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寄生虫DNA疫苗免疫途径和剂量的研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2007年第1期34卷 43-46页

作者：艾熙夏丽霞谢姣胡媛石佑恩华中科技大学同济医学院02级七年制学生武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系寄生虫学教研室武汉430030

DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，能在体内引起特异性细胞免疫和体液免疫应答。免疫应答的水平受多种因素的影响。该文就影响寄生虫DNA疫苗免疫效果的途径和剂量等方面的研究进展作一综述。

关键词：寄生虫 DNA疫苗免疫途径免疫剂量

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VLDLR受体在AS模型兔组织中的分布和表达

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医学分子生物学杂志 2007年第6期4卷 494-497页

作者：赵雪花屈伸武汉科技大学医学院生物化学教研室武汉市430080 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉市430072

目的研究极低密度脂蛋白受体(very lowdensity lipoprotein receptor,VLDLR)亚型分布发生改变是否与脂质代谢紊乱有关。方法运用RT-PCR技术对VLDLR亚型在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔模型组织中的分布和表达进行研究。结果与... 详细信息

目的研究极低密度脂蛋白受体(very lowdensity lipoprotein receptor,VLDLR)亚型分布发生改变是否与脂质代谢紊乱有关。方法运用RT-PCR技术对VLDLR亚型在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔模型组织中的分布和表达进行研究。结果与正常家兔相比,在AS家兔中,Ⅰ型受体表达略有上调,主动脉平滑肌Ⅰ型受体上调幅度最高,但亚型分布并没有明显改变。结论高脂血症可促进Ⅰ型受体在主动脉平滑肌中的表达。

关键词：极低密度脂蛋白受体 VLDLR亚型 O-连接糖链结合域

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不同剂量和疗程伐昔洛韦治疗复发性生殖器疱疹的随机双盲研究

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中华皮肤科杂志 2007年第5期40卷 274-276页

作者：周村建王莉饶贤才郭在培涂亚庭卢念祖郝飞第三军医大学西南医院皮肤科重庆400038 第三军医大学微生物学教研室四川大学华西医院皮肤科华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科中山大学附属第一医院皮肤科

目的比较不同剂量和疗程伐昔洛韦治疗复发性生殖器疱疹的疗效和安全性。方法选择复发性生殖器疱疹为研究对象,采用多中心、随机、双盲、对照临床研究。试验组伐昔洛韦每天2次,每次500 mg,口服5天,对照组伐旨洛韦每天2次,每次300 mg,口服... 详细信息

目的比较不同剂量和疗程伐昔洛韦治疗复发性生殖器疱疹的疗效和安全性。方法选择复发性生殖器疱疹为研究对象,采用多中心、随机、双盲、对照临床研究。试验组伐昔洛韦每天2次,每次500 mg,口服5天,对照组伐旨洛韦每天2次,每次300 mg,口服7天。分别于用药前及用药后第1天、第2天取疱液或创面分泌物行疱疹病毒细胞培养,并于用药后第1、2、7天随访观察疗效和不良反应。结果入组142例,全分析集(FAS)分析142例,符合方案集(PPS)分析133例。治疗后第1、2、7天,试验组和对照组的症状体征积分下降值及有效率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。FAS集分析单纯疱疹病毒(HSV)的培养阳性率,治疗后第1天试验组由87.50%下降到28.85%,对照组由92.86%下降到54.55%,两组间差异有统计学意义(P=0.007)。PPS集分析HSV的培养阳性率,治疗后第1天试验组由90.00%下降到28.00%,对照组由92.59%下降到55.56%,两组比较差异有统计学意义(P=0.005)。试验组和对照组不良反应发生率分别为0%和4.23%。结论加大伐昔洛韦用量治疗复发性生殖器疱疹能显著提高治疗后第1天HSV的清除率,缩短HSV在皮损局部的存在时间。

关键词：疱疹生殖器随机对照试验伐昔洛韦

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SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

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中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会

作者：秦莉王西明雷明军潘晖榕屈伸吴少庭袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍温见翔华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心华南农业大学兽医学院广东医学院微生物学教研室

目的构建 SARS 冠状病毒棘突糖蛋白（S 蛋白）的两个片段 S1和 S2的真核表达质粒 pVAC -S1和 pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用 PCR 方法体外扩增 SARS 冠状病毒棘突糖蛋... 详细信息

