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中国油料作物学报 2024年第1期46卷 201-207页

作者：梁美娟赵秀兰古皓华岳晓凤唐晓倩李慧张文李友国张奇李培武中国农业科学院油料作物研究所/农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室/农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室/农业农村部生物毒素检测重点实验室/国家农业检测基准实验室(生物毒素) 湖北武汉430062 湖北洪山实验室湖北武汉430062 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

建立了测定花生和大豆根瘤菌生物固氮能力的毛细管顶空气相色谱法,利用固氮酶还原乙炔气体为乙烯的经典方法,实现了高浓度乙炔中痕量乙烯的高灵敏分析。利用顶空进样方式,分离柱采用HP-PLOT Q毛细管色谱柱,程序升温,采用氢离子化检测器... 详细信息

建立了测定花生和大豆根瘤菌生物固氮能力的毛细管顶空气相色谱法,利用固氮酶还原乙炔气体为乙烯的经典方法,实现了高浓度乙炔中痕量乙烯的高灵敏分析。利用顶空进样方式,分离柱采用HP-PLOT Q毛细管色谱柱,程序升温,采用氢离子化检测器,对乙烯标准气体进行了定量分析。乙烯检测范围宽为0.125~30000μmol/mol,相关系数为0.9996,检测限(LOD)为0.0341μmol/mol,检出限优于已有报道。该方法检测精密度好,5次检测的相对标准偏差为2.32%。乙烯样品的回收率为95.8%~110%,相对标准偏差为1.54%~3.47%。同时,对乙烯和实际样品进行检测时,与GDX-502填充柱的传统气相色谱法的测定结果一致,表明所建立的乙烯顶空气相色谱法具有较高的可靠性。此外,该方法分析时间缩短至3 min,利用自动进样方式,检测通量大,适用于花生和大豆根瘤菌中固氮能力的快速准确测定,能满足花生和大豆生物固氮研究中乙炔还原法测定乙烯的需求。

关键词：顶空气相色谱毛细管色谱柱乙炔还原法乙烯花生大豆

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ARC-BBBE在长江流域花生产区试验示范效果

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中国油料作物学报 2024年第6期46卷 1357-1363页

作者：赵秀兰吉萍萍洪宇轩古皓华蔡航温茗博朱嘉铭岳晓凤梁美娟唐晓倩李友国张奇李培武中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室/农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室/农业农村部生物毒素检测重点实验室/国家农业检测基准实验室(生物毒素) 湖北武汉430062 湖北洪山实验室湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

我国长江流域花生生产易遭受黄曲霉菌侵染及黄曲霉毒素污染。在团队前期研制了微生物菌剂ARCBBBE,2022年在长江流域花生产区(湖北、湖南、江西、四川)四省开展ARC-BBBE花生生产示范技术应用,研究结果显示:在长江流域花生产区,施用ARC-B... 详细信息

我国长江流域花生生产易遭受黄曲霉菌侵染及黄曲霉毒素污染。在团队前期研制了微生物菌剂ARCBBBE,2022年在长江流域花生产区(湖北、湖南、江西、四川)四省开展ARC-BBBE花生生产示范技术应用,研究结果显示:在长江流域花生产区,施用ARC-BBBE对土壤中黄曲霉菌丰度的抑制率范围为36.87%~94.70%,平均抑制率为63.02%;同时,ARC-BBBE可增强花生的固氮酶活性,增加花生根瘤的数量以及重量,增加花生植株的生物量,花生增产率范围为7.23%~53.85%,平均增产率为20.58%。综合示范结果表明:花生施用ARC-BBBE可作为一项增加花生单产、提升花生产能、保障花生产业健康发展的栽培技术。

关键词：花生 ARC-BBBE 长江流域花生产区黄曲霉黄曲霉毒素固氮酶活性

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独岛枝芽胞杆菌MCCC 1A00493产生的4-乙烯基苯酚鉴定和作用南方根结线虫特性研究

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微生物学报 2022年第1期62卷 346-356页

作者：黄典余豪陈稳程万里邵宗泽张吉斌华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 自然资源部第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005

