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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 89-页

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉华南农业大学兽医学院广州510642 深圳市疾病预防控制中心深圳518020 华南农业大学兽医学院广州510642 深圳市疾病预防控制中心深圳518020 深圳市疾病预防控制中心深圳518020 深圳市疾病预防控制中心深圳518020 深圳市疾病预防控制中心深圳518020 华中科技大学同济医学院武汉430030 广东医学院微生物学教研室湛江524023 华中科技大学同济医学院武汉430030 华中科技大学同济医学院武汉430030

　　用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用.大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后... 详细信息

　　用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用.大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后每组各取5只作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFN-γ及IL-4的含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),其余的作攻毒试验后观察小鼠存活情况.脾淋巴细胞增殖各组间无显著差异(P>0.05);T细胞亚群分析,pVAC-GRA4组CD3+CD4+T细胞无明显改变(P>0.05),CD3+CD8+T细胞数明显增加(与pVAC对照组比P<0.05,与空白对照组比P<0.01),其CD3+CD4+/CD3+CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);免疫鼠细胞因子IFN-γ及IL-4检测,pVAC-GRA4免疫组IFN-γ比对照组略高,但差异不显著(P>0.05),而IL-4的检测值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC-GRA4组虽可诱导产生GRA4蛋白抗原特异性的IgG抗体,但抗体滴度不高;抗攻击感染结果,pVAC-GRA4免疫组小鼠的存活率明显高于两个对照组,其死亡小鼠的平均存活天数与空白对照组相比,差异显著(P<0.05).用pVAC-GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫RH强毒株攻击感染的部分保护性作用.……

关键词：弓形虫感染基因真核表达重组质粒免疫应答细胞因子对照组小鼠脾脏指标测定抗体滴度攻击感染脾淋巴细胞增殖间接免疫荧光法细胞增殖活性免疫组淋巴细胞亚群保护性抗原特异性注射免疫细胞免疫检测

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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在Vero E6细胞中的表达

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在Vero E6细胞中的表达

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全国新出现传染病学术研讨会

作者：温见翔吴少庭陈群秦莉林绮萍袁仕善张仁利高世同黄达娜广东医学院微生物学教研室深圳市疾病预防控制中心分子生物室广东医学院微生物学教研室华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华南农业大学动物医学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室

目的:构建结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的真核表达质粒,并研究其在Vero E6细胞中的表达情况。方法:采用PCR方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的... 详细信息

目的:构建结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的真核表达质粒,并研究其在Vero E6细胞中的表达情况。方法:采用PCR方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入Vero E6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物。结果:从结核分枝杆菌

关键词： Vero E6 结核分枝杆菌 ESAT-6

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直接免疫荧光法检测阴道毛滴虫

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第4期21卷 242-244页

作者：田永红熊承良官黄涛庞雪冰姜昌富华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院病原微生物教研室武汉430030

目的研究多克隆抗体直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)检测阴道毛滴虫的最佳反应条件及临床应用意义。方法确诊为阴道炎的患者取阴道分泌物,经培养收集虫体,稀释成悬液,制作抗原片。取阴道毛滴虫免疫山羊血清,按Ma... 详细信息

目的研究多克隆抗体直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)检测阴道毛滴虫的最佳反应条件及临床应用意义。方法确诊为阴道炎的患者取阴道分泌物,经培养收集虫体,稀释成悬液,制作抗原片。取阴道毛滴虫免疫山羊血清,按Marssall氏法用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,观察不同抗体稀释度(1:10～1:2560)、不同孵育时间(15,30,45,60,90,120 min)、不同封闭剂(1％牛血清白蛋白,10％牛血清白蛋白及10％小牛血清)对DFA检测阴道毛滴虫的影响。对102例阴道炎患者标本分别用培养法、悬滴法和DFA作临床检验。结果抗体稀释度1:160、37℃孵育45min、封闭剂1％或10％牛血清白蛋白为最佳反应条件。检测102例临床标本,3种方法均阳性的16例,均阴性的68例。有13倒悬滴法、3例DFA检测阴性,而另2法阳性。1倒悬滴法阴性,DFA阳性,培养法未能证实。以培养法为标准,DFA敏感性为87.9％,特异性为98.6％。结论 DFA可作为悬滴法的一种替代手段用于临床检验。

