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中华实验外科杂志 2010年第12期27卷 1875-1877页

作者：肖雅琼孙宗全刘金平孟刘昆周元刘隽伟华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的观察伊马替尼对自体移植静脉内膜增生的影响.方法建立大鼠自体颈外静脉移植模型,实验分为4组：移植组、低剂量给药组、高剂量给药组及对照组.移植4周后取移植静脉,行病理学检查观察内膜增生情况,免疫组织化学及Western blot法检测... 详细信息

目的观察伊马替尼对自体移植静脉内膜增生的影响.方法建立大鼠自体颈外静脉移植模型,实验分为4组：移植组、低剂量给药组、高剂量给药组及对照组.移植4周后取移植静脉,行病理学检查观察内膜增生情况,免疫组织化学及Western blot法检测PDGFRβ、ERK及P-PDGFRβ、P-ERK蛋白表达情况.结果与对照组比较,移植组和低剂量给药组内皮下平滑肌细胞大量增生,静脉内膜显著增厚,管腔明显狭窄,高剂量给药组内膜无明显增厚.Western blot结果显示,移植组血管P-PDGFRβ蛋白含量（P-PDGFRβ/GAPDH）较对照组明显增加（0.81±0.06比0.18±0.02,P〈0.05）,而高剂量给药组较移植组明显减少（0.32±0.03比0.81±0.06,P〈0.05）,低剂量给药组与移植组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,P-ERK蛋白表达亦呈同样趋势变化.结论高剂量伊马替尼能有效抑制自体移植静脉内膜增生,其机制可能与抑制PDGF信号通路蛋白磷酸化,从而抑制平滑肌细胞增殖有关.

关键词：伊马替尼血管平滑肌细胞内膜增生自体静脉移植

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腺病毒介导S24F基因转染人脐静脉内皮细胞对调节活化正常T细胞表达和分泌因子趋化功能的影响

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中华实验外科杂志 2014年第8期31卷 1687-1689页

作者：孙永丰冯剑锷史嘉玮董念国华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的观察腺病毒介导S24F基因转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对调节活化正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）趋化作用的影响.方法构建pAV-MCMV/S24F-GFP-3 FLAG（Ad-S24F）腺病毒载体,将不含目的基因的病毒载体pAV-MCMV-GFP （Ad-Null... 详细信息

目的观察腺病毒介导S24F基因转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对调节活化正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）趋化作用的影响.方法构建pAV-MCMV/S24F-GFP-3 FLAG（Ad-S24F）腺病毒载体,将不含目的基因的病毒载体pAV-MCMV-GFP （Ad-Null）为阴性对照组.分离培养HUVECs后分别转染Ad-S24F和Ad-Null,另设不含腺病毒培养基为空白对照.转染后采用荧光显微镜及Western blot检测重组蛋白表达.采用Transwell小室法分析S24F对RANTES趋化作用的影响.结果 Ad-S24F及Ad-Null构建成功,转染HUVECs后荧光显微镜及Western blot能检测到重组蛋白表达,Ad-S24F转染后能够抑制RANTES诱导的外周血单个核细胞（PBMCs）穿透内皮[Ad-S24F：（9.20 ±0.02）％;Ad-Null：（17.70±0.02）％;空白对照组（15.10±0.01）％]的趋化作用.结论腺病毒介导S24F基因转染HUVECs能够抑制RANTES的趋化作用.

关键词： S24F基因调节活化正常T细胞表达和分泌因子腺病毒载体基因转染

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新型组织工程带瓣管道异种异位移植模型的建立

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中华实验外科杂志 2012年第5期29卷 969-971页

作者：胡行健刘隽炜史嘉玮董念国华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的构建一种操作简便、重复性高的小动物带瓣管道异种异位移植模型。方法实验组采用四分枝聚乙二醇交联去细胞的sD大鼠肺动脉带瓣管道作为移植物，以端端吻合方式间断缝合于新西兰白兔右颈总动脉，术后第7、14、28天行多普勒超声检查... 详细信息

