检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究与临床康复 2011年第33期15卷 6177-6181页

作者：王文玉樊红琨赵国强乔鹏王书春伍钢华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心湖北省武汉市430023 河南省人民医院肿瘤科河南省郑州市450003 郑州大学基础医学院生理教研室河南省郑州市450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南省郑州市450052

背景:Beclin 1基因是哺乳动物的自噬调控基因。目的:实验拟构建Beclin 1基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增目的基因Beclin 1后插入慢病毒表达载体pLenex中,构建重组载体pLenex-Beclin 1。使用聚合酶链反应、双酶切和DNA的测... 详细信息

背景:Beclin 1基因是哺乳动物的自噬调控基因。目的:实验拟构建Beclin 1基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增目的基因Beclin 1后插入慢病毒表达载体pLenex中,构建重组载体pLenex-Beclin 1。使用聚合酶链反应、双酶切和DNA的测序方法对其进行鉴定,并与辅助包装质粒共感染293T细胞。慢病毒颗粒转染非小细胞肺癌A549细胞后,用蛋白质印迹法检测Beclin 1基因的过表达效率。结果与结论:聚合酶链反应鉴定结果显示扩增的阳性片段已插入pLenex载体,聚合酶链反应、双酶切和DNA测序结果表明,重组慢病毒载体pLenex-Beclin 1的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染A549细胞后,细胞内Beclin 1蛋白高效表达。结果证实,实验成功构建了Beclin 1基因慢病毒过表达载体。

关键词：慢病毒载体 Beclin 1基因 A549细胞过表达组织构建

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减毒结核菌株H37Ra预防小鼠结核病的实验研究

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现代免疫学 2011年第4期31卷 311-314页

作者：刘来成王淑玲范雄林曾佑群吴扬卢贤瑜张鹏辉重庆医科大学附属儿童医院临检中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014 重庆市第三人民医院重庆市临床检验中心重庆400014 华中科技大学同济医学院微生物学教研室武汉430030 重庆医科大学临床免疫学教研室重庆400016

为研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果,将C57BL/6小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI),ELISA法检测培... 详细信息

为研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果,将C57BL/6小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI),ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-2水平。另一部分免疫小鼠用结核分枝杆菌(Mycobacterium tubercu-losis,MTB)毒株H37Rv经腹腔感染,4周后处死,取稀释的小鼠肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21 d后计数肺组织中的MTB菌落数,同时对小鼠部分肺组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度。结果显示,H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞SI、IFN-γ和IL-2水平均显著高于NS对照组(P<0.05)。感染4周后,H37Ra组小鼠肺组织荷菌量比NS对照组下降了0.95log10CFU(P<0.05),肺组织病理变化明显减轻。提示H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性细胞免疫应答,能够抵抗MTB毒株H37Rv的攻击,可作为新型结核疫苗的候选组分。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra 免疫应答免疫保护结核病

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RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2010年第8期27卷 1035-1037页

作者：肖勇王雪松王国斌熊宇芳卢晓明舒晓刚华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科武汉430022 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因（RIZ1）表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状... 详细信息

目的观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因（RIZ1）表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从（4.4±1.7）%增高到（23.8±2.6）%,差异有统计学意义（P＜0.05）,5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义（P＞O.05）.结论抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.

关键词：结肠癌 RIZ1基因 DNA甲基化增殖

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Celecoxib可通过抑制核转录因子-κB活性诱导SGC7901/ADR细胞的凋亡

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中华实验外科杂志 2010年第9期27卷 1269-1271页

作者：周洁陈虎郑海陈道达蒋春舫陈庆华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科

目的观察环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂Celecoxib对胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药1（mdr1）基因表达、核转录因子（NF）-κB激活水平及细胞凋亡的作用.方法实验分为4组：SGC7901组、SGC7901＋Celecoxib组、SGC7901/ADR组和SGC7901/... 详细信息

目的观察环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂Celecoxib对胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药1（mdr1）基因表达、核转录因子（NF）-κB激活水平及细胞凋亡的作用.方法实验分为4组：SGC7901组、SGC7901＋Celecoxib组、SGC7901/ADR组和SGC7901/ADR＋Celecoxib组.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测mdr1基因的表达,电泳迁移率实验（EMSA）测定NF-κB激活水平,流式细胞术检测细胞内Rh123聚集及细胞凋亡.结果 SGC7901/ADR细胞中mdr1基因表达和NF-κB活性分别为SGC7901组的2.4倍和3.2倍（P＜0.01）,Celecoxib可显著抑制SGC7901和SGC7901/ADR细胞mdr1基因的表达及NF-κB活性,使SGC7901和SGC7901/ADR细胞内Rh123的聚集分别增加1.2倍和1.9倍,可使ADR诱导的SGC7901和SGC7901/ADR细胞的凋亡率分别提高1.65倍和2.98倍.结论 Celecoxib可能通过抑制NF-κB活性而抑制mdr1基因的表达,进而增加SGC7901/ADR细胞内药物聚集并促进细胞凋亡.

