检索结果-内蒙古大学图书馆

国际免疫学杂志 2008年第4期31卷 279-283页

作者：张娥娟田拥军徐飓陆蒙吉(审校) 杨东亮(审校) 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院病原生物学系华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室

杀伤性T细胞（CTL）是病毒感染过程中主要的效应细胞。在急性病毒性感染中，CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞，分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒。而在慢性病毒感染过程中，病毒特异性CTL发生克隆耗竭，细胞数量少，细胞功能受损，分... 详细信息

杀伤性T细胞（CTL）是病毒感染过程中主要的效应细胞。在急性病毒性感染中，CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞，分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒。而在慢性病毒感染过程中，病毒特异性CTL发生克隆耗竭，细胞数量少，细胞功能受损，分泌细胞因子能力下降。目前证明，CD28家族成员Programmed Death-1（PD-1）是一种重要的细胞表面分子，能够抑制CTL细胞功能，参与外周免疫耐受，维持T细胞克隆耗竭，保护机体不受免疫病理损伤。在慢性病毒性感染中，T细胞表面的PD-1与其受体PD．L1／2结合后，传递抑制性信号，下调外周T细胞功能。阻断PD-1通路，能够重建CD8^＋T细胞功能，抑制病毒复制，促进病毒清除。因此，通过干扰PD-1／PD-L1抑制途径进行免疫调节，可能是处理慢性病毒感染性疾病的一个新方法。

关键词：感染免疫慢性病毒感染 PD-1

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结核菌H37Ra诱导迟发型超敏反应的探讨

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现代预防医学 2008年第2期35卷 343-344+350页

作者：王淑玲刘来成范雄林付瑞玲卢贤瑜重庆医科大学检验系临床免疫学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室华中科技大学同济医学院微生物学教研室

[目的]探讨结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后能否诱发迟发型超敏反应及最佳的观测时间。[方法]Balb/c小鼠随机分为3组。分别用H37Ra、BCG和NS皮内免疫,6周后每组小鼠皮内注射PPD,游标卡尺测定24、48和72h局部皮肤红肿、硬结直径。[结果]H37R... 详细信息

[目的]探讨结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后能否诱发迟发型超敏反应及最佳的观测时间。[方法]Balb/c小鼠随机分为3组。分别用H37Ra、BCG和NS皮内免疫,6周后每组小鼠皮内注射PPD,游标卡尺测定24、48和72h局部皮肤红肿、硬结直径。[结果]H37Ra组24、48和72h的局部皮肤红肿、硬结直径结果分别是(6.17±0.20)、(5.23±0.35)、(3.59±0.40)mm,24和48h反应稍弱于BCG组[(6.71±0.66)、(5.89±0.52)mm],无统计学意义(P﹥0.05)。与NS对照组相比,H37Ra和BCG免疫小鼠后均能诱导显著的迟发超敏型反应(P﹤0.05)。H37Ra组和BCG组均24h反应最明显。[结论]结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠6周后能诱导迟发型超敏反应,较BCG弱;24h为最佳观测时间。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra BCG 迟发型超敏反应

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人心肌肌钙蛋白I基因的原核表达及抗体制备

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现代检验医学杂志 2008年第5期23卷 15-17页

作者：刘红梅刘汉才屈伸咸宁学院医学院生物化学与分子生物学教研室华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系

目的进行人心肌肌钙蛋白I（cardiac troponinI，cTnI）基因原核表达载体的构建，获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT—PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段，将其插入原核表达... 详细信息

目的进行人心肌肌钙蛋白I（cardiac troponinI，cTnI）基因原核表达载体的构建，获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT—PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段，将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白，Ni—NTA树脂纯化，纯化后的融合蛋白免疫小鼠，制备抗血清。通过ELISA，Western blot鉴定血清效价和特异性。结果成功构建了cTnI的原核表达载体，并在大肠埃希菌中荻得了高效表达。Western blot检测证实获得了抗cTnI抗体。结论成功表达了cTnI蛋白并制备了其特异性抗体。

关键词：人心肌肌钙蛋白I 表达多克隆抗体

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MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗抗膀胱癌细胞的体外实验

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山东大学学报（医学版） 2008年第5期46卷 485-489页

作者：马鸣李秀真王超郭洪敏马鑫张旭华中科技大学附属同济医院泌尿外科武汉470030 山东省济宁医学院微生物教研室山东济宁272011 山东省济宁市第一人民医院泌尿外科山东济宁272011