【目的】根结线虫危害严重,难防难控,前期研究发现一株深海来源的独岛枝芽胞杆菌(Virgibacillus dokdonensis)MCCC 1A00493对南方根结线虫具有良好的体外拮抗效果,本研究分离鉴定菌株发酵液中杀线虫活性物质,对其作用线虫的多种模式进... 详细信息

【目的】根结线虫危害严重,难防难控,前期研究发现一株深海来源的独岛枝芽胞杆菌(Virgibacillus dokdonensis)MCCC 1A00493对南方根结线虫具有良好的体外拮抗效果,本研究分离鉴定菌株发酵液中杀线虫活性物质,对其作用线虫的多种模式进行研究,为菌株有效控制植物病原线虫的应用奠定理论基础。【方法】采用硅胶柱层析和半制备高效液相色谱对独岛枝芽胞杆菌发酵上清液中的杀线虫活性物质进行分离纯化,采用液相色谱质谱联用、核磁共振对纯化物进行结构鉴定;并对其趋避、诱杀、熏杀和卵孵化抑制活性进行检测。【结果】结构鉴定确定独岛枝芽胞杆菌MCCC 1A00493发酵液中分离的杀线虫活性物质为4-乙烯基苯酚。4-乙烯基苯酚对线虫具有触杀、熏杀、卵孵化抑制和高浓度驱避低浓度引诱活性,15μg/mL 4-乙烯基苯酚72 h触杀线虫校正死亡率为71.23%±9.06%;20 mg/mL 4-乙烯基苯酚24 h熏杀线虫死亡率达100%;100μg/mL 4-乙烯基苯酚作用线虫卵10 d后,卵孵化抑制率达66.2%;在琼脂平板上,10 mg/mL的4-乙烯基苯酚对线虫有驱避作用,1 mg/mL的4-乙烯基苯酚对线虫有引诱作用;在Pluronic凝胶中,25 mg/mL的4-乙烯基苯酚驱避线虫,5 mg/mL和10 mg/mL的4-乙烯基苯酚引诱并杀死线虫。【结论】首次报道4-乙烯基苯酚对植物病原线虫具有多种作用模式,尤其是高浓度下对根结线虫具有趋避作用而低浓度下具有诱杀作用的新特性。因此,4-乙烯基苯酚可以作为一种潜在的生物杀线虫剂。

关键词：南方根结线虫独岛枝芽胞杆菌 4-乙烯基苯酚杀线虫活性作用模式

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不同百合品种的花和叶片对灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的抗性评价

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安徽农业大学学报 2024年第2期51卷 230-238页

作者：张莉雪张紫薇宋云泽陈小林段枫鲁思勤刘雨菡余晓敏朱钰宁国贵何燕红华中农业大学园艺林学学院果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室武汉430070 华中农业大学花卉研究所武汉430070 华中农业大学植物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

评价不同百合品种叶片和花对灰霉病的抗性,分析叶片和花的灰霉抗性相关性,以期为评估百合对灰霉病的抗性及百合抗病育种提供支持。以A、O、L、LA和OT等5个系列的28个百合品种为材料,利用分离鉴定的灰葡萄孢菌,采用离体菌丝块直接接种和... 详细信息

评价不同百合品种叶片和花对灰霉病的抗性,分析叶片和花的灰霉抗性相关性,以期为评估百合对灰霉病的抗性及百合抗病育种提供支持。以A、O、L、LA和OT等5个系列的28个百合品种为材料,利用分离鉴定的灰葡萄孢菌,采用离体菌丝块直接接种和刺伤接种法,对百合的叶片和花瓣进行灰霉病抗性评价,并根据叶和花的病斑直径进行相关性分析。结果表明,同一品种百合叶片对不同灰葡萄孢菌株抗性存在差异,不同品种间百合叶片的抗性差异较大。其中白色帝王和眼线这2个品种属于高感品种;红星、丝雨、桃色事件等8个品种属于易感品种;地魔星、秘密之吻、穿梭等7个品种属于中抗品种;索邦、微微安娜、布林迪西等6个品种属于高抗品种;依兰、西伯利亚、俯视等5个品种属于免疫品种。对叶片进行刺伤,可导致灰霉菌侵染性增强。花瓣接种结果显示大部分百合花瓣比叶片更容易受到侵染,但是百合花和叶片对灰葡萄孢的敏感性没有显著相关性;红星、丝雨、桃色事件等13个品种的花和叶对灰葡萄孢菌的敏感性一致;地魔星、秘密之吻、布林迪西等14个品种的花比叶对灰葡萄孢菌更敏感;白色帝王的叶片较花对灰葡萄孢菌更敏感。组织损伤会降低百合对灰霉病的抗性,百合叶片与花对灰霉菌敏感性无显著相关性。依兰、微微安娜、西伯利亚和红色宫殿4个高抗品种可为百合灰霉病抗性资源合理利用以及品种选育提供参考。