关键词： Celecoxib 核转录因子κB 胃癌

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抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2010年第8期27卷 1066-1068页

作者：陈庆陈虎郑海陈道达蒋春舫周洁华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的观察突变型IκBα抑制核转录因子κB（NF-κB）活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1（mdr1）的表达及细胞凋亡的影响.方法突变型IκBα真核表达重组体（pCMV4-mIκBα）经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁... 详细信息

目的观察突变型IκBα抑制核转录因子κB（NF-κB）活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1（mdr1）的表达及细胞凋亡的影响.方法突变型IκBα真核表达重组体（pCMV4-mIκBα）经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验（EMSA）检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123（Rh123）的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为（14.15±1.52）,与对照组（4.37±1.31）比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.

关键词：胃癌核因子-κB 多药耐药基因1 脱噬作用

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电针对化学性炎性胃痛时幽门括约肌几种神经递质的调节作用

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第4期39卷 519-523页

作者：许晓利易卉玲鲁雄兵叶章讯赵珊李琴茹立强江汉大学医学院解剖学教研室武汉430056 华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系武汉430030

目的探讨大鼠幽门括约肌在化学性炎性痛时一氧化氮（nitric oxide,NO）能、胆碱（acetylcholine,ACh）能神经元和血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide,VIP）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）的变化,以及电针抗化学性炎性胃痛的神经化学机制。方法①甲醛灌胃建立胃痛模型。②电针＂足三里＂穴镇痛。③采用还原型辅酶Ⅱ和亚铁氰化铜直接显色的组织化学方法及PAP免疫组织化学方法分别显示括约肌内一氧化氮合酶（NOS）和胆碱酯酶（AChE）阳性神经元及VIP、CGRP免疫反应性（IR）神经元成分。结果①正常括约肌黏膜下神经丛和肌间神经丛有散在NOS或AChE阳性神经元胞体和神经纤维;CGRP-IR、VIP-IR纤维较丰富,2~3个弱阳性神经元胞体形成丛。以上几种神经元胞体在括约肌增厚部位普遍较多,神经纤维形成浓密的丛状结构;邻近括约肌的胃、肠端侧也有丰富的阳性神经元成分。②甲醛致胃痛时括约肌黏膜下神经丛及肌间神经丛NOS、AChE和VIP阳性神经元活性均降低。图像分析显示,肌内NOS、AChE和VIP阳性神经元的平均吸光度值,甲醛组较正常对照组显著降低（P〈0.01）;但甲醛组CGRP较正常对照组升高（P〈0.05）。③电针使NOS、AChE、VIP、CGRP的组织化学特性恢复至接近正常状态。结论电针对正常胃肠功能起调控作用并参与胃肠动力障碍的调节,其机制是通过括约肌内的神经及其递质,特别是肠神经系统（胆碱能、NO能、VIP能、CGRP能神经）的自主调节途径而实现的。

关键词：电针化学性炎性痛一氧化氮合酶胆碱酯酶血管活性肠肽降钙素基因相关肽幽门括约肌

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花生四烯酸对高脂饮食大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出影响的研究

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中国现代医学杂志 2010年第3期20卷 338-341,345页

作者：吴勉云王西明赵雪花成彩莲陈勇何丽娅王震宇武汉科技大学基础医学院生物化学教研室湖北武汉430065 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学教研室湖北武汉430071

目的观察花生四烯酸对大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出紊乱的预防作用。方法将230～250g24只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常组(8例),高脂组(8例),高脂+花生四烯酸组即预防组(8例)。饲养12周。饲养至第12周实验终点时进行口服葡萄糖耐受... 详细信息