关键词：直接免疫荧光法检测阴道毛滴虫多克隆抗体

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超短波对兔急性肺损伤肺内小动脉血管壁的保护作用

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中华物理医学与康复杂志 2003年第10期25卷 581-583页

作者：周淑华蒋小燕杨朝晖王倩黄庆华华中科技大学同济医学院附属协和医院康复医学科武汉430022 华中科技大学同济医学院微生物教研室

目的　通过超短波对兔急性肺损伤肺部的治疗 ,观察肺内小动脉 (SmallArtery ,SA)血管壁的变化 ,了解超短波对急性肺损伤肺内SA血管壁是否具有保护作用 ,并初步探讨其作用机制。方法　健康大白兔 18只 ,随机分为A、B、C 3组 ,每组 6只。... 详细信息

目的　通过超短波对兔急性肺损伤肺部的治疗 ,观察肺内小动脉 (SmallArtery ,SA)血管壁的变化 ,了解超短波对急性肺损伤肺内SA血管壁是否具有保护作用 ,并初步探讨其作用机制。方法　健康大白兔 18只 ,随机分为A、B、C 3组 ,每组 6只。A组为正常对照组 ;B组将大肠杆菌内毒素静脉注射 3 0min后 ,应用微热量超短波治疗 ,每天 1次 ,共治疗 7d ;C组将大肠杆菌内毒素静脉注射后不做任何治疗 ,观察 7d。各组兔分别在规定时间静脉注入空气 5 0ml处死 ,样本用 40g/L多聚甲醛固定 ,NADPH d组织化学染色 ,光镜观察。结果　A组SA血管内膜光滑 ,NADPH d组织化学染色呈深紫色强阳性反应 ,内皮细胞及平滑肌细胞分布均匀。B组血管扩张 ,管壁NADPH d组织化学染色、内皮细胞及平滑肌细胞分布与A组无明显差别。C组SA血管内膜增生 ,内膜下结缔组织水肿 ,NADPH d组织化学染色呈深紫色强阳性反应 ,中层平滑肌水肿、增生 ,血管壁厚薄不均 ,管腔变窄。图像分析结果显示 :C组一氧化氮合酶 (NOS)阳性染色细胞数明显高于A组 ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;而经超短波治疗后的B组NOS阳性染色细胞数与A组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　超短波能够通过调节NOS的活性。

关键词：超短波急性肺损伤肺内小动脉血管壁保护作用平滑肌细胞

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喷昔洛韦对单纯疱疹病毒感染小鼠的治疗作用

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中国药学杂志 2003年第12期38卷 921-924页

作者：侯炜杨占秋曲虹肖红文利熊增慧刘红武汉大学医学院病毒研究所湖北武汉430071 华中科技大学同济医学院微生物教研室湖北武汉430060 湖北省医药工业研究院湖北武汉430000

目的　研究喷昔洛韦 (PCV)对单纯疱疹病毒感染小鼠的疗效。方法　用病毒滴度为 10 0LD50 /0 .1mLHSV 1,HSV 2每只分别腹腔注射 0 .0 3mL ,2 4h后皮下注射给药 ,PCV剂量分别为 2 0 ,5 0 ,10 0 ,2 5 0mg·kg-1·d-1,疗程 5d。观... 详细信息

目的　研究喷昔洛韦 (PCV)对单纯疱疹病毒感染小鼠的疗效。方法　用病毒滴度为 10 0LD50 /0 .1mLHSV 1,HSV 2每只分别腹腔注射 0 .0 3mL ,2 4h后皮下注射给药 ,PCV剂量分别为 2 0 ,5 0 ,10 0 ,2 5 0mg·kg-1·d-1,疗程 5d。观察动物的反应 ,出现死亡时间和死亡数 ,所有动物用药后观察 15d。同时收集各组动物治疗后的标本 ,进行病毒分离 ,按常规测定病毒滴度。另设病毒对照组、0 .9%NaCl对照组、阳性药阿昔洛韦对照组 (ACV)。结果　PCV对HSV感染鼠有保护作用 ,5 0mg·kg-1·d-1时 ,HSV 1和HSV 2感染鼠的存活率分别为 6 0 %和 75 % ,平均存活天数分别为 (11.3± 3.6 )和 (12 .9± 2 .8)d ,随着药物剂量增加 ,疗效增强 ,该药还能降低组织内病毒滴度 ,阻止体内病毒复制 ,抗HSV作用类似于相同剂量的ACV。

