检索结果-内蒙古大学图书馆

现代检验医学杂志 2008年第5期23卷 15-17页

作者：刘红梅刘汉才屈伸咸宁学院医学院生物化学与分子生物学教研室湖北咸宁437100 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉430030

目的进行人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)基因原核表达载体的构建,获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白的cDNA片段,将其插入原核表达载体... 详细信息

目的进行人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)基因原核表达载体的构建,获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化,纯化后的融合蛋白免疫小鼠,制备抗血清。通过ELISA,Western blot鉴定血清效价和特异性。结果成功构建了cTnⅠ的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得了高效表达。Western blot检测证实获得了抗cTnI抗体。结论成功表达了cTnⅠ蛋白并制备了其特异性抗体。

关键词：人心肌肌钙蛋白I 表达多克隆抗体

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抑制P-糖蛋白可加强FK506对缺血性脑损伤的保护作用

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中华神经科杂志 2007年第2期40卷 112-115页

作者：邢宏义孙圣刚梅元武施静 DirkM.Hermann 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科武汉430022 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室 Department of Neurology University Hospital ZurichSwitzerland

目的探讨多药耐药蛋白(P 糖蛋白,P-glycoprotein,P-gp)对 FK506透过血脑屏障进入脑内浓度及其脑保护作川的影响。方法用腔内线栓法制造小鼠脑缺血再灌注动物模型(MCAO);用甲酚紫染色法显示脑梗死区;用 Western blot 方法观察 P-gp 的表... 详细信息

目的探讨多药耐药蛋白(P 糖蛋白,P-glycoprotein,P-gp)对 FK506透过血脑屏障进入脑内浓度及其脑保护作川的影响。方法用腔内线栓法制造小鼠脑缺血再灌注动物模型(MCAO);用甲酚紫染色法显示脑梗死区;用 Western blot 方法观察 P-gp 的表达;用 ELISA 法检测 FK506浓度;用 TUNEL 法观察凋亡细胞。结果 MCAO 30 min 再灌注3 h 纹状体 P-gp 的表达开始显著升高,持续至24 h,MCAO 90 min 组 P-gp 的表达升高幅度更大。脑缺血前后,P-gp 抑制剂 tariquidar(TQD)对血中 FK506浓度的影响差异无统计学意义;使用 TQD 后,缺血侧大脑半球 FK506含量显著升高。单独使用 FK506时,只有较大剂量(5 mg/kg)才有抗细胞凋亡作用。单独使用 TQD 无抗细胞凋亡和减少脑梗死体积的作用,但当 TQD 与 FK506合用时,FK506较低剂量(1 mg/kg)即可发挥抗细胞凋亡作用,使脑梗死体积从(113.5±11.1)mm^3显著降低至(70.6±10.2)mm^3(P<0.01)。结论 TQD 抑制P-gp 活性,增加 FK506进入脑内的浓度,降低 FK506脑保护作用的阀值(从5 mg/kg 降低至1 mg/kg),从而加强 FK506的神经保护作用。

关键词： P糖蛋白他罗利姆脑缺血再灌注神经保护药

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大麻素抑制大鼠三叉神经节神经元ATP激活电流(英文)

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生理学报 2007年第6期59卷 745-752页

作者：申晶晶刘长金李爱胡新武陆永利陈蕾周莹刘烈炬华中科技大学同济医学院生理学教研室杜克大学医学中心麻醉学和神经生物学系

本文在培养的大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元上采用全细胞膜片钳技术,探讨大麻素对大鼠TG神经元ATP激活电流(ATP-activated currents,IATP)的影响。结果显示:(1)胞外给予ATP,大部分受检细胞(67/75,89.33%)可记录到一个... 详细信息