目的观察花生四烯酸对大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出紊乱的预防作用。方法将230～250g24只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常组(8例),高脂组(8例),高脂+花生四烯酸组即预防组(8例)。饲养12周。饲养至第12周实验终点时进行口服葡萄糖耐受实验。断头处死各组处于空腹状态下的大鼠,取肝脏,蒽酮法测定肝糖原含量,并用RT-PCR法检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)及糖原合酶(GS) mRNA水平。结果高脂组与正常对照组比较,肝糖原含量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数显著升高(P<0.01),但基础状态下体重差异无显著性。预防组和高脂组比较,肝糖原含量(P<0.05)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著降低,但与正常对照组比较,肝糖原含量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著升高。高脂组与正常对照组比较,G-6-Pase mRNA水平显著升高(P<0.01),PEPCK mRNA水平略有升高,但差异无显著性。预防组和高脂组比较,PEPCK mRNA水平(P<0.05)、G-6-Pase mRNA水平显著降低(P<0.01),但3组大鼠GSmRNA差异没有显著性。结论花生四烯酸预防高脂诱导的全身胰岛素抵抗和肝糖输出紊乱作用明显,但不彻底。相关的PEPCK、G-6-Pase mRNA水平显著降低,但GS mRNA水平没有显著性差异。

关键词：胰岛素抵抗花生四烯酸糖原磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶

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Livin靶向siRNA对大肠癌细胞凋亡的诱导作用

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中华肿瘤防治杂志 2010年第12期17卷 890-893页

作者：蔡明王国斌陶凯雄韩高雄蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科湖北武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室湖北武汉430030

目的:构建Livin靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应。方法:构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测Livin的表达,MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测... 详细信息

目的:构建Livin靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应。方法:构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测Livin的表达,MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞的凋亡效应。结果:经酶切鉴定和测序结果证实,Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞LivinmRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%,P<0.05,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡率为(13.36±1.45)%,P<0.05。结论:Livin靶向siR-NA重组表达载体构建成功,能有效抑制Livin基因表达并能显著诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：结直肠肿瘤 Livin RNA干扰基因治疗

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HLA-DR1二聚体的构建及其在昆虫细胞中的表达和纯化

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第3期39卷 305-310页

作者：宋银宏刘燕牛力翁秀芳孙伟于倩吴雄文华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030 九江学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室九江332000 九江学院基础医学院生理学与病理生理学教研室九江332000

目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为D... 详细信息

目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为DRα-Fos和DRβ-Jun,DRα和DRβ可凭借Fos和Jun的亮氨酸拉链结合形成DR1分子,再通过EcoRⅠ酶切位点将DRα-Fos和人IgG1的Fc段相连,形成DRα-Fos-Fc重组序列,2个同源的DR1分子可通过IgG1的Fc段的二硫键结合形成二聚体。分别将DRα-Fos-Fc及DRβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的2个多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc]。对构建的载体进行PCR及限制性内切酶酶切鉴定和测序。采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA及Westernblot检测HLA-DR1的表达。结果 PCR及酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与GenBank一致。ELISA和Westernblot检测表明DR1杆状病毒感染的Sf9细胞培养上清HLA-DR1表达呈阳性,且表达的HLA-DR1分子具有正确的构象。结论成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc],并在Sf9细胞中得到表达,为研究HLA-DR1限制性的T细胞应答奠定了基础。

关键词： HLA-DR1 二聚体杆状病毒载体昆虫细胞基因表达

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幽门螺杆菌vacA基因及其细胞空泡毒素的研究进展

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咸宁学院学报（医学版） 2010年第3期24卷 268-270页

作者：孙剑刚叶嗣颖咸宁学院基础医学院医学微生物学教研室湖北咸宁437100 华中科技大学同济医学院病原生物系

幽门螺杆菌(Hp)是引起人类上消化道疾病的主要致病菌,现已证实其与人类多种消化系统疾病相关,包括慢性胃炎、慢性消化性溃疡、胃息肉及胃癌等。Hp已被视为人类消化道疾病中最常见的致病因素。目前Hp的感染呈全球性分布,在发达国家人群... 详细信息

幽门螺杆菌(Hp)是引起人类上消化道疾病的主要致病菌,现已证实其与人类多种消化系统疾病相关,包括慢性胃炎、慢性消化性溃疡、胃息肉及胃癌等。Hp已被视为人类消化道疾病中最常见的致病因素。目前Hp的感染呈全球性分布,在发达国家人群中Hp感染率为30%-50%,而在发展中国家可达60%-70%。近20多年来,随着分子流行病学、分子免疫学、[第一段]

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素 vacA基因上消化道疾病慢性消化性溃疡消化系统疾病分子流行病学发展中国家

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