目的构建 SARS 冠状病毒棘突糖蛋白（S 蛋白）的两个片段 S1和 S2的真核表达质粒 pVAC -S1和 pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用 PCR 方法体外扩增 SARS 冠状病毒棘突糖蛋白（S 蛋白）的两个片段 S1和 S2的基因片段,定向克隆入真核表达载体 pVAC,构建 pVAC-S1和 pVAC-S2重组质粒。并把它们通过 Lipofec- tamine 2000转染到 HEK293细胞,RT-PCR 和 western-blot 鉴定重组质粒在细胞中的转录和表达。构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA 检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞仪检测小鼠脾脏 T 淋巴细胞亚群分布。结果成功构建了重组表达质粒 pVAC-S1和 pVAC-S2,并可在 HEK293细胞中表达。免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1：3200。pVAC-S1诱导了高滴度的 IgG2a,IgG2b 和 IgG1,pVAC -S2刺激产生高滴度 IgG2A,IgG2b 和较高滴度的 IgG3。脾脏 T 淋巴细胞亚群分析 CD3和 CD8T 细胞明显升高。结论构建的真核表达质粒 pVAC-S1和 pVAC-S2能达哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。

关键词： SARS冠状病毒 DNA 疫苗棘突蛋白

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弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定

弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定

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中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会

作者：雷明军戴五星潘晖榕吴少庭黄达娜高世同张仁利林绮萍温见翔华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室华南农业大学动物医学系广东医学院微生物学教研室

目的克隆弓形虫 RH 株膜表面抗原2(sAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒 PET23a-SAG2, 并在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达及纯化 SAG2蛋白。方法 PCR 扩增503bp 的 SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体 pMD-18T 截本并转化大... 详细信息

目的克隆弓形虫 RH 株膜表面抗原2(sAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒 PET23a-SAG2, 并在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达及纯化 SAG2蛋白。方法 PCR 扩增503bp 的 SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体 pMD-18T 截本并转化大肠杆菌 DH5α。限制性酶切分析及测序鉴定后以限制性内切酶 BamH I 和 SaI I 双酶切 pMD-18T-SAG2质粒与表达质粒载体 Pet23a 的 BamH I 和 SaI I

关键词：弓形虫 SAG2 克隆基因表达纯化免疫印迹

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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

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中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会

作者：吴少庭高世同张仁利黄达娜袁仕善林绮萍翁亚彪雷明军潘晖榕秦莉温见翔深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心华南农业大学兽医学院华南农业大学兽医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院广东医学院微生物学教研室

目的用 pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性用。方法大量制备 pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫 BALB/c 小鼠三次,以 pVAC 空质粒及不经任何处理的空白组为照。于末次免... 详细信息

目的用 pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性用。方法大量制备 pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫 BALB/c 小鼠三次,以 pVAC 空质粒及不经任何处理的空白组为照。于末次免疫4周后每组各取5只作免疫指标测定（包打 MTT 法测定小鼠脾脏 T 淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定 T 淋巴细胞踮群数目、双夹心 ELISA 法测定细胞因子 IFN-γ及 IL-4的含量、间接 ELISA 法测定 IgG 抗体滴度）,其余的作攻毒试验后观察小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间无显著差异（P＞0．05）;T 细胞亚群分析, pVAC-GRA4组 CDT 细胞无明显改变（P＞0．05）,CDCD T 细胞数明显增加（与 pVAC 对照纲比 P＜0．05,与空白对照组比 P＜0．01）,其 CDCD/CDCD比值也较空白对照组明显降低（P＜ 0．01）;免疫鼠细胞因子 IFN-γ及 IL-4检测,pVAC-GRA4免疫组 IFN-γ比对照组略高,但著异不显著（P＞0．05）,而 IL-4的检测值各组间无明显变化（P＞0．05）;pVAC-GRA4组虽可诱导产生 GRA4 蛋白抗原特异性的 IgG 抗体,但抗体滴度不高;抗攻击感染结果,pVAC-GRA4免疫组小鼠的存活率明显高于两个对照组,其死亡小鼠的平均存活天数与空白对照组相比。差异显著（P＜0．05）。结论 pVAC-GRA4重组质粒 DNA 免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫 RH 强毒株攻击感染的部分保护性作用。

关键词：弓形虫 GRA4 DNA免疫

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AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用

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癌症 2006年第11期25卷 1334-1339页

作者：蔡晓坤周俊立周鹤俊张玲吴健鸿林菊生华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科肝病研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院微生物教研室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院基础部湖北武汉430030

背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichiacolipurinenucleosidephosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应。本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞。RT-PCR检测二者在细胞中的表达。台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性。结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感。在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应。HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性。结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用。

关键词： AF0.3启动子 PNP/MeP-dR自杀基因系统 AFP阳性肝肿瘤 HepG2细胞基因治疗

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汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G_2-IL-2嵌合基因的稳定表达

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第2期35卷 163-165页

作者：朱振华黄汉菊华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

目的探讨汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2-IL-2嵌合基因(IL-2-G2)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞获得稳定表达可溶性融合蛋白的可行性。方法将人源IL-2基因与汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2的cDNA分别克隆于真核表达载体pcDNA3.1-HisB,构建重组真... 详细信息

