹诺酮类... 详细信息

随着氟喹诺酮类药物在鸡支原体疾病治疗方面的广泛和不合理应用,鸡支原体对氟喹诺酮类药物的耐药现象越来越严重。为了规范氟喹诺酮类药物在鸡支原体疾病治疗上的应用和在一定程度上减缓耐药现象的产生,有必要制定鸡支原体对氟喹诺酮类药物的耐药标准。本文以耐药判定标准为中心,介绍了其定义和制定流程;阐述了国内外支原体对氟喹诺酮类药物的耐药判定标准的相关研究,包括野生型临界值、药效学临界值和临床临界值的相关研究。最后对当前研究的不足进行反思,并提出了自己的设想,以期为减缓鸡支原体对氟喹诺酮类的耐药提供参考。

关键词：鸡支原体氟喹诺酮耐药耐药判定标准

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欧盟禁用饲料药物添加剂的历史和法规

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中国兽药杂志 2019年第6期53卷 72-79页

作者：王湘如赵月冯家伟崔潞晴袁宗辉程古月黄玲利王玉莲彭大鹏王旭戴梦红华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室武汉430070

欧盟考虑到抗生素耐药性的发展和抗生素耐药基因可能从动物到人微生物的转移,决定从2006年1月1日起禁止抗生素作为生长促进剂,甚至还建议禁止在动物饲料中全面使用所有的抗菌剂。收集和整理欧盟饲料药物添加剂的禁用清单和法规,介绍欧... 详细信息

欧盟考虑到抗生素耐药性的发展和抗生素耐药基因可能从动物到人微生物的转移,决定从2006年1月1日起禁止抗生素作为生长促进剂,甚至还建议禁止在动物饲料中全面使用所有的抗菌剂。收集和整理欧盟饲料药物添加剂的禁用清单和法规,介绍欧盟禁用饲料药物添加剂的历史及其对动物健康的影响,以期为中国饲料药物添加剂的使用和管理提供借鉴和参考。

关键词：欧盟饲料药物添加剂禁用历史清单法规

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微生物抑制法筛选检测尿液中抗菌药残留的研究

微生物抑制法筛选检测尿液中抗菌药残留的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：吴芹王玉莲袁宗辉农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室华中农业大学动物医学院

[目的]抗菌药广泛应用于预防和治疗动物的细菌性疾病,然而抗菌药的不当使用会造成动物源性食品中抗菌药残留超标,严重威胁人和动物的健康。并且经过宰前残留检测,大量残留过量的动物源性食品被销毁,造成巨大的经济损失。本研究旨在建立... 详细信息

[目的]抗菌药广泛应用于预防和治疗动物的细菌性疾病,然而抗菌药的不当使用会造成动物源性食品中抗菌药残留超标,严重威胁人和动物的健康。并且经过宰前残留检测,大量残留过量的动物源性食品被销毁,造成巨大的经济损失。本研究旨在建立一个宰前残留检测方法,以微生物抑制法筛选检测尿液中β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、磺胺类和林可胺类6类抗菌药的残留。[方法]以嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC12980为指示菌,通过优化检测培养基中指示菌的添加浓度、营养组分、pH以及各增敏剂的添加量来提高本试剂盒对各类抗菌药的灵敏度,并且对方法的假阳性率、假阴性率、重现性和稳定性等指标进行评估。[结果]结果表明本试剂盒对尿液中β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、磺胺类和林可胺类这6类抗菌药都敏感,检测限达到肾脏最大残留限量要求,并且其他性能指标都达到残留检测方法的标准。[结论]本试剂盒能够可靠地检测出尿液中β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、磺胺类和林可胺类这6大类抗菌药的残留,从而能够以宰前残留检测代替宰后残留检测,避免销毁大量抗菌药残留过量的动物源性食品带来的巨大经济损失。

关键词：抗菌药残留检测微生物抑制法嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC12980 尿液

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CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激损伤中的作用

CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘爱梅潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因... 详细信息

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因此,本研究的目的是探索多西环素和阿奇霉素致肝损害的潜在分子机制,为预防和治疗这两种药物联合使用导致的肝损伤提供重要的参考价值。[方法]本研究以L02细胞为研究模型模型,单一和联合药物孵育细胞后,通过探索qPCR、Western blot检测代谢酶CYP1A1和CYP1B1,以及氧化应激基因HSP70、HO-1、NQO1、GCLC、AHR、ARNT、PXR和Nrf2的表达;用氧化应激指标检测试剂盒(8-OHdG、MDA、GSH、SOD、LDH和ROS)的变化;并且超表达和干扰CYP1A1和CYP1B1后加入药物,检测代谢酶在药物诱导的氧化应激中的作用。[结果]实验结果表明,多西环素和阿奇霉素以及联合使用可增加代谢酶CYP1A1和CYP1B1的表达,且氧化应激基因和指标也增加。同时,通过超表达或干扰CYP1A1和CYP1B1后加药,更加重了细胞的损伤,表明CYP1A1和CYP1B1介导了多西环素和阿奇霉素的氧化损伤。[结论]综上所述,本研究发现多西环素和阿奇霉素以及联合使用可通过CYP1A1和CYP1B1表达水平的增加而引起药物的氧化损伤,这将为多西环素和阿奇霉素以及联合用药时引起的药物性氧化肝损伤的治疗和预防提供参考价值。

关键词：多西环素阿奇霉素氧化损伤 CYP450酶

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PGC-1α在T-2毒素引起的氧化应激中的作用研究

PGC-1α在T-2毒素引起的氧化应激中的作用研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：郭璞彭大鹏刘振利谢长清袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中毒性最强的毒素,长期威胁畜禽动物和人类的健康。其毒素作用主要包括诱导机体产生氧化应激,诱导细胞凋亡等。目前T-2毒素细胞凋亡通路的研究比较充分,然而T-2毒素引起的氧化应激的机制尚未得到较好的... 详细信息

[目的]T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中毒性最强的毒素,长期威胁畜禽动物和人类的健康。其毒素作用主要包括诱导机体产生氧化应激,诱导细胞凋亡等。目前T-2毒素细胞凋亡通路的研究比较充分,然而T-2毒素引起的氧化应激的机制尚未得到较好的阐释。PGC-1α作为转录共激活因子,与线粒体生物合成与代谢及抗氧化应激密切相关。但该基因在T-2毒素引起的氧化应激中发挥的作用尚不明确。[方法]本研究以大鼠脑垂体瘤细胞(GH3细胞)为模型,验证PGC-1α是否在T-2毒素作用下参与氧化应激的调控。通过RNAi和过表达试验进一步验证其相互作用方式。[结果]在T-2毒素作用GH3细胞后10,40 nMT-2毒素处理GH3细胞24小时后,PGC-1α的表达水平分别达到了1.60±0.07和12.35±0.59倍,Tfam的表达水平分别达到了1.34±0.18和2.98±0.15倍,说明10,40 nM T-2毒素显著增加了GH3细胞中PGC-1α和Tfam基因表达水平。同时western blot试验结果显示,10,40 nM T-2毒素处明显增加了GH3细胞中PGC-1α和TFAM蛋白表达水平。RNAi试验显示,GH3细胞在不干扰PGC-1α时,Tfam的基因水平显著增加。但是在干扰了PGC-1α后,Tfam的基因水平显著降低。Western blot结果与基因表达结果相似。此外,干扰了PGC-1α后,检测到抗氧化因子SOD和GSH-Px的活力都上升。[结论]PGC-1α在T-2毒素处理的GH3细胞中高表达,其在调控GH3细胞中线粒体转录因子Tfam的表达起着关键性作用,是细胞抵抗氧化应激的一个重要的因子,为后期进行以PGC-1α为靶点的抗氧化应激靶向研究奠定了基础。