关键词：百合品种灰葡萄孢抗性

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外源糖原调控猪链球菌基因表达的转录组分析

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微生物学通报 2022年第5期49卷 1690-1704页

作者：谭美芳李海琴曾艳兵张帆帆杨群谭佳方绍培吴诚诚饶煜玲周锐江西省农业科学院畜牧兽医研究所江西南昌330200 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

【背景】碳水化合物的利用与猪链球菌在宿主体内的定殖和致病性密切相关。感染期间,宿主细胞释放的糖原可能是猪链球菌重要的碳源。【目的】从转录组学角度解析猪链球菌全基因转录水平对外源糖原诱导的响应,特别是毒力基因。【方法】将... 详细信息

【背景】碳水化合物的利用与猪链球菌在宿主体内的定殖和致病性密切相关。感染期间,宿主细胞释放的糖原可能是猪链球菌重要的碳源。【目的】从转录组学角度解析猪链球菌全基因转录水平对外源糖原诱导的响应,特别是毒力基因。【方法】将猪链球菌2型强毒株分别用糖原和葡萄糖进行液体培养,通过高通量转录组测序,比较分析糖原对猪链球菌代谢通路和毒力基因差异表达的影响,并通过体外试验和攻毒试验进行验证。【结果】猪链球菌在糖原培养基中生长良好。转录组数据显示,糖原培养条件下的猪链球菌共有908个基因差异表达,基因组占比46.07%,其中501个基因上调表达,407个基因下调表达。富集分析结果表明,糖原影响了猪链球菌广泛的基础代谢过程,但糖酵解途径保持稳定。30个毒力基因的表达水平发生变化,重要的毒力因子SLY、ApuA、ArcABC等的基因转录水平大幅度升高(倍数>20)。糖原培养后的猪链球菌的溶血活性、黏附和侵入能力显著上升,对受试动物的毒力增强,证实猪链球菌能够响应糖原诱导,糖原能调控猪链球菌的致病性。【结论】外源糖原的利用显著影响了猪链球菌的基因表达谱,这种对碳源的响应是细菌对不断变化的生存环境的适应性,也反映了细菌对碳水化合物的利用与其致病性之间的紧密联系。

关键词：猪链球菌碳水化合物糖原转录组毒力基因

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三酮类除草剂微生物降解的研究进展

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微生物学通报 2023年第2期50卷 845-856页

作者：李情情马青云阮志勇中国农业科学院农业资源与农业区划研究所/CAAS-CIAT可持续农业联合实验室北京100081 中国农业科学院研究生院北京100081 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 西藏农牧学院资源与环境学院西藏林芝860000

三酮类除草剂是一类高效、广谱、高选择性的除草剂,能够有效地防除玉米地多种阔叶杂草和禾本科杂草。该类除草剂在土壤、水体中残留,易造成地表和地下水污染。有关研究表明,微生物降解有望成为解决该类除草剂残留的有效措施。本文分析了... 详细信息

三酮类除草剂是一类高效、广谱、高选择性的除草剂,能够有效地防除玉米地多种阔叶杂草和禾本科杂草。该类除草剂在土壤、水体中残留,易造成地表和地下水污染。有关研究表明,微生物降解有望成为解决该类除草剂残留的有效措施。本文分析了2种三酮类除草剂带来的生态效应,总结了已报道的微生物降解资源,简述了降解基因/酶的研究进展及可能的降解途径,为深入研究三酮类除草剂的生物降解提供一定的信息支撑。