本文在培养的大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元上采用全细胞膜片钳技术,探讨大麻素对大鼠TG神经元ATP激活电流(ATP-activated currents,IATP)的影响。结果显示:(1)胞外给予ATP,大部分受检细胞(67/75,89.33%)可记录到一个内向电流,且具有剂量依赖性。该电流可被P2X嘌呤受体特异性拮抗剂PPADS所阻断。(2)预加WIN55212-2[大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1受体)激动剂]可对IATP产生抑制作用,此作用呈剂量依赖性,并可被CB1受体特异性拮抗剂AM281阻断。预加不同浓度的WIN55212-2(1×10-13、1×10-12、1×10-11、1×10-10、1×10-9和1×10-8mol/L)对IATP(1×10-4mol/L ATP)的抑制作用分别为(8.14±3.14)%、(20.11±2.72)%、(46.62±3.51)%、(72.16±5.64)%、(80.21±2.80)%和(80.59±3.55)%。(3)预加WIN55212-2后IATP的浓度-反应曲线明显下移:最大反应浓度时的IATP幅值减小了(58.02±4.21)%,而阈值基本不变;预加WIN55212-2前后曲线的EC50值非常接近(1.15×10-4mol/L vs 1.27×10-4mol/L)。(4)预加forskolin[腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)激动剂]或8-Br-cAMP可以逆转WIN55212-2对IATP的抑制作用。以上结果表明,大麻素可能作用于CB1受体,通过抑制AC-cAMP-PKA途径发挥对IATP的抑制作用。

关键词：人麻素受体1 WIN55212-2 P2X受体三叉神经节膜片钳技术

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螺杆菌感染与NF—κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 234-239页

作者：张丽叶嗣颖 Ulrich Bohr 陈新山田拥军张小兵华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院法医病理学系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院附属同济医院分子生物学实验中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430030 暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室广州510632 德国马格德堡大学医学院胃肠病学肝病学和传染病学系

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再... 详细信息

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌（***,Hp）的特异基因相对分子质量（Mr）26×10^3的种特异性抗原和相关功能基因（GagA，VacA）。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32．5％（13／40）的食管癌组织中发现有螺杆菌16SrRNA基因存在，正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较，食管癌组织中螺杆菌序列与***的16SrRNA序列有99％～100％同源性。阳性标本均扩增出脚特异基因M，26×10^3种特异性抗原，但仅2例扩增出G田弘基因，3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示，16SrRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100％（13／13），而16SrRNA阴性食管癌组织表达率仅占18．5％（5／27），二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为脚。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加，可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。

关键词：食管癌螺杆菌 PCR NF-κB p65蛋白免疫组化染色

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大鼠背根神经节神经元瞬时外向钾电流与非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2通道电流特性的比较

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第2期36卷 157-161页

作者：聂辉张玉芹李享元余文静罗加烈胡霞敏李之望武汉科技大学医学院生理学教研室武汉430080 华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系武汉科技大学医学院药理学教研室武汉430080

目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行... 详细信息

目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较。结果背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数最大激活电位分别为(-29.5±3.1)mV和(-3.9±1.0)mV;③半数最大失活电位分别为(-78.5±3.4)mV和(-48.5±0.6)mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8)ms和(71.4±13.2)ms。结论Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分,但不是唯一成分。

关键词：非洲爪蟾卵母细胞钾通道 Kv4.2钾通道背根神经节神经元

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人脑挫伤后神经丝蛋白NF200表达的变化

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中国法医学杂志 2007年第4期22卷 229-232,I0005页

作者：周亦武邓伟年谭亮肖爱武舒细记戴甲培徐小虎华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室湖北武汉430030 汕头大学医学院法医学教研室广东汕头515031

目的研究人脑挫伤后NF200在脑组织中神经元及轴索中表达的变化。方法88例闭合性脑挫伤标本,按损伤时间分为0.5h、1h、3h、24h、3d、7d、14d和30d共8个实验组,另以6例非脑挫伤的脑作为对照组,应用NF200免疫组织化学染色,结合图像分析技术... 详细信息