关键词： PGC-1α 氧化应激 T-2毒素

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T-2毒素的垂体毒性机制研究

T-2毒素的垂体毒性机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王旭黄玲利程古月袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)、农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

T-2毒素是镰刀菌(Fusarium)产生的次级代谢产物,也是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种。其在自然界中分布非常广泛,大麦、小麦、燕麦、黑麦和玉米,以及储存的谷物均为T-2毒素的污染对象。T-2毒素对食品动物的一个重要毒性作用是生... 详细信息

T-2毒素是镰刀菌(Fusarium)产生的次级代谢产物,也是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种。其在自然界中分布非常广泛,大麦、小麦、燕麦、黑麦和玉米,以及储存的谷物均为T-2毒素的污染对象。T-2毒素对食品动物的一个重要毒性作用是生长抑制,微量T-2毒素即可导致动物体重显著下降,经济损失严重,然而其毒性机制尚待深入开展。本研究发现微量T-2毒素能进入大脑,引起垂体病理损伤,导致垂体合成和分泌的生长激素(GH)水平明显下降。以GH3细胞和小鼠为模型,从炎性因子、氧化应激、信号通路角度,结合体内和体外试验揭示T-2毒素对垂体的损伤作用及其机制。研究表明,T-2毒素可下调GH合成中关键上游转录因子Pit-1基因表达和降低GH基因mRNA含量,导致GH释放异常。细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性升高,细胞内NO大量释放,破坏线粒体膜,激活caspase信号通路,引起GH合成与分泌异常。基于基因组和蛋白组的研究表明,T-2毒素作用于GH3细胞后激活PKR和HCK激酶,诱发核糖体应激反应,激活JNK通路,同时发现氨酰-tRNA合酶降低、蛋白二硫键异构酶,从而抑制GH合成;激活内质网应激晚期反应,内质网分子伴侣下调表达,导致GH生成量降低;干扰囊泡转运过程,降低GH分泌。基于基因组学结果,研究转录因子AKNA介导的T-2毒素所致生长抑制机理,发现T-2毒素可以诱导PKA/CREB和NF-κB/p65信号通路中关键蛋白CREB和p65蛋白的磷酸化,促使磷酸化p65进入细胞核,核内磷酸化的CREB和p65通过直接与AKNA启动子结合抑制AKNA的转录活性,使AKNA基因表达下调,引起GH和炎性因子表达水平显著下调,表明AKNA参与调控GH和炎性因子的表达,为T-2毒素介导的GH缺乏症提供了新的下游分子靶标。为揭示T-2毒素所致氧化应激的机制,从线粒体氧化应激、线粒体结构和功能变化、呼吸链核心铁硫蛋白亚基Ndufs3和线粒体生物合成调控因子NRF-2在T-2毒素引起的线粒体功能变化中的作用、线粒体自噬的角度揭示活性氧、线粒体损伤及自保护机制。综上所述,炎性因子高表达及线粒体损伤是T-2毒素所致垂体毒性的重要机制,该研究将为拮抗T-2毒素所致动物生长提供依据。

关键词： T-2毒素线粒体垂体毒性氧化应激

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鸡毒支原体对大环内酯类抗生素的耐药判定标准研究现状

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中国兽医学报 2018年第12期38卷 2414-2423,2431页

作者：黄安雄王淑歌李俊黄玲利王旭刘振利郝海红袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室农业部兽药残留检测重点实验室国家兽药安全评价实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室

鸡的慢性呼吸道疾病是鸡常发的一种传染病,对家禽养殖业有非常大的危害,其致病菌主要是鸡毒支原体。大环内酯类抗生素是治疗鸡毒支原体病的常用药物之一,但由于不规范用药的问题,致使鸡毒支原体对大环内酯类抗生素产生了一定的耐药性,... 详细信息

