检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2023年第4期44卷 125-129页

作者：耿天天罗莉妍王雅乐申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河南省共计虫株52株,湖北省共计虫株41株。在河南省52株分离虫株中,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(ACI<160),16株中度耐药(160≤ACI≤180),11株敏感(ACI>180);在湖北省共计41株鸡球虫分离虫株中,有9株完全耐药,9株中度耐药,23株敏感。研究结果为河南省和湖北省鸡球虫的耐药性提供了数据支撑。

关键词：鸡球虫耐药性磺胺氯吡嗪钠,鸡体笼养试验

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2020—2022年湖北省生猪屠宰场伪狂犬病病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2972-2981页

作者：陈宏建曹艳樊杰甘荣萱宋文博喻盛炜杨婷赵艳霞魏春燕谢锐华琳彭忠吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

旨在监测湖北省生猪屠宰场中伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的流行情况。采集2020—2022年湖北省4个区域(鄂东、鄂北、鄂西、鄂中)共9个县市不同规模屠宰场的1795份血液样品和2081份肺样品(肺、肺门淋巴结),分别使用靶向PRV gE... 详细信息

旨在监测湖北省生猪屠宰场中伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的流行情况。采集2020—2022年湖北省4个区域(鄂东、鄂北、鄂西、鄂中)共9个县市不同规模屠宰场的1795份血液样品和2081份肺样品(肺、肺门淋巴结),分别使用靶向PRV gE基因的ELISA和PCR方法检测血清中的抗体和肺样品中的病原,同时对阳性样品进行病原分离鉴定、全基因组测序和遗传进化分析。血清学检测结果显示,共有104份样品为阳性,平均阳性检出率为5.79%。病原学检测结果显示,共有82份样品为阳性,平均阳性检出率为3.94%。按不同因素对检出率进行分析,显示抗体和病原都在春季检出率最高,分别为18.57%和9.74%;湖北省东部的抗体检出率最高(10.77%),中部的病原检出率最高(4.93%);A类小型屠宰场的病原和抗体检出率都显著高于其他3个类型,分别为16.28%和6.01%。从病原阳性样品中共分离到PRV 17株,经全基因组和gB、gC、gE基因遗传进化分析结果显示均属于基因Ⅱ型变异株,与Bartha、NIA-3、Becker等早期国外分离株处于不同的遗传进化分支。其中HBXG疑似发生了基因Ⅰ型毒株与基因Ⅱ型毒株的重组,与早期报道的重组病毒HuB1/CHN2017同处于独立的clade2.2遗传分支。综上所述,湖北省屠宰场关联的猪场中主要流行PRV变异毒株,且免疫过疫苗的猪场还在发生疫苗株与野毒的重组与变异,因此本研究对PRV的持续监测与新型疫苗的研发工作有十分重要的意义。

关键词：伪狂犬病病毒生猪屠宰场血清学检测病原学检测遗传进化分析

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猪圆环病毒3型的分离及致病性分析

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1568-1578页

作者：库旭钢于学祥孙琪李盼盼张梦佳罗锐钱平何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/... 详细信息

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒3型分离致病性病毒载量

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不同猪繁殖与呼吸综合征疫苗组合体液免疫效果评估

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中国兽医杂志 2024年第1期60卷 21-28页

作者：任文慧阮胜男库旭钢张海峰于学祥田梓翰何启盖江云波华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430000 华中农业大学动物疫病诊断中心湖北武汉430000 武汉绿色巨农农牧股份有限公司湖北武汉432000

