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华中科技大学学报（医学版） 2017年第2期46卷 170-174页

作者：王强潘丽红吕丹朱慧芬武汉科技大学医学院病原生物与免疫学系武汉430065 杭州医学院病原生物与免疫学教研室杭州310000 华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测... 详细信息

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+Hspa5,酶切鉴定;将pgsiRNA-Birc5+Hspa5转染HepG2细胞48h后采用Real-time PCR检测Birc5和Hspa5的mRNA表达水平。结果经酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+Hspa5符合酶切鉴定结果;转染pgsiRNA-Birc5+Hspa5 48h后HepG2细胞Birc5和Hspa5mRNA表达均显著下降,未转染组Birc5和Hspa5mRNA的相对表达量均为1.0,pgsiRNA-Birc5+Hspa5组Birc5为0.15(P<0.05),Hspa5为0.37(P<0.05),表明双干扰载体构建成功。结论成功构建了Birc5和Hspa5双干扰siRNA质粒,为进一步同时靶向沉默肿瘤Birc5和Hspa5基因研究提供了工具和基础。

关键词： Birc5 Hspa5 siRNA

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TGF-β刺激对小鼠脾脏树突状细胞功能的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第3期37卷 165-170页

作者：杨菲薛婷陈松刘静茹黄慧芳罗悦晨廖芳冯晓明中国医学科学院血液病医院血液学研究所血液学国家重点实验室天津300020 华中科技大学同济医学院基础医学微生物教研室武汉430030 福建医科大学附属协和医院中心实验室福州350001

目的探索转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）通过调节树突状细胞（dendritic cells，DCs）的功能从而抑制CD4^＋ T细胞增殖活化的可能作用机制。方法应用CD11c＋免疫磁珠分选小鼠脾脏DCs，并检测其纯度。TGF-β处... 详细信息

目的探索转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）通过调节树突状细胞（dendritic cells，DCs）的功能从而抑制CD4^＋ T细胞增殖活化的可能作用机制。方法应用CD11c＋免疫磁珠分选小鼠脾脏DCs，并检测其纯度。TGF-β处理DCs后，进行基因芯片检测。实时定量PCR验证基因芯片结果。DCs经TGF-β处理后和CD4^＋ T细胞共培养，流式细胞术检测CD4^＋ T细胞的活化和增殖。结果CD11c磁珠分选DCs纯度可以达到95%。TGF-β处理DCs后，抑制DCs表面CD53、CD69、CD33、CD74、CD93分子的表达；抑制趋化因子Ccl3、Ccl5、Ccl9、Ccl6、Ccl17、Cxcl10、Ccl22、Ccl4、Ccr7、Ccl2、Cxcl9、Ccl7的表达；抑制IL-2ra、IL-12rb2、IL-15ra、IL-1b、IL-15炎性细胞因子及其受体的表达；抑制CD4^＋ T细胞的增殖和活化。结论TGF-β可以抑制DCs部分重要的表面CD分子、趋化因子及其受体、细胞因子及其受体的表达，最终抑制CD4^＋T细胞的促活化和增殖。

关键词：转化生长因子β 基因芯片树突状细胞 CD4^+T细胞

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河南某地区初中生安全感对意外伤害的影响

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郑州大学学报（医学版） 2017年第4期52卷 463-466页

作者：全善爱张丽娜李勇淳张德甫娄晓民李晏李文杰郑州大学公共卫生学院儿童青少年卫生与妇幼保健学教研室郑州450001 华中科技大学同济医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学系武汉430032 郑州大学药学院微生物与生化药学系郑州450001 郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001

目的:了解初中生意外伤害的发生情况及其与安全感之间的关系。方法:采用便利抽样法对周口市付井镇一所中学的在校学生共936人进行问卷调查,对其基本情况、意外伤害和安全感进行分析。结果:初中生1 a内意外伤害发生率为22.3%。男生的意... 详细信息

目的:了解初中生意外伤害的发生情况及其与安全感之间的关系。方法:采用便利抽样法对周口市付井镇一所中学的在校学生共936人进行问卷调查,对其基本情况、意外伤害和安全感进行分析。结果:初中生1 a内意外伤害发生率为22.3%。男生的意外伤害发生率(26.2%)高于女生(18.8%);非独生子女、高年级、性格开朗好动、家住农村的学生的安全感评分较高;曾发生过意外伤害的学生的安全感评分为(49.763±11.278)分,比没有发生意外伤害的安全感评分[(52.400±11.973)分]低(P均<0.05)。性格喜静者发生意外伤害的危险性(调整OR=1.669,95%CI=1.030~2.706)和好动者发生意外伤害的危险性(调整OR=2.438,95%CI=1.457~4.078)均比性格一般者要高;安全感高是发生意外伤害的保护因素(调整OR=0.977,95%CI=0.962~0.991)。结论:初中生的意外伤害发生率较高,与性别、性格及安全感关系密切。