目的构建一种操作简便、重复性高的小动物带瓣管道异种异位移植模型。方法实验组采用四分枝聚乙二醇交联去细胞的sD大鼠肺动脉带瓣管道作为移植物，以端端吻合方式间断缝合于新西兰白兔右颈总动脉，术后第7、14、28天行多普勒超声检查管道通畅情况，28d后取出管道行石蜡切片形态学检查。对照组大鼠接受假手术。结果手术成功率实验组96．0％（24／25），对照组100．O％（20／20），28d实验组移植管道通畅率87．5％（21／24），对照组吻合VI通畅率95．0％（19／20），两组间差异均无统计学意义（P〉0．05），苏木素-伊红（HE）染色可见局部无明显炎症细胞浸润，瓣膜形态、结构完整。结论此模型操作简便、构建迅速、成功率高，有助于检测组织工程瓣膜在体性能。

关键词：组织工程异体异位移植带瓣管道

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Runx2和骨钙素在钙化心脏瓣膜的表达

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中华实验外科杂志 2011年第10期28卷 1756-1757,I0003页

作者：史嘉玮张米陈思董念国华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的探讨风湿性和退行性瓣膜钙化可能机制。方法分为风湿性病变、退行性病变（n=10）和对照组，行瓣膜钙化检测。结果苏木素．伊红（HE）染色观察病理变化，VonKossa染色显示病变瓣膜肉眼大致正常的组织内存在点状钙质沉积。免疫组织化... 详细信息

目的探讨风湿性和退行性瓣膜钙化可能机制。方法分为风湿性病变、退行性病变（n=10）和对照组，行瓣膜钙化检测。结果苏木素．伊红（HE）染色观察病理变化，VonKossa染色显示病变瓣膜肉眼大致正常的组织内存在点状钙质沉积。免疫组织化学显示两组病变瓣膜内层见骨钙素分布，瓣膜间质细胞内见Runx2分布。逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）显示病变瓣膜均有Runx2（灰度值0．297±0．154和0．287±0．172）和骨钙素（灰度值0．178±0．087和0．190±0．095）mRNA表达，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论风湿性和退行性钙化瓣膜都存在Runx2活化及其下游成骨信号蛋白骨钙素表达。肉眼观不能准确判断早期瓣膜钙化。

关键词：心脏瓣膜 Runx2 骨钙素钙化

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二十碳五烯酸对小鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

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中华实验外科杂志 2011年第3期28卷 427-429页

作者：周诚叶平李军夏家红华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的观察二十碳五烯酸（EPA）对于慢性排斥反应的影响,并探讨其可能的作用机制.方法建立近交系BALB/C（H-2d）至C57BL/6（H-2b）小鼠心脏腹腔异位移植模型,通过腹腔注射单克隆CD4抗体及CD40L抗体建立慢性排斥反应模型.设立对照组（NS... 详细信息

目的观察二十碳五烯酸（EPA）对于慢性排斥反应的影响,并探讨其可能的作用机制.方法建立近交系BALB/C（H-2d）至C57BL/6（H-2b）小鼠心脏腹腔异位移植模型,通过腹腔注射单克隆CD4抗体及CD40L抗体建立慢性排斥反应模型.设立对照组（NS）、慢排组（术后0、1、5、10 d腹腔注射抗CD4单克隆抗体100μg/d,术后0、2、4 d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体200 μg/d）和EPA组[在慢排组的基础上EPA 100 mg/（kg·d）灌胃].术后60 d,EVG染色了解血管病变.利用Real-Time聚合酶链反应（PGR）检测各组移植物慢排相关细胞因子转化生长因子（TGF）-β、白细胞介素（IL）-17的mRNA水平,组织化学研究EPA作用受体PPARy的表达以及TGF-β通路重要分子Smad3活化情况.结果利用CD4抗体及CD40L抗体成功建立慢性排斥反应模型,出现典型的血管病变.联合利用EPA明显减轻血管狭窄[闭塞（18±3）%比（59±7）%,P＜0.05]、并下调局部TGF-β、IL-17表达（TGF-β：12.0±2.5比4.0±0.9;IL-17：0.60±0.09比0.10±0.02;P＜0.05）.同时上调PPARγ的表达[（25±7）比（2±0.5）个/高倍视野;P＜0.05],并抑制Smad3的磷酸化[（30±5）比（10±3）个/高倍视野;P＜0.05].结论 EPA可以激活和上调供心PPARγ的表达,明显减轻慢性排斥反应血管病变.

