检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2017年第19期45卷 220-223页

作者：刘威袁芳艳周丹娜刘泽文杨克礼段正赢郭锐蔡行肖少波田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430064

试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1 860、2 547 bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化,纯化的目的蛋白与... 详细信息

试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1 860、2 547 bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化,纯化的目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫新西兰大白兔制备LppT蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得1条特异性蛋白条带,分子质量约为110 ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以可溶形式表达于上清中,纯化的蛋白经SDS-PAGE分离后,用制备的LppT多克隆抗体进行Western Blot检测,结果表明制备的LppT多克隆抗体具有较强的特异性。

关键词：猪肺炎支原体脂蛋白 LppT 多克隆抗体

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我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析

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华北农学报 2011年第3期26卷 204-209页

作者：李彬何孔旺温立斌茅爱华王小敏张雪寒倪艳秀周俊明肖少波陈焕春江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析。结果表明:所有分离毒株... 详细信息

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析。结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同源性为84.6%～100%,与美洲型PRRSV VR-2332的同源性为85.0%～97.2%;与国内分离的高致病性PRRSV的同源性为86.6%～100%。根据ORF3基因的遗传进化分析,这些毒株可分为两个亚群,毒株HZ24与VR-2332及疫苗株亲缘关系较近,其他分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支。同时,该基因编码蛋白的抗原表位和抗原性也发生了变化。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因遗传变异抗原分析

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Slr0351的表达及其在Synechocystis *** 6803中功能的初步研究

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水产学报 2015年第1期39卷 16-23页

作者：马琼郑小江赵开弘周明王胜鹏湖北民族学院生物资源保护与利用湖北省重点实验室湖北民族学院生物科学与技术学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省农业科学院果树茶叶研究所

Slr0351是Synechocystis *** 6803中的未知功能蛋白,其同源蛋白广泛存在于各种蓝藻和铁硫杆菌中。为了确定Slr0351的性质,构建了表达质粒p ET-slr0351,并在***中表达Slr0351。在无氧条件下采用亲和层析纯化方法获得了Slr0351,无氧条件下... 详细信息

Slr0351是Synechocystis *** 6803中的未知功能蛋白,其同源蛋白广泛存在于各种蓝藻和铁硫杆菌中。为了确定Slr0351的性质,构建了表达质粒p ET-slr0351,并在***中表达Slr0351。在无氧条件下采用亲和层析纯化方法获得了Slr0351,无氧条件下Slr0351呈棕红色,在460 nm处有[2Fe-2S]铁硫簇的特征吸收峰,棕红色Slr0351对氧气敏感,能被连二亚硫酸钠还原,由此表明Slr0351为铁硫蛋白。为了获知slr0351的功能,基于基因同源重组交换的原理,利用Kana抗性片段替换slr0351,将Synechocystis *** 6803中的slr0351基因缺失,构建了Δslr0351突变体。利用紫外-可见吸收光谱仪扫描了Δslr0351与野生型Synechocystis *** 6803(WT)的吸收光谱,发现正常光照条件下Δslr0351的叶绿素a仅为WT的68.8%,slr0351的缺失使蓝藻中叶绿素a含量降低。比较了藻细胞在缺乏不同营养元素和不同光照条件下的生长速率差异,与WT相比,Δslr0351具有如下特征:(1)对缺Fe和缺S胁迫条件更敏感;(2)在弱光照条件下Δslr0351的光能利用效率和生长速率更低,该现象与Δslr0351中叶绿素a含量的降低有关。

关键词：蓝藻 Synechocystis sp.PCC 6803 Slr0351 铁硫蛋白

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基于RAPD标记分析葡萄孢属类似真菌Amphobotrys ricini的遗传多样性

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华中农业大学学报 2018年第5期37卷 32-39页

作者：张蕊于琳李国庆张静华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

采用RAPD分子标记对我国15个地区2种寄主植物(铁苋菜和蓖麻)上分离得到的葡萄孢属类似真菌Amphobotrys ricini的81个菌株以及来自美国的1个***菌株进行了遗传多样性分析。结果显示:筛选出的8条RAPD引物共扩增出63条DNA带,其中有49条DNA... 详细信息