关键词：初中生意外伤害安全感河南省

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脂多糖通过调控树突状细胞存活和分泌细胞因子促进CD4^+T细胞增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第9期32卷 1153-1157,1163页

作者：陈松卢利莎王伟强薛婷余娟孙志娜赵春晓廖芳中国医学科学院血液病医院血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学总医院消化科天津300052 华中科技大学同济医学院基础医学院微生物教研室湖北武汉430030

目的探索脂多糖(LPS)调节树突状细胞(DC)的功能,促进T细胞免疫反应的机制。方法应用CDllc^+免疫磁珠分离小鼠脾脏DC。LPS处理DC后。流式细胞术检测DC表面的共刺激分子CD80和CD86的表达,ELISA检测DC培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、I... 详细信息

目的探索脂多糖(LPS)调节树突状细胞(DC)的功能,促进T细胞免疫反应的机制。方法应用CDllc^+免疫磁珠分离小鼠脾脏DC。LPS处理DC后。流式细胞术检测DC表面的共刺激分子CD80和CD86的表达,ELISA检测DC培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-12p40、IL-12p70、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测DC凋亡,Phos-flow技术检测核因子κB P65(NF-κB P65)磷酸化水平,实时定量PCR检测基因芯片变化差异明显基因的mRNA水平,DC经OVA323-329多肽处理后与和CD4^+T细胞共培养,流式细胞术检测CD4^+T细胞的增殖。结果利用CD11 c磁珠分离,可获得纯度为93%的DC,LPS可以上调DC表面CD80和CD86的表达,增强DC介导的CD4^+T细胞的增殖。并且LPS能促进促炎细胞因子IL-12 p40、TNF-α和IL-6的分泌,同时通过NF-κB通路抑制DC的凋亡。结论 LPS通过调节DC的存活和细胞因子的产生促进DC介导的CD4^+T细胞的增殖。

关键词：树突状细胞脂多糖凋亡 CD4+T细胞

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siRNA干扰血管生成素2基因表达抑制小鼠肝癌移植瘤生长

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华中科技大学学报（医学版） 2016年第6期45卷 613-617页

作者：李霞何攀文吴建红朱清静蔡艳萍韩晓群武汉市医疗救治中心肝病科武汉430023 华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院检验科武汉430014 宜春学院医学院微生物与免疫学教研室宜春336000

目的探讨siRNA干扰血管生成素2(Ang-2)基因表达对小鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法分别以转染pLVX-shRNA-Ang-2、pLVX-Ang-2的人肝癌HepG2细胞及未转染的HepG2细胞为来源,建立裸鼠皮下移植瘤模型。实验分3组:pLVX-shRNA-Ang-2组、pLV... 详细信息

目的探讨siRNA干扰血管生成素2(Ang-2)基因表达对小鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法分别以转染pLVX-shRNA-Ang-2、pLVX-Ang-2的人肝癌HepG2细胞及未转染的HepG2细胞为来源,建立裸鼠皮下移植瘤模型。实验分3组:pLVX-shRNA-Ang-2组、pLVX-Ang-2组和对照组,每组10只。观察并测量瘤体体积,各组肿瘤组织分别行苏木精-伊红染色及透射电子显微镜下观察,对比病理改变。分别采用Real-time PCR和Western blot检测肿瘤组织中Ang-2基因和蛋白表达,采用免疫荧光染色检测CD34表达。结果与pLVX-Ang-2组和对照组比较,pLVXshRNA-Ang-2组瘤体体积小,组织坏死不明显,肿瘤细胞超微结构基本正常,Ang-2基因及蛋白表达明显下降(均P<0.05),CD34表达明显下降。结论采用siRNA干扰技术敲除Ang-2基因,能够减少肝癌组织新生血管的生成,抑制肿瘤的生长。

关键词： RNA干扰血管生成素2 肝癌

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Tau聚集通过失活钙调蛋白介导的核CaMKIV/CREB信号诱发突触损伤和记忆缺陷

Tau聚集通过失活钙调蛋白介导的核CaMKIV/CREB信号诱发突触损伤和...