关键词：二十碳五烯酸心脏移植慢性排斥反应 PPAR7 TGF—β Smad3

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NBD多肽对小鼠树突状细胞成熟状态的影响

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中华实验外科杂志 2007年第10期24卷 1251-1253页

作者：苏刚孙宗全陈家军董念国刘超邓勇志王国华华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的观察NBD多肽对脂多糖(LPS)刺激的小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)生物学活性的影响。方法培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组、LPS组及NBD组,对照组不予任何处理,LPS组加入终质量浓度为1 mg/L的LPS,NBD组于加入NBD50μmol/ml,4 h后给予1 mg/... 详细信息

目的观察NBD多肽对脂多糖(LPS)刺激的小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)生物学活性的影响。方法培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组、LPS组及NBD组,对照组不予任何处理,LPS组加入终质量浓度为1 mg/L的LPS,NBD组于加入NBD50μmol/ml,4 h后给予1 mg/L LPS刺激,继续培养3 d。流式细胞术检测DC细胞表面CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子的变化,ELISA法检测各组DC分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-12(IL-12)的浓度,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力,免疫细胞化学及Western blot检测DC核因子-kB(NF-kB)的表达。结果LPS可促进DC高表达CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子释放、NF-kB高表达并易位于核内,并诱导T细胞增殖,NBD多肽可阻断LPS的这些效应。结论NBD多肽可抑制DC成熟,增强同种未成熟DC的免疫耐受诱导作用,为进一步研究DC的临床应用奠定了基础。

关键词：树突状细胞多肽 NF-KB 脂多糖

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慢性中重度缺血性二尖瓣关闭不全的外科治疗及中期随访

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中华胸心血管外科杂志 2010年第2期26卷 95-98页

作者：邱雪峰董念国孙宗全肖诗亮张凯伦杜心灵蒋雄刚苏伟华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的比较二尖瓣成形术和瓣膜置换术治疗慢性中重度缺血性二尖瓣关闭不全的手术效果及中期随访结果 .方法自2002年6月至2008年5月,83例慢性缺血性二尖瓣关闭不全（中度35例,重度48例）接受冠状动脉旁路移植术同期行二尖瓣成形术或二尖... 详细信息

目的比较二尖瓣成形术和瓣膜置换术治疗慢性中重度缺血性二尖瓣关闭不全的手术效果及中期随访结果 .方法自2002年6月至2008年5月,83例慢性缺血性二尖瓣关闭不全（中度35例,重度48例）接受冠状动脉旁路移植术同期行二尖瓣成形术或二尖瓣置换术.男49例,女34例;年龄51～77岁,平均（59.3±7.5）岁.43例二尖瓣成形术包括使用Dacron补片条或自体心包条环缩后瓣环21例,交界处环缩9例,后叶矩形切除9例,***成形环环缩4例.40例二尖瓣置换术包括机械瓣28例,生物瓣12例.结果住院死亡3例,二尖瓣成形术组和二尖瓣置换术组住院死亡分别占2.3%（1/43例）、5.0%（2/40例）,差异无统计学意义（P〉0.05）.术后瓣膜置换组机械通气时间长于二尖瓣成形组（P〈0.05）,二尖瓣成形组术后6例残余轻度二尖瓣反流（P〈0.05）但不影响心功能,两组其他住院并发症无统计学差异（P〉0.05）.76例通过门诊或电话随访,随访3～60个月,平均（20.2±4.9）个月.随访期间二尖瓣成形术7例轻度二尖瓣反流.瓣膜置换组人工瓣功能均良好,3例出现抗凝相关并发症.随访远期死亡7例,冠状动脉旁路移植术同期二尖瓣成形术和二尖瓣置换术5年生存率分别为90%和61%.结论对于慢性中重度缺血性二尖瓣关闭不全病人,二尖瓣成形术后近期和远期效果好,可作为优先选择的术式.

