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中国兽医科学 2007年第11期37卷 964-968页

作者：石碧崔耀文贾凡金卉万云蔡旭旺方刚陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 武汉水产科学研究所湖北武汉430065

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行... 详细信息

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究.结果表明,两种检测方法的特异性良好,但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍,二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79.7%、55.2%和65.3%.用这两种方法检测了320份临床送检猪血清,IHA和ELISA的阳性率分别为40%和59%.结果证实,这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查.

关键词：副猪嗜血杆菌荚膜多糖间接血凝试验间接ELISA

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独岛枝芽胞杆菌MCCC 1A00493产生的4-乙烯基苯酚鉴定和作用南方根结线虫特性研究

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微生物学报 2022年第1期62卷 346-356页

作者：黄典余豪陈稳程万里邵宗泽张吉斌华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 自然资源部第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005

【目的】根结线虫危害严重,难防难控,前期研究发现一株深海来源的独岛枝芽胞杆菌(Virgibacillus dokdonensis)MCCC 1A00493对南方根结线虫具有良好的体外拮抗效果,本研究分离鉴定菌株发酵液中杀线虫活性物质,对其作用线虫的多种模式进... 详细信息

【目的】根结线虫危害严重,难防难控,前期研究发现一株深海来源的独岛枝芽胞杆菌(Virgibacillus dokdonensis)MCCC 1A00493对南方根结线虫具有良好的体外拮抗效果,本研究分离鉴定菌株发酵液中杀线虫活性物质,对其作用线虫的多种模式进行研究,为菌株有效控制植物病原线虫的应用奠定理论基础。【方法】采用硅胶柱层析和半制备高效液相色谱对独岛枝芽胞杆菌发酵上清液中的杀线虫活性物质进行分离纯化,采用液相色谱质谱联用、核磁共振对纯化物进行结构鉴定;并对其趋避、诱杀、熏杀和卵孵化抑制活性进行检测。【结果】结构鉴定确定独岛枝芽胞杆菌MCCC 1A00493发酵液中分离的杀线虫活性物质为4-乙烯基苯酚。4-乙烯基苯酚对线虫具有触杀、熏杀、卵孵化抑制和高浓度驱避低浓度引诱活性,15μg/mL 4-乙烯基苯酚72 h触杀线虫校正死亡率为71.23%±9.06%;20 mg/mL 4-乙烯基苯酚24 h熏杀线虫死亡率达100%;100μg/mL 4-乙烯基苯酚作用线虫卵10 d后,卵孵化抑制率达66.2%;在琼脂平板上,10 mg/mL的4-乙烯基苯酚对线虫有驱避作用,1 mg/mL的4-乙烯基苯酚对线虫有引诱作用;在Pluronic凝胶中,25 mg/mL的4-乙烯基苯酚驱避线虫,5 mg/mL和10 mg/mL的4-乙烯基苯酚引诱并杀死线虫。【结论】首次报道4-乙烯基苯酚对植物病原线虫具有多种作用模式,尤其是高浓度下对根结线虫具有趋避作用而低浓度下具有诱杀作用的新特性。因此,4-乙烯基苯酚可以作为一种潜在的生物杀线虫剂。

关键词：南方根结线虫独岛枝芽胞杆菌 4-乙烯基苯酚杀线虫活性作用模式

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外源糖原调控猪链球菌基因表达的转录组分析

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微生物学通报 2022年第5期49卷 1690-1704页

作者：谭美芳李海琴曾艳兵张帆帆杨群谭佳方绍培吴诚诚饶煜玲周锐江西省农业科学院畜牧兽医研究所江西南昌330200 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

【背景】碳水化合物的利用与猪链球菌在宿主体内的定殖和致病性密切相关。感染期间,宿主细胞释放的糖原可能是猪链球菌重要的碳源。【目的】从转录组学角度解析猪链球菌全基因转录水平对外源糖原诱导的响应,特别是毒力基因。【方法】将... 详细信息

