检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2013年第11期40卷 1107-1115页

作者：杨旺陈松杨振德肖昕廖芳华中科技大学同济医学院基础医学院病原微生物教研室武汉430030

对于包括铜绿假单胞菌在内的众多微生物而言,群体感应系统是细菌表达毒力因子的重要调节子.Las和Rhl是群体感应两个主要组成部分.Las和Rhl分别受自诱导剂N-3-氧化十二烷酰基-L-高丝氨酸内酯(3-oxo-C12-HSL)和N-丁酰-L-高丝氨酸内酯(C4-H... 详细信息

对于包括铜绿假单胞菌在内的众多微生物而言,群体感应系统是细菌表达毒力因子的重要调节子.Las和Rhl是群体感应两个主要组成部分.Las和Rhl分别受自诱导剂N-3-氧化十二烷酰基-L-高丝氨酸内酯(3-oxo-C12-HSL)和N-丁酰-L-高丝氨酸内酯(C4-HSL)的影响.最近的研究进展显示群体感应分子尤其是3-oxo-C12-HSL具有调节宿主免疫系统的能力.本实验展示了3-oxo-C12-HSL可以诱导鼠源巨噬细胞(RAW264.7)的凋亡和吞噬作用.把合成的3-oxo-C12-HSL加入RAW264.7细胞培养基中,发现细胞生活力以一种依赖于3-oxo-C12-HSL的浓度(6.25 to 100μmol/L)和培养时间(2 to 24 h)的方式逐渐丢失.同样,我们观察到3-oxo-C12-HSL的细胞毒活性,用3-oxo-C12-HSL处理的细胞出现细胞形态上的改变,这一改变表明3-oxo-C12-HSL处理的细胞加速凋亡,这一点同时也被其他多个标准(caspases3、8和9,线粒体膜电位,磷脂酰丝氨酸的表达)所证实.中性红吞饮实验证明,3-oxo-C12-HSL会显著地减小RAW264.7细胞的吞噬能力(P<0.05).同时,高浓度的3-oxo-C12-HSL会降低RAW264.7细胞对铜绿假单胞菌的吞噬作用(P<0.001).这些数据表明3-oxo-C12-HSL能特异性地促进细胞凋亡的诱导和RAW264.7细胞吞噬能力的减小.这可能和3-oxo-C12-HSL诱导的细胞毒性有关.最终我们的实验数据证明,群体感应信号分子3-oxo-C12-HSL在铜绿假单胞菌感染的致病机理中扮演着重要的角色.

关键词：铜绿假单胞菌 Las系统信号分子群体感应系统细胞凋亡吞噬作用

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TNF—α基因转染树突状细胞作为佐剂呈递肿瘤多肽诱导小鼠体内特异性抗肿瘤免疫

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Chinese Medical Journal 2002年第12期115卷 1767-1771页

作者：张卫东杨泓等华中科技大学同济医学院病原微生物教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030

目的：探讨腺病毒介导TNF-α基因转染树突状细胞（DCs）诱导抗肿瘤免疫的可能性。方法：用100MOI的AdV-TNF-αm和AdV-pLpA(无外源基因)分别感染小鼠DCs，采用RNA酶保护实验检测其细胞因子的表达，同时用混合淋巴细胞试验分析其抗原提呈... 详细信息

目的：探讨腺病毒介导TNF-α基因转染树突状细胞（DCs）诱导抗肿瘤免疫的可能性。方法：用100MOI的AdV-TNF-αm和AdV-pLpA(无外源基因)分别感染小鼠DCs，采用RNA酶保护实验检测其细胞因子的表达，同时用混合淋巴细胞试验分析其抗原提呈差异，然后将各实验组DCs分别免疫B57BL/6小鼠，10天后以不同剂量瘤细胞攻击小鼠以观察其保护效力。结果：DCTNF-α组TNF-αm、IL-12、IL-18以及GM-CSF表达量较对应组增高；体外混合淋巴细胞试验表明DCTNF-αm组抗原提呈功能增强；体外、体内特异性抗肿瘤实验均显示该型瘤苗具有良好的抗瘤作用。结论：该基因工程DCs可应用于肿瘤的免疫治疗。

关键词：树突状细胞腺病毒介导基因转移肿瘤坏死因子-α 抗肿瘤免疫肿瘤治疗基因转染

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直接免疫荧光法检测阴道毛滴虫

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第4期21卷 242-244页

作者：田永红熊承良官黄涛庞雪冰姜昌富华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院病原微生物教研室武汉430030