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中国生理学会张锡钧基金第十四届全国青年优秀生理学学术论文交流会暨中国生理学会第十二届全国青年生理学工作者学术会议

作者：尹雅玲高笛王亚莉王志昊王鑫叶金旺吴冬琴方琳皮桂林杨莹王小川路承彪叶克强王建枝华中科技大学同济医学院重大神经系统疾病重点实验室基础医学学院脑科学协同创新中心病理生理学系湖北武汉430030 新乡医学院河南省脑研究重点实验室预备基地生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 埃默里大学医学院病理与实验医学中心美国30322 华中科技大学同济医学院重大神经系统疾病重点实验室基础医学学院脑科学协同创新中心病理生理学系湖北武汉430030 南通大学神经再生协同创新中心江苏南通226001

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Tau聚集通过失活钙调蛋白介导的核CaMKIV/CREB信号诱发突触损伤和记忆缺陷

Tau聚集通过失活钙调蛋白介导的核CaMKIV/CREB信号诱发突触损伤和...

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中国生理学会张锡钧基金会第十四届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十二届全国青年生理学工作者学术会议

作者：尹雅玲高笛王亚莉王志昊王鑫叶金旺吴冬琴方琳皮桂林杨莹王小川路承彪叶克强王建枝华中科技大学同济医学院重大神经系统疾病重点实验室基础医学学院脑科学协同创新中心病理生理学系新乡医学院河南省脑研究重点实验室预备基地生理学与神经生物学教研室埃默里大学医学院病理与实验医学中心南通大学神经再生协同创新中心

阿尔茨海默氏病(AD)是最常见的神经变性病症,渐进式记忆损失是其主要特点。AD脑中β淀粉样蛋白的胞外沉淀(Aβ),细胞内tau积聚形成原纤维缠结和突触退化是标志性的病症。研究表明,神经纤维的缠结形成与痴呆的程度呈正相关,并且Aβ毒性需... 详细信息

阿尔茨海默氏病(AD)是最常见的神经变性病症,渐进式记忆损失是其主要特点。AD脑中β淀粉样蛋白的胞外沉淀(Aβ),细胞内tau积聚形成原纤维缠结和突触退化是标志性的病症。研究表明,神经纤维的缠结形成与痴呆的程度呈正相关,并且Aβ毒性需要tau的存在。这些数据表明在AD患者的认知障碍时tau积聚的神经变性中至关重要的作用。作为骨架蛋白,tau积

关键词： CaMKIV/CREB 钙调蛋白 Tau

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肺炎链球菌自溶素对感染性肺炎的诊断价值

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中华医院感染学杂志 2015年第21期25卷 4801-4804页

作者：邹琴孙文平杨光周杰罗红华中科技大学同济医学院附属普爱医院检验科湖北武汉430033 大连医科大学临床免疫与微生物教研室辽宁大连116044 大连市友谊医院检验科辽宁大连116100

目的通过基因原核表达技术获取肺炎链球菌自溶素LytA重组蛋白(rLytA),探讨其对感染性肺炎患者的血清学诊断价值。方法根据Genbank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物;采用PCR技术以肺炎链球菌基因组DNA为... 详细信息

目的通过基因原核表达技术获取肺炎链球菌自溶素LytA重组蛋白(rLytA),探讨其对感染性肺炎患者的血清学诊断价值。方法根据Genbank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物;采用PCR技术以肺炎链球菌基因组DNA为模板扩增lytA基因序列;构建重组表达质粒pET32a(+)/lytA,经由IPTG诱导后通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA;Western blot测定表达蛋白的抗体结合活性;以rLytA为抗原,建立ELISA反应模式,测定2013年3-6月36例临床诊断为CAP并经细菌学确定的患者血清标本中相应IgG和IgM抗体,评价对肺炎链球菌感染性肺炎的诊断价值。结果成功构建原核表达质粒pET32a(+)/lytA,表达的rLytA具有较好的抗体结合活性;CAP患者血清IgM和IgG类抗LytA的抗体滴度均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其诊断的敏感性均高于常规的痰培养和血培养(P<0.01)。结论以重组蛋白LytA为抗原建立ELISA反应模式可用于肺炎链球菌感染的血清学诊断,快速、客观,具有一定的应用价值。

关键词：肺炎链球菌自溶素原核表达酶联免疫吸附试验

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灵芝多糖肽对阿尔茨海默病大鼠β淀粉样蛋白含量和tau蛋白过度磷酸化的影响

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中华实用诊断与治疗杂志 2015年第9期29卷 862-865页

作者：李宜培王雪银陈洁靳力王黎河南医学高等专科学校病理生理学教研室郑州451191 河南医学高等专科学校微生物与免疫学教研室郑州451191 华中科技大学同济医学院病理生理学教研室武汉430000 河南医学高等专科学校老年病学研究所郑州451191