鸡的慢性呼吸道疾病是鸡常发的一种传染病,对家禽养殖业有非常大的危害,其致病菌主要是鸡毒支原体。大环内酯类抗生素是治疗鸡毒支原体病的常用药物之一,但由于不规范用药的问题,致使鸡毒支原体对大环内酯类抗生素产生了一定的耐药性,而且呈现越来越严重的趋势。为了指导临床合理用药,进而有效控制耐药性问题,制定耐药判定标准是必要条件。现综述了鸡毒支原体对大环内酯类抗生素耐药判定标准的研究现状,根据美国和欧盟耐药判定标准制定程序,为我国制定鸡毒支原体对大环内酯类抗生素的耐药判定标准奠定基础。

关键词：鸡毒支原体大环内酯类耐药判定标准

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基于活性-结构的解热镇痛药物先导化合物的研究

基于活性-结构的解热镇痛药物先导化合物的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陆启荣潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)、农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]畜禽的炎症、疼痛与发热给畜牧业带来了巨大的损失,但目前中国兽医药典批准使用的非甾体类抗炎药很少,且均存在一定程度的胃肠道毒性以及部分的心血管风险。因此本研究拟从扎托布洛芬(ZPF)及其主要代谢物与COX-1和COX-2酶活性以及... 详细信息

[目的]畜禽的炎症、疼痛与发热给畜牧业带来了巨大的损失,但目前中国兽医药典批准使用的非甾体类抗炎药很少,且均存在一定程度的胃肠道毒性以及部分的心血管风险。因此本研究拟从扎托布洛芬(ZPF)及其主要代谢物与COX-1和COX-2酶活性以及与COX-2相互作用的活性位点的角度,诠释ZPF和代谢物活性差异的原因,以期能够从活性位点的角度提高非甾体抗炎药的活性并减少毒副作用,进而设计新型先导化合物,为高效、低毒兽用解热镇痛药的开发奠定坚实基础。[方法]本实验以ZPF为研究对象,合成并鉴定其主要代谢物M-2,M-3和M-5。应用COX-1和COX-2抑制筛选试剂盒对ZPF及其主要代谢物进行活性抑制实验;SYBYL软件研究ZPF及其主要代谢物对COX-2关键性活性位点的分析,依据SIFT和Polyphen网站对活性位点的突变位点进行分析并构建其COX-2的野生型,突变型真核表达载体。利用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)建立COX-2野生型和突变型抑制剂筛选模型,以花生四烯酸为底物,PGE2放免试剂盒测定COX-2野生型和突变型产生的PGE2的活性,进一步确定其主要的活性位点,并应用SYBYL软件设计并模拟新型的解热镇痛先导化合物。[结果]结果显示,以ZPF为原料,成功合成出其主要代谢物M-2,M-3和M-5。ZPF及其主要代谢物对COX-2抑制活性大小为ZPF>M-2>M-5>M-3,COX-1抑制活性大小为ZPF>M-5>M-3>M-2。SYBYL联合SIFT和Polyphen分析出ZPF及主要代谢物对COX-2的关键性活性位点为ARG120,TYR355和SER530。CHO模型进一步证明TYR355和SER530为COX-2的关键性位点。综合分析显示母核的硫氧化与SER530形成的氢键有助于进一步抑制COX-2的酶活性,而羰基还原形成的羟基与SER530形成的氢键,丧失了抑制COX-2的酶活性功能。推测在硫氧化的对位更换成比其极性弱的基团有助于提高活性,并应用SYBYL进行了先导化合物设计。[结论]综上所述,TYR355和SER530为ZPF和M-2抑制COX-2的关键性位点,M-2母核的硫氧化以及其对位更换成极性弱的基团有助于提高COX-2抑制活性,因此新型解热镇痛先导化合物的研发可基于SYBYL软件并依据关键活性位点进行设计。

关键词：扎托布洛芬代谢物活性位点结构先导化合物

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