为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从... 详细信息

为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从中选取20头猪,共180头猪。每场选用1种免疫方案,第1组混合疫苗组,为首次免疫PRRS弱毒疫苗(CH-1R株),28 d后加强免疫PRRS灭活疫苗(CH-1a株);第2组弱毒疫苗组,为2次均免疫PRRS弱毒疫苗;第3组灭活疫苗组,为2次均免疫PRRS灭活疫苗。疫苗首次免疫后14、28、42和56 d采集猪血清,进行特异性PRRSV ELISA(N蛋白)检测和中和抗体评价;首次免疫后14和28 d采集猪血液,进行PRRSV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血液内是否存在PRRSV;统计试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数,进行临床数据比较分析。结果显示,35~50 kg体重阶段猪只接种疫苗后ELISA检测抗体水平增高较其他2个阶段更明显。混合疫苗组在免疫56 d时血清ELISA阳性率为100%,且ELISA结果极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01)。尽管各组没有产生特异性抗NADC30-like毒株的中和抗体,但针对PRRSV经典和高致病性毒株的中和抗体保护效价结果显示,混合疫苗组在免疫56 d时中和抗体效价极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01);RT-qPCR检测未发现阳性猪;各组试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,混合疫苗组对体液免疫的促进效果显著优于弱毒疫苗组和灭活疫苗组。该试验为临床正确选择PRRS疫苗免疫方案提供了科学数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 疫苗体液免疫评估 ELISA抗体中和抗体

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副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 219-230页

作者：肖静肖坤雪王翘楚陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控... 详细信息

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入*** CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在***中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化*** CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了***两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于***的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌表达调控 Flp-FRT 基因敲除无抗缺失

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裂谷热病毒Gn1蛋白在杆状病毒系统中的表达与纯化

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 126-133页

作者：孙潇张艳芳叶静曹胜波陈政华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感... 详细信息

采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白正确表达后,将重组杆状病毒感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,最终获得纯度较高的Gn1重组蛋白。本研究为RVF新型疫苗研发及诊断试剂的研发提供了重要材料。

关键词：裂谷热病毒 Gn1蛋白重组杆状病毒蛋白纯化

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应用响应面法优化副猪嗜血杆菌冻干保护剂

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中国兽医学报 2023年第4期43卷 713-719页

作者：蔡国华周明光张迪戴昕燕潘建刚徐晓娟何启盖蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 武汉科前生物有限公司湖北武汉430200

旨在对副猪嗜血杆菌HS1712冻干保护剂进行优化,提高菌株在冷冻干燥后的存活率。以冻干存活率为评价指标,对配方中甘油、海藻糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白(BSA)等5种成分缺失,考察其对副猪嗜血杆菌冻干存活率的影响。... 详细信息

旨在对副猪嗜血杆菌HS1712冻干保护剂进行优化,提高菌株在冷冻干燥后的存活率。以冻干存活率为评价指标,对配方中甘油、海藻糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白(BSA)等5种成分缺失,考察其对副猪嗜血杆菌冻干存活率的影响。在此基础之上,结合单因素变量试验,应用Box-Behnken响应面法对脱脂奶粉、甘油、海藻糖的添加比例进一步优化。结果表明,配方中甘油、海藻糖缺失后,副猪嗜血杆菌冻干存活率显著下降(P<0.05)。通过对Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,得到最佳添加比例为脱脂奶粉6.8%、甘油2.2%、海藻糖2.7%,具体配方成分及添加比例为脱脂奶粉6.8%、甘油2.2%、海藻糖2.7%、PVP 0.5%。使用优化后配方进行冻干验证,副猪嗜血杆菌HS1712平均冻干存活率为79.20%,与预测值(80.87%)无显著性差异(P>0.05),表示模型可靠。上述结果表明,优化后的冻干保护剂可显著提高副猪嗜血杆菌HS1712冷冻干燥后的存活率。

关键词：副猪嗜血杆菌冻干保护剂 Box-Behnken响应面法优化

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应用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 93-97页

作者：耿天天王雅乐罗莉妍申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学、动物医学院、农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation sys... 详细信息

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation system-PCR,ARMS-PCR)用于准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase,DHPS)基因中的点突变(A1129G)。对ARMS-PCR反应进行优化,最佳内外引物工作浓度比是5∶1,Mg^(2+)的最优工作浓度为10 mmol/L,dNTP的最优工作浓度为0.15 mmol/L,最佳Taq酶体积为0.1μL,最佳退火温度为62℃。本研究发现在合适的PCR体系下,能够检测出含有磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫的最低检测限为40 fg,表明该方法灵敏度良好;通过在1对内引物(F-inner377s/R-inner377r)上倒数第3位碱基上分别引进错配,使该方法的特异性提高。因此,ARMS-PCR方法是一种简单快速的用以区分临床分离株单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的基因分型方法。