关键词：三酮类除草剂对羟基苯基丙酮酸双氧化酶生态效应微生物降解

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花生紫色酸性磷酸酶基因家族的鉴定及表达分析

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中国油料作物学报 2022年第3期44卷 522-531页

作者：杜普旋刘浩胡冬秀陈小平洪彦彬李友国华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 广东省农业科学院作物研究所国家油料作物改良中心南方分中心广东省农作物遗传改良重点实验室广东广州510640

紫色酸性磷酸酶(purple acid phosphatase,PAP)是一类金属磷酸酯酶,参与植物的磷素利用、碳代谢、细胞壁合成等多种生理功能,尤其是对磷缺乏的适应。本研究利用生物信息学手段在花生(Arachis hypogaea L.)全基因组水平上对PAP基因家族... 详细信息

紫色酸性磷酸酶(purple acid phosphatase,PAP)是一类金属磷酸酯酶,参与植物的磷素利用、碳代谢、细胞壁合成等多种生理功能,尤其是对磷缺乏的适应。本研究利用生物信息学手段在花生(Arachis hypogaea L.)全基因组水平上对PAP基因家族进行了鉴定,并对其系统进化关系、保守结构域、基因结构以及它们在22个组织中的表达模式进行了分析。结果表明:花生基因组中有39个AhPAP基因,氨基酸序列长度为205~905,等电点大多数都小于7,蛋白质C端均含有金属磷酸酶结构域。以花生、拟南芥、水稻、苜蓿共74个PAP蛋白构建的系统发育树可分为四组,每组中都含有来自不同物种的PAP,并没有因为物种差异而各自聚为一类。AhPAP基因家族中部分成员的表达具有组织特异性,arahy.P03NME、***6C在根瘤中表达量最高,而它们在其他组织中表达量较低或未检测到表达。本研究为揭示AhPAP基因家族在花生中的生物学功能奠定了基础。

关键词：花生紫色酸性磷酸酶生物信息学基因家族

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拟康宁木霉T-51菌株发酵液对灰葡萄孢的抑菌活性

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植物保护 2021年第1期47卷 74-78,83页

作者：尤佳琪李国庆上海市农业科学院园艺研究所上海201106 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

拟康宁木霉菌株T-51是从土壤中分离得到的一株优秀生防菌株,在前期的研究与应用中表现出对番茄灰霉病的良好防效。本文研究了T-51菌株的PDB发酵液对灰葡萄孢的抑菌活性,结果表明T-51发酵液在0.5%的低浓度下的抑菌率达到52.1%,与高浓度(1... 详细信息

拟康宁木霉菌株T-51是从土壤中分离得到的一株优秀生防菌株,在前期的研究与应用中表现出对番茄灰霉病的良好防效。本文研究了T-51菌株的PDB发酵液对灰葡萄孢的抑菌活性,结果表明T-51发酵液在0.5%的低浓度下的抑菌率达到52.1%,与高浓度(10%)发酵液的抑菌率(59.7%)没有显著差异。当发酵液浓度下降为0.05%时失去抑菌活性。T-51摇培至第5天时的发酵液的抑菌活性稳定。T-51发酵液中的抑菌物质对高温不敏感,沸水浴处理10 min后抑菌活性没有明显降低。T-51发酵液pH为3.3,呈酸性,当调节pH至7时,发酵液抑菌活性从57.89%下降到46.61%。T-51发酵液能够显著抑制灰葡萄孢侵染番茄叶片后产生的病斑大小,接种后叶片病斑直径比对照减小53.9%。

关键词：拟康宁木霉T-51 灰葡萄孢生物防治抗真菌活性

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牛无绿藻乳腺炎的研究现状

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动物医学进展 2023年第1期44卷 122-126页

作者：张海艳许顺鑫陈秋慧李政志严蕊胡秀秀郭爱珍胡长敏陈洁武汉市农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430208 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 长江大学动物科学学院湖北荆州434025