关键词：二尖瓣闭锁不全心肌缺血冠状动脉分流术

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组织型纤溶酶原激活因子基因对移植静脉再狭窄的影响

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中华实验外科杂志 2006年第4期23卷 542-544页

作者：刘小斌张凯伦蒋雄刚夏家红向道康吴龙周诚华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)局部转基因表达对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法 72只兔建立颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组(n= 24)、载体对照组(n=24)和空白对照组(n=24),进行局部基因转染,于术后不... 详细信息

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)局部转基因表达对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法 72只兔建立颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组(n= 24)、载体对照组(n=24)和空白对照组(n=24),进行局部基因转染,于术后不同时点取材,逆转录 -聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blot)和底物发色法分别检测移植静脉t-PA基因表达和活性变化,放射标记计数观察其对血小板沉积的影响,病理形态学观察移植血管新生内膜增生情况。结果术后2、5、14、28 d,转基因组检测到移植静脉外源性t-PA mRNA的转录和蛋白表达,其活性分别为(370．63±59．44)、(344．13±48．47)、(252．87±51．80)和(161．75±68．94)U／g,对照组各时点则未检测到纤溶酶活性。术后2 d,转基因组、载体组和空白对照组平均血小板沉积数分别为(85．04±21．58)×10 6,(225．87±85．13)×10 6和(211．57±78．02)×10 6,转基因组明显少于载体组和空白对照组(P<0．05)。术后5、14、28、60 d,转基因组新生内膜面积、内膜中膜面积比均明显小于对照组。结论局部转染t-PA基因,能抑制移植静脉血栓形成,减轻新内膜的增殖,从而有效预防再狭窄的发生。

关键词：纤溶酶原激活因子基因治疗静脉移植狭窄

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RGD肽固定对胶原黏附细胞性能的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第2期36卷 214-216页

作者：史嘉玮董念国孙宗全华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响。方法实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以... 详细信息

目的将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响。方法实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组。采用X射线光电子能谱法(XPS)对材料作表面分析。MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率。结果耦联组的XPS谱图检测到硫元素,证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面。MTT法检测显示,耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性。结论RGD肽对胶原的表面修饰,可提高生物源性支架的细胞黏附性,促进组织工程心脏瓣膜构建。

关键词： RGD肽胶原固定技术细胞黏附

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基质金属蛋白酶抑制剂对肺缺血再灌注损伤的保护作用

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第2期36卷 206-209页

作者：罗海燕孙宗全蒋雄刚冯汉萍孙图成陈新忠冯剑锷江萍华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的研究外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制剂强力霉素在肺缺血再灌注损伤中的保护作用。方法建立大鼠肺缺血再灌注模型,通过明胶酶谱法测定肺泡灌洗液(BAL)中明胶酶即MMP-2、MMP-9活性,免疫组化法测定肺组织中... 详细信息

目的研究外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制剂强力霉素在肺缺血再灌注损伤中的保护作用。方法建立大鼠肺缺血再灌注模型,通过明胶酶谱法测定肺泡灌洗液(BAL)中明胶酶即MMP-2、MMP-9活性,免疫组化法测定肺组织中MMP-2、MMP-9的分布及含量,考马斯亮蓝比色法测定BAL中总蛋白的含量,测定肺组织湿干重比值,观察肺组织病理学改变。结果肺缺血再灌注后,MMP-2、MMP-9分泌及激活有显著提高,应用强力霉素30 mg/(kg.d)后,MMP-2、MMP-9分泌及激活被显著抑制,BAL中总蛋白含量显著降低,肺组织的病理改变显著减轻。结论强力霉素通过抑制明胶酶的分泌及激活,降低基底膜的降解,减轻肺水肿,达到肺保护作用。

关键词：缺血再灌注损伤基质金属蛋白酶强力霉素肺保护

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