目的探讨黑色素瘤MAGE-3抗原肽致敏的树突状细胞(DC)疫苗体外抗膀胱癌细胞增殖作用及其分子机制。方法采用Ficoll法从HLA-A2型外周血中分离单核细胞,细胞因子GM-CSF和白细胞介素4(IL-4)诱导扩增DC细胞后经MAGE-3抗原肽致敏,致敏DC细胞... 详细信息

目的探讨黑色素瘤MAGE-3抗原肽致敏的树突状细胞(DC)疫苗体外抗膀胱癌细胞增殖作用及其分子机制。方法采用Ficoll法从HLA-A2型外周血中分离单核细胞,细胞因子GM-CSF和白细胞介素4(IL-4)诱导扩增DC细胞后经MAGE-3抗原肽致敏,致敏DC细胞和同型T淋巴细胞共培养法诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。MTT法检测抗原肽致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响,CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和凋亡相关蛋白变化。结果MAGE-3抗原肽致敏的DC对T淋巴细胞增殖率具有明显提高作用,高于无关抗原致敏DC及未致敏DC。经MAGE-3九肽冲击的DC可有效诱导对MAGE-3阳性细胞BIU-87杀伤的CTL活性,而无关抗原肽及未经抗原肽致敏的DC则不具备其杀伤能力。结论MAGE-3九肽致敏DC能显著促进T淋巴细胞增殖并诱导有效杀伤靶细胞的CTL作用。

关键词：膀胱肿瘤树突状细胞肽类,基因黑色素瘤-3基因

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人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因的原核表达及抗体制备

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现代检验医学杂志 2008年第5期23卷 15-17页

作者：刘红梅刘汉才屈伸咸宁学院医学院生物化学与分子生物学教研室湖北咸宁437100 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉430030

目的进行人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)基因原核表达载体的构建,获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白的cDNA片段,将其插入原核表达载体... 详细信息

目的进行人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)基因原核表达载体的构建,获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化,纯化后的融合蛋白免疫小鼠,制备抗血清。通过ELISA,Western blot鉴定血清效价和特异性。结果成功构建了cTnⅠ的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得了高效表达。Western blot检测证实获得了抗cTnI抗体。结论成功表达了cTnⅠ蛋白并制备了其特异性抗体。

关键词：人心肌肌钙蛋白I 表达多克隆抗体

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土拨鼠肝炎病毒和乙型肝炎病毒的核心蛋白存在共同线性B淋巴细胞表位

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中华肝脏病杂志 2007年第8期15卷 605-608页

作者：张振华王蓉田拥军李磊夏剑波龚劲松陆蒙吉龚非力杨东亮华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院微生物教研室华中科技大学同济医学院免疫学研究所

目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该... 详细信息

目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该抗体对WHcAg和HBcAg进行表位分析,并在氨基酸水平进行比对。结果经过ELISA、Western blot、免疫组织化学对比分析,制备的单克隆抗体中有2株与HBcAg和WHcAg有交叉反应,而且灵敏度和特异性相似；针对的抗原表位分别位于HBcAg和WHcAg的1～8位氨基酸和125～140位氨基酸。结论WHcAg和HBcAg存在2个共同的线性B淋巴细胞表位,分别位于1～8位和125～140位氨基酸。

关键词：肝炎核心抗原乙型肝炎病毒 B淋巴细胞表位土拨鼠

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螺杆菌感染与NF—κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 234-239页

作者：张丽叶嗣颖 Ulrich Bohr 陈新山田拥军张小兵华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院法医病理学系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院附属同济医院分子生物学实验中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430030 暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室广州510632 德国马格德堡大学医学院胃肠病学肝病学和传染病学系

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再... 详细信息

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌（***,Hp）的特异基因相对分子质量（Mr）26×10^3的种特异性抗原和相关功能基因（GagA，VacA）。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32．5％（13／40）的食管癌组织中发现有螺杆菌16SrRNA基因存在，正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较，食管癌组织中螺杆菌序列与***的16SrRNA序列有99％～100％同源性。阳性标本均扩增出脚特异基因M，26×10^3种特异性抗原，但仅2例扩增出G田弘基因，3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示，16SrRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100％（13／13），而16SrRNA阴性食管癌组织表达率仅占18．5％（5／27），二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为脚。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加，可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。

关键词：食管癌螺杆菌 PCR NF-κB p65蛋白免疫组化染色

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蛋白激酶C在软脂酸诱导HepG_2细胞胰岛素抵抗中的作用

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中国老年学杂志 2007年第12期27卷 1136-1138页