采用RAPD分子标记对我国15个地区2种寄主植物(铁苋菜和蓖麻)上分离得到的葡萄孢属类似真菌Amphobotrys ricini的81个菌株以及来自美国的1个***菌株进行了遗传多样性分析。结果显示:筛选出的8条RAPD引物共扩增出63条DNA带,其中有49条DNA条带为多态性条带,多态性条带比率(PPB)为77.8%。多态性信息含量(PIC)值变化范围在0.47~0.84,平均值为0.72,观测等位基因数(Na)的均值为2.000 0、有效等位基因数(Ne)的均值为1.357 7、Nei’s基因多样性指数(H)的均值为0.227 5,Shannon信息指数(I)的均值为0.363 1。UPGMA聚类分析表明,遗传相似系数变化范围在0.55~1.00,以遗传相似系数0.70为阈值时,可分为5个类群(A、B、C、D、E),在遗传相似系数0.74处,B类群又可以分为B1和B2两个亚群。分析结果表明,***群体内遗传变异与菌株地理来源、寄主植物有一定相关。

关键词：葡萄孢属类似真菌 Amphobotrys ricini RAPD 遗传多样性 UPGMA

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环介导等温扩增技术改进及在动物病原检测中的应用

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 633-639页

作者：陈秋慧李政志张海艳严蕊杨晶涵陈洁陈曦陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 武汉市农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法... 详细信息

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法的改进、LAMP与其他技术的联用,以及目前LAMP在动物病原检测方面的应用进行了分析,并展望了LAMP技术的应用前景,以期为同仁提供参考。

关键词：环介导等温扩增环引物 Bst DNA聚合酶 LAMP体系动物病原检测

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仔猪吃初乳前后血清差异蛋白的鉴定和分析

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中国兽医学报 2019年第8期39卷 1577-1580,1590页

作者：徐守兴卢炳州刘华南王国庆吴斌张克山郑海学刘湘涛华中农业大学动物医学学院农业微生物学国家重点实验室预防兽医学湖北省重点实验室湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过SDS-PAGE方法对仔猪吃初乳前后血清进行检测,找到差异蛋白后,利用LC-MS/MS技术对差异蛋白条带进行鉴定,并使用生物信息学手段对鉴定的蛋白进行GO和KEGG分析。结果显示,仔猪吃初乳前后有很明显的差异蛋白条带,共鉴定出338个蛋白,GO和... 详细信息

通过SDS-PAGE方法对仔猪吃初乳前后血清进行检测,找到差异蛋白后,利用LC-MS/MS技术对差异蛋白条带进行鉴定,并使用生物信息学手段对鉴定的蛋白进行GO和KEGG分析。结果显示,仔猪吃初乳前后有很明显的差异蛋白条带,共鉴定出338个蛋白,GO和KEGG分析结果表明,差异蛋白的功能主要和生长发育和免疫保护相关。这为进一步研究初乳调控仔猪生长发育和免疫调控奠定基础。

关键词：仔猪初乳血清差异蛋白鉴定分析

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毛细管顶空气相色谱法高灵敏监测花生大豆根瘤生物固氮能力

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中国油料作物学报 2024年第1期46卷 201-207页

作者：梁美娟赵秀兰古皓华岳晓凤唐晓倩李慧张文李友国张奇李培武中国农业科学院油料作物研究所/农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室/农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室/农业农村部生物毒素检测重点实验室/国家农业检测基准实验室(生物毒素) 湖北武汉430062 湖北洪山实验室湖北武汉430062 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

建立了测定花生和大豆根瘤菌生物固氮能力的毛细管顶空气相色谱法,利用固氮酶还原乙炔气体为乙烯的经典方法,实现了高浓度乙炔中痕量乙烯的高灵敏分析。利用顶空进样方式,分离柱采用HP-PLOT Q毛细管色谱柱,程序升温,采用氢离子化检测器... 详细信息