目的观察灵芝多糖肽(ganoderma lucidum polysacchraride peptide,GLPP)对阿尔茨海默病大鼠空间记忆能力、海马β淀粉样蛋白(βamyloid petide,Aβ)含量、tau蛋白磷酸化及超微结构的影响及机制。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组... 详细信息

目的观察灵芝多糖肽(ganoderma lucidum polysacchraride peptide,GLPP)对阿尔茨海默病大鼠空间记忆能力、海马β淀粉样蛋白(βamyloid petide,Aβ)含量、tau蛋白磷酸化及超微结构的影响及机制。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、模型组、生理盐水组、GLPP组各12只。除对照组(正常昼夜节律)外,其余各组连续光照(光照度400Lux,24h)30d,光照期间GLPP组灌胃质量分数2.5%GLPP 250mg/kg,生理盐水组灌胃相同体积生理盐水,均1次/d。光照30d后,采用Morris水迷宫试验检测大鼠空间记忆能力,采用放射免疫法检测大鼠海马Aβ含量,采用免疫组织化学法检测海马tau蛋白磷酸化水平,应用透射电镜观察海马超微结构改变。结果模型组和生理盐水组大鼠寻找平台潜伏期[(32.96±5.52)、(35.55±6.28)s]、海马Aβ含量[(66.12±1.81)、(63.54±1.17)ng/L]、海马tau蛋白在Ser396/Ser404(PHF-1位点)(42.60±3.91、39.82±3.78)和Ser199/Ser202(tau-1位点)(28.71±3.45、27.43±2.27)发生过度磷酸化阳性细胞数明显高于对照组[(12.95±2.48)s,(39.62±2.71)ng/L、28.73±2.99、21.03±2.73]和GLPP组[(14.29±3.31)s,(40.89±3.13)ng/L、30.80±4.38、22.64±2.81](P<0.05),模型组与生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05);透射电镜结果显示,对照组和GLPP组大鼠海马组织超微结构正常,模型组和生理盐水组大鼠海马组织线粒体肿胀,线粒体嵴模糊或消失,结构破坏,神经突触减少甚至缺失,突触间隙模糊,突触小泡数量减少。结论 GLPP可使持续光照导致的阿尔茨海默病大鼠海马Aβ水平降低,抑制tau蛋白过度磷酸化,减轻超微结构的损伤,提高大鼠空间记忆能力。

关键词：阿尔茨海默病灵芝多糖肽 β淀粉样蛋白 tau蛋白过度磷酸化海马超微结构空间记忆

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中国在翻译后修饰的生物信息学研究领域的进展与前瞻

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遗传 2015年第7期37卷 621-634页

作者：刘泽先蔡煜东郭雪江李骜李婷婷邱建丁任间施绍萍宋江宁王明会谢鹭薛宇张子丁赵兴明华中科技大学生命科学与技术学院生物医学工程系武汉430074 上海大学系统生物技术研究所上海200444 南京医科大学组织胚胎学系生殖医学国家重点实验室南京210029 中国科学技术大学信息科学与技术学院合肥230027 北京大学医学部基础医学院医学信息学系北京100191 南昌大学化学学院化学系南昌330031 中山大学生命科学学院生物防治国家重点实验室广州510275 南昌大学理学院数学系南昌330031 中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室与系统微生物工程重点实验室天津300308 上海科学院上海生物信息技术研究中心上海201203 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193 同济大学电子与信息工程学院计算机系上海201804

翻译后修饰在调控蛋白质构象变化、活性以及功能方面具有重要作用,并参与了几乎所有细胞通路和过程。蛋白质翻译后修饰的鉴定是阐明细胞内分子机理的基础。相对于劳动密集的、耗费时间的实验工作,利用各种生物信息学方法开展翻译后修饰... 详细信息

翻译后修饰在调控蛋白质构象变化、活性以及功能方面具有重要作用,并参与了几乎所有细胞通路和过程。蛋白质翻译后修饰的鉴定是阐明细胞内分子机理的基础。相对于劳动密集的、耗费时间的实验工作,利用各种生物信息学方法开展翻译后修饰预测,能够提供准确、简便和快速的研究方案,并产生有价值的信息为进一步实验研究提供参考。文章主要综述了中国生物信息学者在翻译后修饰生物信息学领域所取得的研究进展,包括修饰底物与位点预测的计算方法学设计与完善、在线或本地化工具的设计与维护、修饰相关数据库及数据资源的构建及基于修饰蛋白质组学数据的生物信息学分析。通过比较国内外的同类研究,发现优势和不足,并对未来的研究作出前瞻。

关键词：翻译后修饰共价修饰修饰组学磷酸化

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