作者：吴勉云王西明胡晓雨管莎陈培楠段秋红卢涛武汉科技大学医学院生物化学教研室华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学教研室湖北武汉430030

目的从蛋白激酶C(PKC)信号通路角度,探讨游离脂肪酸(FFA)引起肝脏胰岛素抵抗(IR)的可能机制。方法培养HepG2细胞,同时设立对照组、软脂酸(PA)组、高胰岛素组。软脂酸组、高胰岛素组分别用250μmol/L PA、5×10-7mol/L胰岛素处理24h... 详细信息

目的从蛋白激酶C(PKC)信号通路角度,探讨游离脂肪酸(FFA)引起肝脏胰岛素抵抗(IR)的可能机制。方法培养HepG2细胞,同时设立对照组、软脂酸(PA)组、高胰岛素组。软脂酸组、高胰岛素组分别用250μmol/L PA、5×10-7mol/L胰岛素处理24h。然后对照组、软脂酸组再根据胰岛素刺激前加(+)与不加(-)PKC抑制剂白屈菜红碱盐酸盐(chelerythrine chloride,CC)5μmol/L预处理1h,随机分为两亚组:对照组(-)、对照组(+)、PA组(-)、PA组(+)。葡萄糖氧化酶法测定胰岛素刺激后12h葡萄糖消耗量,蒽酮法测定胰岛素刺激后3h点细胞内糖原含量,Western blotting技术检测15min点细胞内P-Ser473PKB、P-Ser21/9GSK-3α/β水平。结果PA组(-)与高胰岛素组葡萄糖消耗量无统计学差异(P=0.523)。葡萄糖消耗量、细胞内糖原含量、P-Ser473PKB、P-Ser21GSK-3α、P-Ser9GSK-3β水平均显示,PA组(-)与对照组(-)比较显著降低(P值依次为0.000,0.000,0.004,0.004,0.028),对照组(+)与对照组(-)比较略有升高但无显著性差异;PA组(+)与PA组(-)比较显著升高(P值依次为0.000,0.014,0.043,0.041,0.035)。结论PA(250μmol/L)体外成功诱导了HepG2细胞产生IR,PKC信号通路在FFA引起肝脏IR中起着重要作用。

关键词：胰岛素抵抗脂肪酸蛋白激酶C 蛋白激酶B 糖原合酶激酶

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靶向DF3的白喉毒素A链基因对乳腺癌细胞的杀伤作用

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中华实验外科杂志 2007年第1期24卷 15-17页

作者：黄文广罗威黄汉菊华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022 同济医学院微生物学教研室

目的探讨白喉毒素A链（DTA）基因在DF3／MUC1启动子调控下的杀伤作用。方法构建含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A链基因的表达载体pGL3-DF3-DTA，转染DF3阳性的乳癌细胞MCF-7，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DTA基因的表达；噻唑蓝... 详细信息

目的探讨白喉毒素A链（DTA）基因在DF3／MUC1启动子调控下的杀伤作用。方法构建含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A链基因的表达载体pGL3-DF3-DTA，转染DF3阳性的乳癌细胞MCF-7，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DTA基因的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长活性；免疫组织化学法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切和测序表明获得了与预期结果相一致的pGL3-DF3-DTA真核表达载体。转染MCF-7细胞后，RT—PCR检测到了249bp的DTA mRNA片段。与对照组比较，转染pGL3-DF3-DTA的MCF-7细胞生长受到了抑制，流式细胞术检测到的凋亡率达39．43％，而对照组仅有0．28％。结论pGL3-DF3-DTA可对DF3阳性的乳癌细胞产生特异性的杀伤，对乳腺癌的基因治疗有潜在的应用价值。

关键词：乳腺肿瘤基因治疗白喉毒素

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大鼠背根神经节神经元瞬时外向钾电流与非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2通道电流特性的比较

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第2期36卷 157-161页

作者：聂辉张玉芹李享元余文静罗加烈胡霞敏李之望武汉科技大学医学院生理学教研室武汉430080 华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系武汉科技大学医学院药理学教研室武汉430080

目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行... 详细信息

目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较。结果背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数最大激活电位分别为(-29.5±3.1)mV和(-3.9±1.0)mV;③半数最大失活电位分别为(-78.5±3.4)mV和(-48.5±0.6)mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8)ms和(71.4±13.2)ms。结论Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分,但不是唯一成分。

关键词：非洲爪蟾卵母细胞钾通道 Kv4.2钾通道背根神经节神经元

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