目的研究多克隆抗体直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)检测阴道毛滴虫的最佳反应条件及临床应用意义。方法确诊为阴道炎的患者取阴道分泌物,经培养收集虫体,稀释成悬液,制作抗原片。取阴道毛滴虫免疫山羊血清,按Ma... 详细信息

目的研究多克隆抗体直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)检测阴道毛滴虫的最佳反应条件及临床应用意义。方法确诊为阴道炎的患者取阴道分泌物,经培养收集虫体,稀释成悬液,制作抗原片。取阴道毛滴虫免疫山羊血清,按Marssall氏法用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,观察不同抗体稀释度(1:10～1:2560)、不同孵育时间(15,30,45,60,90,120 min)、不同封闭剂(1％牛血清白蛋白,10％牛血清白蛋白及10％小牛血清)对DFA检测阴道毛滴虫的影响。对102例阴道炎患者标本分别用培养法、悬滴法和DFA作临床检验。结果抗体稀释度1:160、37℃孵育45min、封闭剂1％或10％牛血清白蛋白为最佳反应条件。检测102例临床标本,3种方法均阳性的16例,均阴性的68例。有13倒悬滴法、3例DFA检测阴性,而另2法阳性。1倒悬滴法阴性,DFA阳性,培养法未能证实。以培养法为标准,DFA敏感性为87.9％,特异性为98.6％。结论 DFA可作为悬滴法的一种替代手段用于临床检验。

关键词：直接免疫荧光法检测阴道毛滴虫多克隆抗体

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基因工程肿瘤细胞融合疫苗诱导Th1应答抗肿瘤

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中华血液学杂志 2002年第2期23卷 61-64页

作者：张卫东杨泓甑宏韬陈庄华中科技大学同济医学院微生物学教研室武汉430030

目的　探讨基因工程肿瘤细胞融合疫苗的抗肿瘤作用。方法　将鼠源性IL 12 (mIL 12 )基因转染J5 5 8细胞制备工程瘤细胞 ,再与树突状细胞进行融合后免疫BALB c小鼠 ,14d后再以不同剂量的瘤细胞攻击小鼠以观察其保护效力。结果　制备的工... 详细信息

目的　探讨基因工程肿瘤细胞融合疫苗的抗肿瘤作用。方法　将鼠源性IL 12 (mIL 12 )基因转染J5 5 8细胞制备工程瘤细胞 ,再与树突状细胞进行融合后免疫BALB c小鼠 ,14d后再以不同剂量的瘤细胞攻击小鼠以观察其保护效力。结果　制备的工程瘤细胞J5 5 8经测试其培养上清中mIL 12表达量为 (870± 6 0 )pg·(10 5细胞 ) - 1 ·ml- 1 ;与树突状细胞体外融合后 ,镜下测得细胞融合率约为 30 % ;收集免疫小鼠腹股沟及月国窝淋巴结细胞与肿瘤细胞共培养 ,其上清IFN γ含量较对照组高 ;体内、外特异性抗肿瘤实验均显示该型瘤苗具有良好的抗瘤作用。结论　免疫小鼠体内诱导Th1应答。

关键词：树突状细胞肿瘤疫苗基础工程瘤细胞白细胞介素12 抗肿瘤免疫

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抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第10期25卷 917-919页

作者：刘嘉丁红晖杨燕胡斌余源黄红平陆蒙吉杨东亮华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心华中科技大学同济医学院微生物教研室湖北武汉430030

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 详细信息

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。

关键词：去唾液酸糖蛋白受体多克隆抗体剪接异构体

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汉坦病毒核酸疫苗研究进展

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中国人兽共患病杂志 2004年第10期20卷 903-905页

作者：黄汉菊吴志洪华中科技大学同济医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

汉坦病毒引起的疾病是一种人兽共患性疾病,它在世界上有着广泛的流行区域.目前发现汉坦病毒有二十余种血清/基因型,引起人类肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)主要是汉滩病毒(Hantaan Virus, HTNV)、汉城病... 详细信息