建立了测定花生和大豆根瘤菌生物固氮能力的毛细管顶空气相色谱法,利用固氮酶还原乙炔气体为乙烯的经典方法,实现了高浓度乙炔中痕量乙烯的高灵敏分析。利用顶空进样方式,分离柱采用HP-PLOT Q毛细管色谱柱,程序升温,采用氢离子化检测器,对乙烯标准气体进行了定量分析。乙烯检测范围宽为0.125~30000μmol/mol,相关系数为0.9996,检测限(LOD)为0.0341μmol/mol,检出限优于已有报道。该方法检测精密度好,5次检测的相对标准偏差为2.32%。乙烯样品的回收率为95.8%~110%,相对标准偏差为1.54%~3.47%。同时,对乙烯和实际样品进行检测时,与GDX-502填充柱的传统气相色谱法的测定结果一致,表明所建立的乙烯顶空气相色谱法具有较高的可靠性。此外,该方法分析时间缩短至3 min,利用自动进样方式,检测通量大,适用于花生和大豆根瘤菌中固氮能力的快速准确测定,能满足花生和大豆生物固氮研究中乙炔还原法测定乙烯的需求。

关键词：顶空气相色谱毛细管色谱柱乙炔还原法乙烯花生大豆

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ARC-BBBE在长江流域花生产区试验示范效果

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中国油料作物学报 2024年第6期46卷 1357-1363页

作者：赵秀兰吉萍萍洪宇轩古皓华蔡航温茗博朱嘉铭岳晓凤梁美娟唐晓倩李友国张奇李培武中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室/农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室/农业农村部生物毒素检测重点实验室/国家农业检测基准实验室(生物毒素) 湖北武汉430062 湖北洪山实验室湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

我国长江流域花生生产易遭受黄曲霉菌侵染及黄曲霉毒素污染。在团队前期研制了微生物菌剂ARCBBBE,2022年在长江流域花生产区(湖北、湖南、江西、四川)四省开展ARC-BBBE花生生产示范技术应用,研究结果显示:在长江流域花生产区,施用ARC-B... 详细信息

我国长江流域花生生产易遭受黄曲霉菌侵染及黄曲霉毒素污染。在团队前期研制了微生物菌剂ARCBBBE,2022年在长江流域花生产区(湖北、湖南、江西、四川)四省开展ARC-BBBE花生生产示范技术应用,研究结果显示:在长江流域花生产区,施用ARC-BBBE对土壤中黄曲霉菌丰度的抑制率范围为36.87%~94.70%,平均抑制率为63.02%;同时,ARC-BBBE可增强花生的固氮酶活性,增加花生根瘤的数量以及重量,增加花生植株的生物量,花生增产率范围为7.23%~53.85%,平均增产率为20.58%。综合示范结果表明:花生施用ARC-BBBE可作为一项增加花生单产、提升花生产能、保障花生产业健康发展的栽培技术。

关键词：花生 ARC-BBBE 长江流域花生产区黄曲霉黄曲霉毒素固氮酶活性

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温氏附红细胞体的16S rRNA基因的克隆及系统发育树的建立

温氏附红细胞体的16S rRNA基因的克隆及系统发育树的建立

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浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者：付媛刘琴杜凯张雪娟卢福庄赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室浙江省农科院畜牧兽医研究所浙江省农科院畜牧兽医研究所华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

从自然感染附红细胞体的湖北黄牛无菌采集血液,分离附红细胞体并提取病原基因组, 用血营养菌的16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1．5kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析。结果表明该片段全长为1471bp(GenB... 详细信息

从自然感染附红细胞体的湖北黄牛无菌采集血液,分离附红细胞体并提取病原基因组, 用血营养菌的16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1．5kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析。结果表明该片段全长为1471bp(GenBank收录号为 AY946266),同源性分析表明该序列与Neimark(1997)公布的温氏附红细胞体的16S rRNA基因序列同源性达到98．7％,证实该病原为温氏附红细胞体．将该序列与5种支原体、14种血营养菌及边缘边虫等进行比较,建立系统发育树,结果表明温氏附红细胞体同边缘边虫的关系较远, 而与肺炎支原体组的亲缘关系较近．

关键词：温氏附红细胞体 16S rRNA PCR

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猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析

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中国兽医学报 2011年第7期31卷 993-997页

作者：祝令伟田园贝为成齐翀刘军孙洋周博郭学军冯书章中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增ΔsrtC5片段,该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列,但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀... 详细信息

构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增ΔsrtC5片段,该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列,但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s::ΔsrtC5,并将其电转化导入ZY458菌株,通过同源重组获得ΔsrtC5突变体。通过体外的细胞黏附试验和体内的家兔攻毒试验证明ΔsrtC5突变体比较野毒株,其细胞黏附能力和对家兔的致病性都显著降低。

关键词：猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变细胞黏附

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