【背景】碳水化合物的利用与猪链球菌在宿主体内的定殖和致病性密切相关。感染期间,宿主细胞释放的糖原可能是猪链球菌重要的碳源。【目的】从转录组学角度解析猪链球菌全基因转录水平对外源糖原诱导的响应,特别是毒力基因。【方法】将猪链球菌2型强毒株分别用糖原和葡萄糖进行液体培养,通过高通量转录组测序,比较分析糖原对猪链球菌代谢通路和毒力基因差异表达的影响,并通过体外试验和攻毒试验进行验证。【结果】猪链球菌在糖原培养基中生长良好。转录组数据显示,糖原培养条件下的猪链球菌共有908个基因差异表达,基因组占比46.07%,其中501个基因上调表达,407个基因下调表达。富集分析结果表明,糖原影响了猪链球菌广泛的基础代谢过程,但糖酵解途径保持稳定。30个毒力基因的表达水平发生变化,重要的毒力因子SLY、ApuA、ArcABC等的基因转录水平大幅度升高(倍数>20)。糖原培养后的猪链球菌的溶血活性、黏附和侵入能力显著上升,对受试动物的毒力增强,证实猪链球菌能够响应糖原诱导,糖原能调控猪链球菌的致病性。【结论】外源糖原的利用显著影响了猪链球菌的基因表达谱,这种对碳源的响应是细菌对不断变化的生存环境的适应性,也反映了细菌对碳水化合物的利用与其致病性之间的紧密联系。

关键词：猪链球菌碳水化合物糖原转录组毒力基因

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两株耐铅镉真菌对土壤中铅镉赋存形态及小白菜吸收积累的影响

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环境科学学报 2016年第6期36卷 2095-2102页

作者：兰翔曹霞谭启玲何进孙学成胡承孝华中农业大学资源与环境学院微量元素研究中心武汉430070 新型肥料湖北省工程实验室武汉430070 通辽市农业科学研究院蔬菜研究所通辽028015 华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

通过土培试验,研究接种耐铅镉真菌(产黄头孢霉Cephalosporium chrysogenum和头孢霉Cephalosporium SP.)对灭菌和未灭菌铅镉污染土壤上小白菜生长及铅镉赋存形态的影响.试验结果表明:接种两种耐重金属真菌可以降低或显著降低土壤中交换... 详细信息

通过土培试验,研究接种耐铅镉真菌(产黄头孢霉Cephalosporium chrysogenum和头孢霉Cephalosporium SP.)对灭菌和未灭菌铅镉污染土壤上小白菜生长及铅镉赋存形态的影响.试验结果表明:接种两种耐重金属真菌可以降低或显著降低土壤中交换态铅镉、碳酸盐结合态铅镉和铁锰结合态铅镉,且显著增加土壤中有机结合态铅镉,因此降低了土壤中铅镉的活性;在灭菌和未灭菌铅镉污染土壤上接种两种真菌均能增加或显著增加小白菜的株高和鲜重,其中在未灭土壤中接种产黄头孢霉20 mL小白菜鲜重和株高最大,分别达到6.00 cm和3.22 g·株^(-1),在灭菌土壤上接种产黄头胞霉10 m L小白菜株高和鲜重最大,分别为10.66 cm和11.07 g·株^(-1);接种两种真菌可以显著降低未灭菌土壤上小白菜体内铅镉含量和累积量,在灭菌土壤上接种10 mL产黄头孢霉可以显著降低小白菜铅含量和累积量.

关键词：铅镉真菌生物有效性

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产志贺毒素大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_PHB05的生物学特性及全基因组分析

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中国兽医科学 2018年第4期48卷 428-437页

作者：陈义宝孙二超杨斓童贻刚宋娇阳吴斌农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

产志贺毒素大肠杆菌又称产Vero细胞毒素大肠杆菌，是一种可引起水样腹泻、溶血性尿毒综合征、出血性结肠炎等的人兽共患肠道致病菌。以一株产志贺毒素大肠杆菌为宿主菌，从湖北桌规模化养猪场的污水中分离得到一株烈性产志贺毒素大肠杆... 详细信息