目的探讨汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2-IL-2嵌合基因(IL-2-G2)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞获得稳定表达可溶性融合蛋白的可行性。方法将人源IL-2基因与汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2的cDNA分别克隆于真核表达载体pcDNA3.1-HisB,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2,在脂质体介导下,将其导入CHO细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后用原位杂交、ELISA、SDS-PAGE电泳方法检测IL-2-G2基因在CHO细胞中的稳定表达情况。结果经原位杂交和SDS-PAGE电泳证实,转染pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2的CHO细胞内有IL-2-G2的mRNA转录,且在培养上清和CHO细胞胞质中有融合蛋白的表达,经人IL-2 ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物中所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2-G2嵌合基因能够成功导入CHO细胞并获得稳定表达。

关键词：白细胞介素2 病毒融合蛋白中国仓鼠卵巢细胞基因表达

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外排泵高表达和外膜蛋白缺失在铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药中的作用

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中华医学杂志 2006年第7期86卷 457-462页

作者：衣美英王鹏远黄汉菊刘玉村华中科技大学同济医学院微生物教研室武汉430030 北京大学第一医院普外科

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)外科监护室(SICU)分离株对碳青霉烯的耐药机制。方法用W estern印迹和逆转录PCR测定外膜蛋白OprD、OprN表达水平和基因m exA的mRNA水平;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因和主动外排系统M exAB-OprM调控基因m exR,... 详细信息

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)外科监护室(SICU)分离株对碳青霉烯的耐药机制。方法用W estern印迹和逆转录PCR测定外膜蛋白OprD、OprN表达水平和基因m exA的mRNA水平;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因和主动外排系统M exAB-OprM调控基因m exR,并测序。结果从SICU分离的49株PA,42株对碳青霉烯耐药,其OprD表达除PA42外均有不同程度的降低或缺失,而正常表达OprD的7株菌,均对2种碳青霉烯敏感。27株菌高表达主动外排系统M exAB-OprM,高表达组对亚胺培南耐药率81.5%(22/27)与低表达组耐药率86.4%(19/22)比较差异无统计学意义(χ2=0.005,P=0.943);而高表达组对美罗培南耐药率44.4%(12/27)与低表达组耐药率13.6%(3/22)比较差异有统计学意义(χ2=5.417,P=0.020)。14株表达了M exEF-OprN,但表达组对亚胺培南和美罗培南耐药率与未表达组耐药率比较差异均无统计学意义(χ2=0.000,P=1.000)。8株高表达M exAB-OprM主动外排系统的调控基因m exR发生变异,其中7株出现氨基酸替换,1株提前出现终止密码子。未发现产IMP、VIM金属酶菌株。结论本院SICU分离的PA,对碳青霉烯耐药主要是由外膜蛋白OprD表达降低或缺失引起,与IMP、VIM金属酶无关;主动外排系统M exAB-OprM的高表达对美罗培南的耐药起重要作用;其高表达与调控基因m exR变异有关。

关键词：假单胞菌铜绿卡巴配能类细菌外膜蛋白质类主动外排系统

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PNP/MeP-dR系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究

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肿瘤 2006年第2期26卷 112-115页

作者：蔡晓坤周俊立林菊生孙雪梅薛秀兰李超华中科技大学附属同济医院消化内科肝病所武汉430030 华中科科技大学同济医学院基础部微生物教研室武汉430030

目的探讨新型嘌呤核苷磷酸化酶/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(PNP/MeP-dR)自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用。方法构建PNP基因真核表达载体pcDNA3.0/PNP,脂质体介导法将其导入HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的细胞株HepG2/... 详细信息

目的探讨新型嘌呤核苷磷酸化酶/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(PNP/MeP-dR)自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用。方法构建PNP基因真核表达载体pcDNA3.0/PNP,脂质体介导法将其导入HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的细胞株HepG2/PNP。采用台盼蓝拒染法测绘细胞生长曲线,MTT法和FCM检测细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,HPLC检测PNP酶活性。结果HepG2/PNP细胞对MeP-dR十分敏感,作用4d后MeP-dR对HepG2/PNP的IC50为4.5μmol/L,而100μmol/L的MeP-dR即可最大限度地杀死HepG2/PNP细胞。100μmol/L MeP-dR作用8d后,混合细胞中HepG2/PNP比例仅占5%即可导致所有细胞死亡。HPLC结果显示,PNP基因产物能够将MeP-dR转化为6-MP。结论PNP/MeP-dR系统对肝癌细胞的杀瘤效果明显优于传统的自杀基因系统。本研究为该系统应用于肝癌体内治疗打下基础。

关键词：肝肿瘤 PNP/MeP-dR自杀基因系统转染基因疗法 HepG2细胞

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