目的研究人脑挫伤后NF200在脑组织中神经元及轴索中表达的变化。方法88例闭合性脑挫伤标本,按损伤时间分为0.5h、1h、3h、24h、3d、7d、14d和30d共8个实验组,另以6例非脑挫伤的脑作为对照组,应用NF200免疫组织化学染色,结合图像分析技术,观察伤后不同时间NF200的变化。结果脑挫伤后0.5h和1h组,挫伤灶内及边缘NF200免疫组化染色几乎阴性;随时间的延长,挫伤灶内残存神经元及其周围神经元NF200染色逐渐增强,甚至发生核内转移;挫伤灶周围轴索在伤后出现波浪状扭曲、肿胀和断裂,最早在24h组出现收缩球(retractionball,RB),7d组轴索病变最明显,可见大量RB。图像分析发现伤后0.5h组和1h组,脑挫伤部位NF200阳性细胞的平均光密度(AOD)下降,其后逐渐升高,在14d组或30d组达高峰。结论脑损伤后NF200变化有一定规律性,并可用于诊断轴索损伤(AI),免疫组织化学结合结合图像分析技术在推断脑损伤时间上的有一定参考价值。

关键词：法医病理学脑挫伤神经丝200 损伤时间免疫组织化学

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骨髓基质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

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中国免疫学杂志 2007年第7期23卷 615-619,628页

作者：李呼伦孙博穆丽莉刘希君王丹丹赵凯金连弘华中科技大学同济医学院附属医院神经内科武汉430000 哈尔滨医科大学神经生物学教研室

目的:通过体内、外实验,研究骨髓基质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用及其机制。方法:建立Lewis大鼠EAE动物模型,在免疫后第6天尾静脉回输PKH26标记的BMSCs,于发病高峰期处死大鼠,组织取材。通过临床评估、荧... 详细信息

目的:通过体内、外实验,研究骨髓基质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用及其机制。方法:建立Lewis大鼠EAE动物模型,在免疫后第6天尾静脉回输PKH26标记的BMSCs,于发病高峰期处死大鼠,组织取材。通过临床评估、荧光示踪、免疫学病理学等方法检测,评估BMSCs对EAE的治疗作用及其机制。同时在体外用化学方法诱导BMSCs向少突胶质细胞分化,观察其分化的情况。结果:通过尾静脉回输,BMSCs能够聚集到病变部位,并发生分化。与对照组相比,回输组大鼠发病临床评分较低,中枢神经系统脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润减轻,CD4+和CD8+T细胞表达明显减少(P<0.05),血清及淋巴细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平显著降低(P<0.05),IL-4的分泌水平显著升高(P<0.05)。体外诱导72小时未见到BMSCs向少突胶质细胞分化;4天后45%的BMSCs发生分化。结论:在体外BMSCs通过化学诱导可以向少突胶质细胞分化;在体内BMSCs能向病变部位迁移,并部分分化成少突胶质细胞,同时BMSCs通过调节免疫系统的炎症细胞因子表达、CD4+和CD8+T细胞数和Th1和Th2细胞平衡,对EAE起治疗作用。

关键词： EAE BMSCs 分化细胞因子

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大鼠实验性脑挫伤后不同时间脑apoE的表达

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中国法医学杂志 2007年第1期22卷 11-14页

作者：何光龙孙来晶周亦武贾冬梅邓伟年戴甲培刘良徐小虎华中科技大学同济医学院法医学系公安部物证鉴定中心北京100038 汕头大学医学院法医学教研室广东汕头515031 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室汕头大学医学院法医学教研室

目的观察大鼠实验性脑挫伤后脑内apo E蛋白变化的时空性规律。方法采用自由落体撞击法致大鼠脑挫伤模型，观察伤后不同时间（0．5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d）apo E蛋白的变化，并用计算机图像分析技术作定量统计分析。结果伤后0... 详细信息