关键词：喷昔洛韦单纯疱疹病毒感染治疗抗病毒作用

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不同载体的日本血吸虫DNA疫苗诱导小鼠免疫效果的观察

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华中科技大学学报（医学版） 2003年第1期32卷 5-6,18页

作者：李柳哲石佑恩江侃宁长修华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系寄生虫学教研室武汉430030

目的　观察不同真核表达载体的日本血吸虫 DNA疫苗的免疫效果 ,筛选合适的血吸虫 DNA疫苗。方法　将小鼠分成 5组 ,于第 0、 3、 5周将日本血吸虫真核表达载体 p BK- Sj2 3 ,p BK- Sj2 6以及 p CD- Sj2 3 ,p CD- Sj2 6,分别接种小鼠股... 详细信息

目的　观察不同真核表达载体的日本血吸虫 DNA疫苗的免疫效果 ,筛选合适的血吸虫 DNA疫苗。方法　将小鼠分成 5组 ,于第 0、 3、 5周将日本血吸虫真核表达载体 p BK- Sj2 3 ,p BK- Sj2 6以及 p CD- Sj2 3 ,p CD- Sj2 6,分别接种小鼠股四头肌 ,第 9周每组小鼠以 40± 2条血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击感染 6周后 ,剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,比较含血吸虫同一抗原分子的不同载体诱导小鼠的抗攻击感染能力。结果　发现疫苗 p CD- Sj2 3和 p CD- Sj2 6诱导小鼠的减虫率和减卵率分别为 3 0 .5 0 %和 3 3 .0 2 % ;疫苗 p BK- Sj2 3和 p BK- Sj2 6诱导小鼠的减虫率和减卵率分别为 18.2 4%和 2 1.70 % ,含血吸虫同一抗原分子的不同载体诱导小鼠的抗攻击感染能力具有显著性差异。结论　由真核表达载体p CD构建的血吸虫 DNA疫苗比由真核表达载体 p BK构建的血吸虫

关键词：日本血吸虫疫苗 DNA 真核表达载体

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钙和鸡冠花黄酮提取物对大鼠废用性骨质疏松的作用

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华中科技大学学报（医学版） 2003年第6期32卷 601-603页

作者：李万里吕清波何群力张永喜宋笑飞沈关心华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系新乡医学院第三附属医院放射科新乡医学院微生物与免疫学教研室新乡453003 新乡医学院

目的　探讨钙和鸡冠花黄酮提取物对废用性骨质疏松大鼠的作用 ,为骨质疏松的防治提供依据。方法　选用健康SD大鼠 40只 ,雄性。随机分为 5组 ,第 1、 2组分别为正常对照和阳性对照 ,灌胃蒸馏水 5ml/(kg·d) ,第 2～ 5组制造废用性... 详细信息

目的　探讨钙和鸡冠花黄酮提取物对废用性骨质疏松大鼠的作用 ,为骨质疏松的防治提供依据。方法　选用健康SD大鼠 40只 ,雄性。随机分为 5组 ,第 1、 2组分别为正常对照和阳性对照 ,灌胃蒸馏水 5ml/(kg·d) ,第 2～ 5组制造废用性骨质疏松大鼠模型 ,第 3、 4、 5组为预防组 ,分别灌胃等量鸡冠花提取物 ,碳酸钙 ,鸡冠花提取物加钙溶液。实验 8周后 ,测骨密度 (BMD) ,股骨CT值 ,测血清MDA、SOD及 2 4h尿钙、羟脯氨酸 (HOP)、尿肌酐含量等。结果　阳性组与正常对照组比较股骨重、灰分重、CT值、血清钙下降 ,尿钙、尿HOP升高 (P <0 0 5或0 0 1) ,预防组与阳性组比较股骨重、CT值显著增加 ,碳酸钙组、鸡冠花加钙组灰分重显著增加 (P <0 0 5)。与阳性组比较各预防组血清钙增加 ,尿钙、尿HOP减少 (P <0 0 5或 <0 0 1)。鸡冠花组、鸡冠花加钙组与阳性组比较股骨BMD、血清SOD升高 ,MDA降低 ,单纯补钙组仅BMD升高 (P <0 0 5或 <0 0 1)。结论　鸡冠花提取物、钙对废用性骨质疏松大鼠骨质代谢均有促进作用 ,两者合用具有更好的预防效果。