关键词：鸡球虫病耐药性四引物扩增阻滞突变体系PCR技术单核苷酸多态性

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牛球虫病的研究进展

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中国兽医学报 2022年第7期42卷 1504-1509页

作者：叶莉莎陈俭胡敏华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛球虫病(coccidiosis in cattle)是由艾美耳属的几种球虫寄生于牛肠道引起的以急性肠炎、血痢等为特征的寄生虫病。它虽然不像一些烈性传染病和重要寄生虫病的危害那么严重,但是给养殖业造成的损失也不容忽视。目前,由于药物的大量使... 详细信息

牛球虫病(coccidiosis in cattle)是由艾美耳属的几种球虫寄生于牛肠道引起的以急性肠炎、血痢等为特征的寄生虫病。它虽然不像一些烈性传染病和重要寄生虫病的危害那么严重,但是给养殖业造成的损失也不容忽视。目前,由于药物的大量使用以及养殖模式的改变,牛球虫病的防制面临新的挑战。通过对牛球虫的生活史、牛球虫病的流行病学、防控及牛球虫分子生物学等方面研究进展的综述,以期为未来牛球虫病的综合防控提供参考。

关键词：牛球虫病艾美耳球虫流行病学防控

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佐剂对IBRVΔgG/ΔTK双基因缺失活疫苗牛体攻毒保护效果的影响

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吉林农业大学学报 2023年第4期45卷 476-484页

作者：王琛张一李庆妮陈建国陈颖钰陈曦胡长敏郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省洪山实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学湖北省兽医流行病学国际科技合作基地武汉430070 华中农业大学农业部兽用诊断制剂创制重点实验室农业部反刍动物生物制品重点实验室武汉430070

牛传染性鼻气管炎是危害养牛业的一种重要病毒性传染病,疫苗免疫是最主要的防控手段。为研究水性佐剂对牛传染性鼻气管炎TK和gG双基因缺失活疫苗(IBRVΔgG/ΔTK株)的免疫增强作用,将18头1.5~2月龄的奶公犊分成4组,组1~3各5头牛,组4为3... 详细信息

牛传染性鼻气管炎是危害养牛业的一种重要病毒性传染病,疫苗免疫是最主要的防控手段。为研究水性佐剂对牛传染性鼻气管炎TK和gG双基因缺失活疫苗(IBRVΔgG/ΔTK株)的免疫增强作用,将18头1.5~2月龄的奶公犊分成4组,组1~3各5头牛,组4为3头牛。组1滴鼻接种IBRVΔgG/ΔTK疫苗株,组2滴鼻接种IBRVΔgG/ΔTK疫苗株和Gel 01 ST水性佐剂混合物,组3为未免攻毒对照组,组4为不做处理的空白对照组。免疫35 d后,1~3组滴鼻攻击毒力株IBRV HB06株。免疫期间,组1牛体温在正常范围内,有1头牛眼睛和鼻腔出现水样分泌物;组2有1头牛出现一个温次达到40℃,有2头在眼或鼻出现水样分泌物。组1和组2血清特异性抗体和中和抗体水平无显著差异。攻毒后,组1和组2各有1头在第3天体温分别升高一个温次,达到40.25℃和40℃,部分牛眼睛出现水样分泌物;组1鼻腔排毒到第8天,组2中有1头牛在第9天仍检测到排毒;而组3出现流眼泪、鼻分泌物、鼻黏膜出血等临床症状,鼻腔排毒持续到第11天;组1肺部病变与空白对照组(组4)无显著差异,组2略严重于组1,组3表现出明显的肺部病变。按症状分值计算,组1和组2总保护率分别为91.7%和61.41%。参考世界动物卫生组织关于IBRV活疫苗的免疫保护评判标准,组1和组2分别达到100%(5/5)和80%(4/5)保护。综上,此研究所用佐剂未达到预期效果,后期仍需进行更多筛选。

关键词：佐剂牛传染性鼻气管炎标记疫苗免疫病毒

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