产志贺毒素大肠杆菌又称产Vero细胞毒素大肠杆菌，是一种可引起水样腹泻、溶血性尿毒综合征、出血性结肠炎等的人兽共患肠道致病菌。以一株产志贺毒素大肠杆菌为宿主菌，从湖北桌规模化养猪场的污水中分离得到一株烈性产志贺毒素大肠杆茵噬茵体，命名为vB_EcoM_PHB05。采用双层平板法筛选并纯化得到一株噬菌体．采用透射电镜观察噬菌体颗粒：使用Ion Torrent测序平台进行噬菌体全基因组测序，同时对噬菌体最佳感染复数（MOI）、一步生长曲线、裂解谱等生物学特性进行研究。结果表明，噬茵体vB_EcoM_PHB05在电镜下可见有一正多面体立体对称头部（直径约72nm），含收缩性尾部（尾长约45nm，尾宽20nm）．为肌尾科噬菌体；提取基因组，酶切鉴定该噬菌体核酸类型为双链DNA；其最佳感染复数为0．1；一步生长曲线试验结果显示，噬菌体vB_EcoM_PHB05潜伏期约为20min，平均裂解量约58PFU／cell；基因测序结果表明．该噬菌体全基因组全长147659bp，G＋C含量37．5％。噬菌体vB_EcoM_PHB05除对本身宿主茵产志贺毒素大肠杆菌（Escherichia coli034）产生裂解外，还裂解其它产志贺毒素大肠杆菌和沙门茵。噬菌体vB_EcoM_PHB05为一株广谱烈性噬菌体，其基因组中不合耐药基因及毒力基因，具有开发为抗产志贺毒素大肠杆菌制剂的潜力。

关键词：产志贺毒素大肠杆菌噬菌体分离鉴定生物学特征全基因组测序基因组分析

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梨和苹果腐烂病菌不同培养表型菌株的致病性分析

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植物病理学报 2014年第2期44卷 217-220页

作者：周玉霞张美鑫翟立峰杨晓平曹素芳洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 湖北省农科院果树茶叶研究所武汉430209 甘肃省农科院林果花卉研究所兰州730070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

梨和苹果腐烂病主要发生在中国和日本，该病主要危害梨和苹果树的主干和侧枝。目前国内外对这2种腐烂病菌分类地位和致病性分化的研究十分关注。

关键词：苹果腐烂病菌致病性分化菌株表型培养梨分类地位苹果树

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牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 806-811页

作者：颜邦芬陈锃张书环林祥梅陈颖钰晁彦杰李德学宋念华陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029 湖北省动物疫病诊断中心武汉430064

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可... 详细信息

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gG基因 ELISA 原核表达

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多粘类芽孢杆菌KM2501-1发酵液对番茄根结线虫的防治效果

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应用与环境生物学报 2020年第5期26卷 1046-1050页

作者：曾立程万里余豪陈珍黄典翟义乐吴仁锋张吉斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室微生物农药国家工程研究中心生命科学技术学院武汉430070 武汉市农业科学院蔬菜研究所武汉430065

根结线虫可导致危害严重的土传植物病害,多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)KM2501-1由于对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)具有良好拮抗效果,因而具有开发潜力.通过小型发酵罐对KM2501-1菌株进行发酵生产,并对发酵液原液进... 详细信息

根结线虫可导致危害严重的土传植物病害,多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)KM2501-1由于对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)具有良好拮抗效果,因而具有开发潜力.通过小型发酵罐对KM2501-1菌株进行发酵生产,并对发酵液原液进行温室盆栽和田间小区试验的效果评价.结果显示,发酵液上清对南方根结线虫2龄幼虫具有很好的触杀活性,48 h后线虫的校正死亡率可达93.7%.在温室试验中,与清水对照相比,发酵液处理组番茄根结指数显著降低,在5、10和20 mL/盆范围内随着施用量的加大而不断下降,防治效果最高达到55.9%,接近阿维菌素的防治效果(64.7%).在田间试验中,发酵液处理组番茄根结指数也显著低于清水对照组,防治效果最高达到41.8%,优于阿维菌素的防治效果(29.4%);此外,番茄株高与地上部鲜重也显著增高,其中鲜重提高29.9%.因此,多粘类芽孢杆菌KM2501-1发酵液可有效控制番茄根结线虫病害并促进植株生长,具有开发应用前景.(图2表4参26)