关键词：钙鸡冠花黄酮提取物大鼠废用性骨质疏松作用防治

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维甲酸和EGF对大鼠脑胚胎神经干细胞增殖和分化的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2003年第1期12卷 81-85页

作者：崔景彬鄢文海王建枝李开荣王俊萍华中科技大学同济医学院武汉430022 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052

目的　观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞... 详细信息

目的　观察全反式维甲酸 (RA)和表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响。方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞 ,经RA和EGF处理后 ,用台盼蓝确定细胞数量 ,BrdU标记分析细胞生长能力 ,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞。结果　 2 0ng/mlEGF和 1μmol/LRA处理的培养细胞均显示增殖效应 ,但EGF处理组增殖速度明显高于RA组 ,悬浮细胞中有大量nestin和BrdU阳性细胞。用EGF和EGF/RA诱导的神经元分化率分别为 17%和 3 1% ,而RA处理的神经元分化率显著升高至 89%。由EGF、EGF/RA和RA诱导的星形胶质细胞分化率分别为 83 %、 69%和 11%。结论　EGF主要促进神经干细胞增殖并主要诱导星形胶质细胞的生成 ,RA主要诱导神经干细胞向神经元分化。

关键词：维甲酸神经干细胞表皮生长因子细胞分化胚胎大鼠细胞增殖

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表皮生长因子对大鼠胚胎神经干细胞增殖分化的影响

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郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 719-722页

作者：崔景彬叶华李开荣任秀花阎爱华华中科技大学同济医学院郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学医学院郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州大学癌前期研究室

目的 :建立神经干细胞分离、培养的技术方法 ,探讨表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖、分化的影响。方法 :从大鼠胚胎大脑组织中分离、培养神经干细胞 ,并用EGF和血清诱导其分化 ,采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞增殖和... 详细信息

目的 :建立神经干细胞分离、培养的技术方法 ,探讨表皮生长因子 (EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖、分化的影响。方法 :从大鼠胚胎大脑组织中分离、培养神经干细胞 ,并用EGF和血清诱导其分化 ,采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞增殖和分化的神经样细胞。结果 :大鼠胚胎神经干细胞在无细胞因子和血清的培养基中无新生细胞形成 ,但能在EGF和血清的诱导下产生nestin和BrdU阳性细胞 ,细胞贴壁后分化为神经元和星形胶质样细胞。结论 :EGF和血清能促进神经干细胞增殖。

关键词：神经干细胞细胞培养表皮生长因子细胞分化大鼠胚胎

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非洲爪蟾卵母细胞内源性及表达的P2型嘌呤受体介导的膜电流记录方法

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华中科技大学学报（医学版） 2003年第1期32卷 16-18页

作者：冷明彭碧文谢辉李之望华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系武汉430030 武汉大学医学院生理学教研室武汉430071 宁波市第六医院手外科研究所宁波315040

目的　记录和区分卵母细胞内源性 P2型嘌呤受体及表达的外源性 P2型嘌呤受体介导的膜电流。方法　应用双电极电压钳技术分别在带滤泡膜及去滤泡膜后注入 RNA并经孵育的卵母细胞记录膜电流。结果　根据所用卵母细胞标本的制备 (是否去滤... 详细信息

目的　记录和区分卵母细胞内源性 P2型嘌呤受体及表达的外源性 P2型嘌呤受体介导的膜电流。方法　应用双电极电压钳技术分别在带滤泡膜及去滤泡膜后注入 RNA并经孵育的卵母细胞记录膜电流。结果　根据所用卵母细胞标本的制备 (是否去滤泡膜及是否注入 RNA并孵育 )以及电流的形式及幅值 ,可将内源性 P2型嘌呤受体和表达的外源性 P2型嘌呤受体介导的膜电流区分开来。结论　应用以上方法可区分两种不同的三磷酸腺苷 ( adenosinetriphosphate,ATP)

关键词：卵母细胞基因表达电压钳 P2型嘌呤受体

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