牛无绿藻是引起牛乳腺炎的一种重要病原,它在全世界范围内广泛存在,并且给奶牛养殖行业造成了巨大的经济损失。牛无绿藻耐高温,可与其他病原菌共同感染牛乳腺,对其使用巴氏消毒法杀灭后仍有部分存活。牛无绿藻乳腺炎在夏季高温季节多发... 详细信息

牛无绿藻是引起牛乳腺炎的一种重要病原,它在全世界范围内广泛存在,并且给奶牛养殖行业造成了巨大的经济损失。牛无绿藻耐高温,可与其他病原菌共同感染牛乳腺,对其使用巴氏消毒法杀灭后仍有部分存活。牛无绿藻乳腺炎在夏季高温季节多发,它的发病率高、临床症状缺乏特异性、病原学检查易被忽视,目前关于它的有效治疗手段匮乏。为提高人们对牛无绿藻乳腺炎的认识,论文从牛无绿藻乳腺炎的病原学、流行病学、发病机制、临床症状、病理变化、诊断、防治与展望等方面进行综述,希望能为牛无绿藻乳腺炎的临床诊治及进一步深入的科学研究拓展思路。

关键词：奶牛乳腺炎牛无绿藻发病机制诊治

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2株Cluster 3鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及其致病性研究

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中国畜牧兽医 2025年第4期52卷 1750-1762页

作者：陈作鑫陈宇欣潘彦林黄允真李林林董嘉文向勇徐志宏孙敏华张俊勤黄淑坚廖明广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省动物疫病野外科学观测研究站广州510640 佛山大学生命科学与工程学院佛山528225 仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性,为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、... 详细信息

【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性,为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、透射电镜观察进行鉴定,并测定分离株的生长曲线。对分离株完成全基因组扩增后,使用ModelFinder、MrBayes等软件对其进行遗传进化分析,并对分离株的E蛋白进行氨基酸突变位点分析;测定分离株病毒滴度后,攻毒30日龄鹅,观察鹅各组织器官临床剖检病变及组织病理变化,使用实时荧光定量PCR检测鹅各组织脏器中的病毒载量。【结果】RT-PCR成功鉴定得到2份TMUV核酸阳性病料,接种至BHK-21细胞后,60 h即可观察到明显病变。将3代病毒液IFA检测可观察到明显红色荧光,透射电镜可观察到直径约50 nm、有囊膜的病毒粒子。从发病鹅肝脏组织成功分离得到2株TMUV,分别命名为JM3与JM1205。病毒一步生长曲线结果显示,JM3和JM1205株分别在培养60和48 h时病毒滴度最高。全基因扩增结果显示,JM3和JM1205株基因组全长均为10 994 bp。遗传进化树显示,JM3和JM1205株均为Cluster 3 TMUV成员,与Cluster 3 TMUV鸡源分离株CTLN遗传距离最近。氨基酸突变位点分析结果显示,与GenBank中最早上传的TMUV毒株MM1775株相比,JM3和JM1205株的E蛋白存在多个氨基酸位点突变,其中V157A突变可能与TMUV毒力增强相关。攻毒后1 d后鹅开始出现排绿色稀粪症状,攻毒后7 d开始出现神经症状。JM3组在攻毒后14 d仍持续排毒,JM1205组排毒持续至攻毒后11 d。攻毒后6 d,鹅出现体重增长减缓、下降的情况,至10 d开始恢复缓慢上升。剖检发现攻毒组鹅出现不同程度的脾脏肿大、胰脏坏死、肝脏发白、大脑充血;此外JM3株攻毒组鹅出现卵巢出血、心包积液;JM1205株攻毒组鹅出现心脏出血。攻毒后各时间点脾脏病毒载量均最高,在攻毒后3 d达到峰值,随后逐渐下降。【结论】本研究自广东地区养鹅场分离得到2株Cluster 3 TMUV:JM3和JM1205,2株分离株均对鹅有致病性,可在鹅体内多个器官复制,引起鹅共济失调、体重下降等症状。

关键词：坦布苏病毒(TMUV) 分支3 分离鉴定鹅致病性

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