汉坦病毒引起的疾病是一种人兽共患性疾病,它在世界上有着广泛的流行区域.目前发现汉坦病毒有二十余种血清/基因型,引起人类肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)主要是汉滩病毒(Hantaan Virus, HTNV)、汉城病毒(Seoul Virus, SEOV)、普马拉病毒(Puumala Virus, PUUV)和Dobrava病毒(DOBV),疫源地在亚洲与欧洲.而引起人类汉坦病毒肺综合征(hantavirus pulmonary syndrom, HPS)除辛诺柏病毒(Sin Nombre Virus, SN)外,还发现有纽约病毒(New York Virus, NYV),长沼病毒(Bayou Virus), 黑渠港病毒(Black Creek Canal Virus, BCCV)等,主要在美洲流行.近年来随着分子生物学技术的发展及对汉坦病毒基因结构的深入研究,其流行病学和致病机制正逐步被阐明,汉坦病毒疫苗的研制也有了显著发展.其中核酸疫苗是近年来发展起来的一项新生物技术,具有广阔的应用前景,本文主要就这方面进行简要综述.

关键词：汉坦病毒核酸疫苗研究进展研制

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土拨鼠肝炎病毒和乙型肝炎病毒的核心蛋白存在共同线性B淋巴细胞表位

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中华肝脏病杂志 2007年第8期15卷 605-608页

作者：张振华王蓉田拥军李磊夏剑波龚劲松陆蒙吉龚非力杨东亮华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院微生物教研室华中科技大学同济医学院免疫学研究所

目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该... 详细信息

目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该抗体对WHcAg和HBcAg进行表位分析,并在氨基酸水平进行比对。结果经过ELISA、Western blot、免疫组织化学对比分析,制备的单克隆抗体中有2株与HBcAg和WHcAg有交叉反应,而且灵敏度和特异性相似；针对的抗原表位分别位于HBcAg和WHcAg的1～8位氨基酸和125～140位氨基酸。结论WHcAg和HBcAg存在2个共同的线性B淋巴细胞表位,分别位于1～8位和125～140位氨基酸。

关键词：肝炎核心抗原乙型肝炎病毒 B淋巴细胞表位土拨鼠

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AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用

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癌症 2006年第11期25卷 1334-1339页

作者：蔡晓坤周俊立周鹤俊张玲吴健鸿林菊生华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科肝病研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院微生物教研室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院基础部湖北武汉430030

背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichiacolipurinenucleosidephosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应。本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞。RT-PCR检测二者在细胞中的表达。台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性。结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感。在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应。HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性。结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用。

关键词： AF0.3启动子 PNP/MeP-dR自杀基因系统 AFP阳性肝肿瘤 HepG2细胞基因治疗

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汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G_2-IL-2嵌合基因的稳定表达

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第2期35卷 163-165页

作者：朱振华黄汉菊华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

目的探讨汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2-IL-2嵌合基因(IL-2-G2)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞获得稳定表达可溶性融合蛋白的可行性。方法将人源IL-2基因与汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2的cDNA分别克隆于真核表达载体pcDNA3.1-HisB,构建重组真... 详细信息

目的探讨汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2-IL-2嵌合基因(IL-2-G2)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞获得稳定表达可溶性融合蛋白的可行性。方法将人源IL-2基因与汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2的cDNA分别克隆于真核表达载体pcDNA3.1-HisB,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2,在脂质体介导下,将其导入CHO细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后用原位杂交、ELISA、SDS-PAGE电泳方法检测IL-2-G2基因在CHO细胞中的稳定表达情况。结果经原位杂交和SDS-PAGE电泳证实,转染pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2的CHO细胞内有IL-2-G2的mRNA转录,且在培养上清和CHO细胞胞质中有融合蛋白的表达,经人IL-2 ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物中所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2-G2嵌合基因能够成功导入CHO细胞并获得稳定表达。

关键词：白细胞介素2 病毒融合蛋白中国仓鼠卵巢细胞基因表达

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Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的作用

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中华胃肠外科杂志 2009年第4期12卷 399-403页

作者：蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普通外科武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MT... 详细信息

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用．利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。这种联合靶向SiRNA对Livin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为27．9％和22．3％．对Survivin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为32．2％和40．9％。与对照组相比，联合靶向siRNA可降低肿瘤细胞增殖率．增加细胞凋亡率，但其细胞生长抑制作用和促细胞凋亡作用均弱于单独干扰Livin或Survivin基因．结论Livin和Survivin基因联合靶向siRNA能降低结肠癌细胞中Livin和survivin基因的表达．抑制结肠癌细胞的增殖．并诱导结肠癌细胞的凋亡．但此协同抑制作用较单独干扰Livin或survivin基因为弱。

关键词：结肠肿瘤基因,Livin 基因,Survivin RNA干扰细胞凋亡基因治疗

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