目的观察大鼠实验性脑挫伤后脑内apo E蛋白变化的时空性规律。方法采用自由落体撞击法致大鼠脑挫伤模型，观察伤后不同时间（0．5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d）apo E蛋白的变化，并用计算机图像分析技术作定量统计分析。结果伤后0．5h组脑皮质神经元apo E出现阳性表达，3d达到高峰，随后下降；伤后0．5h组在海马出现apo E强阳性反应，CA1区在伤后3d达到高峰，而CA2～CA4区在24h达到高峰，随后逐渐下降，伤后海马apo E表达以CA1区最强。结论挫伤后apo E时空性变化规律可作为脑损伤时间推断、早期诊断及生前伤和死后伤鉴别的一个新的参考指标。

关键词：法医病理学脑挫伤载脂蛋白E(apo E) 损伤时间计算机图像分析技术

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经鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠EAE的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 106-109页

作者：孙博杨硕彭海生乔慧曹京燕金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省高校重点实验室华中科技大学同济医学院附属医院神经内科湖北武汉430000

目的探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用。方法合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠... 详细信息

目的探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用。方法合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠前的11、10、9、8和7d,经鼻黏膜分别给予MBP多肽,观察其对EAE的保护作用。结果致脑炎性肽段MBP68-86和87-99都有保护作用,其中MBP68-86的保护作用更强;而MBP110-128没有保护作用。鼻黏膜给予MBP68-86+87-99的混合物,在相对低的剂量可完全阻断gp-MBP引发的EAE。淋巴细胞增殖实验和IFN-γELISPOT检测显示,与鼻黏膜给予大鼠MBP110-128组相比,鼻黏膜给予大鼠MBP68-86+87-99可降低T细胞对于MBP的反应性,淋巴结单核细胞中表达IFN-γ和TNF-αmRNA的细胞数减少,而两组表达TGF-β及IL-4mRNA的淋巴细胞数都低。结论鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受,对gp-MBP引发的EAE提供不完全的保护,MBP68-86和MBP87-99具有协同作用。鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关。

关键词：鼻黏膜耐受 MBP68-86 MBP87-99 实验性自身免疫性脑脊髓炎

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Morphological changes of cholinergic nerve fibers in the urinary bladder after establishment of artificial somatic-autonomic reflex arc in rats

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Neuroscience Bulletin 2007年第5期23卷 277-281页

作者：王晗知李淑蓉文灿肖传国苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院病理学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 成都医学院组织胚胎与神经生物学教研室四川省发育与再生重点实验室成都610081

Objective To establish an artificial somatic-autonomic reflex arc in rats and observe the following distributive changes of neural fibers in the bladder. Methods Adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups： control group, spinal cord injury （SCI） group, and reinnervation group. DiI retrograde tracing was used to verify establishment of the model and to investigate the transport function of the regenerated efferent axons in the new reflex arc. Choline acetyltransferase （CHAT） in the DiI-labeled neurons was detected by immunohistochemistry. Distribution of neural fibers in the bladder was observed by acetylcholine esterase staining. Results DR-labeled neurons distributed mainly in the left ventral horn from L3 to L5, and some of them were also CHAT-positive. The neural fibers in the bladder detrusor reduced remarkably in the SCI group compared with the control （P 〈 0.05）. After establishment of the somatic-autonomic reflex arc in the reinnervation group, the number of ipsilateral fibers in the bladder increased markedly compared with the SCI group （P 〈 0.05）, though still much less than that in the control （P 〈 0.05）. Conclusion The efferent branches of the somatic nerves may grow and replace the parasympathetic preganglionic axons through axonal regeneration. Acetylcholine is still the major neurotransmitter of the new reflex arc. The controllability of detrusor may be promoted when it is reinnervated by the pelvic ganglia efferent somatic motor fibers from the postganglionic axons.

关键词： urinary bladder acetylcholine esterase innervation

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