关键词：多粘类芽孢杆菌根结线虫番茄生物防治促生作用

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START家族Rv0164蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达及垂钓互作蛋白

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微生物学报 2020年第3期60卷 464-475页

作者：周盈魏文静江宝怡李金山毕利军佛山科学技术学院生物医学工程系广东佛山528000 广东省结核病控制中心广东广州510630 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 中国科学院生物物理研究所核酸生物学重点实验室北京100101

【目的】START家族蛋白的突变或者错误表达使哺乳动物产生肾上腺皮质增生、乳腺癌和结肠癌等疾病;START家族蛋白是植物发育过程中重要的调节因子;尚未阐明START家族蛋白作为细菌必需基因的作用机制。结核分枝杆菌必需基因Rv0164属于STAR... 详细信息

【目的】START家族蛋白的突变或者错误表达使哺乳动物产生肾上腺皮质增生、乳腺癌和结肠癌等疾病;START家族蛋白是植物发育过程中重要的调节因子;尚未阐明START家族蛋白作为细菌必需基因的作用机制。结核分枝杆菌必需基因Rv0164属于START家族,功能未知,研究Rv0164作用机制将为START家族分子机制增添新理论。【方法】生物信息学方法分析Rv0164序列特征;模式菌耻垢分枝杆菌中表达Rv0164并分析蛋白的细胞定位;Co-immunoprecipitation(Co-IP)方法垂钓Rv0164的相互作用蛋白,质谱鉴定互作蛋白,酵母双杂交和Pull down验证蛋白相互作用。【结果】Rv0164的N端17个氨基酸在分枝杆菌中不保守;Rv0164无信号肽;Rv0164定位在细胞质中,受蛋白降解机制调控,该机制在细菌生长平台期比对数期活性弱;N端缺失使Rv0164在平台期和对数期均不稳定;Rv0164结合多个胞内蛋白。【结论】Rv0164的N端肽段增加了蛋白的稳定性;Rv0164是一个胞内蛋白;Rv0164能够结合细菌生存必需蛋白。

关键词： START家族 Rv0164 蛋白定位蛋白-蛋白相互作用

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应用DTBIA技术快速检测柑橘黄龙病菌研究

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园艺学报 2018年第8期45卷 1605-1612页

作者：丁芳王清廉徐国亮周佳乐曾继吾严翔夏长秀郭俊刘永忠洪霓王国平彭抒昂 John S Hartung 华中农业大学植物科学技术学院、湖北省作物病虫害检测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室武汉430070 广东农业科学院果树研究所广州510640 江西省赣州市柑橘研究所江西赣州341000 云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所云南瑞丽678600 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 美国农业部分子植物病理学实验室马里兰20705

柑橘黄龙病病原菌为韧皮部限制性寄生菌Candidatus Liberibacter,迄今为止尚未成功获得离体纯培养。因此基于特异性抗体的高通量血清学检测技术迄今尚未开发。本实验室前期研究利用异源表达重组黄龙病菌外膜蛋白Omp_(CLas)免疫动物,制... 详细信息

柑橘黄龙病病原菌为韧皮部限制性寄生菌Candidatus Liberibacter,迄今为止尚未成功获得离体纯培养。因此基于特异性抗体的高通量血清学检测技术迄今尚未开发。本实验室前期研究利用异源表达重组黄龙病菌外膜蛋白Omp_(CLas)免疫动物,制备并获得了特异性多克隆抗体(Anti-Omp_(CLas)-Pab)。本研究利用直接组织印迹免疫法(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)技术对获得的多克隆抗体的检测效果进行了初步评价,证实该抗体可以特异性识别中国不同地理来源的柑橘黄龙病菌分离物;柑橘叶柄、叶片中脉、枝条、根部、果梗和种子中均存在黄龙病菌,其中根部和种子中的病菌含量相对较低,枝条和叶片中脉中的含量较高。该多克隆抗体的获得为后续快速检测试剂盒或试纸条的研发奠定了基础。

关键词：柑橘黄龙病菌快速检测 DTBIA 多克隆抗体特异性

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