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中华神经科杂志 2001年第4期34卷 207-209页

作者：夏若寒刘声远王建枝华中科技大学同济医学院病理生理学教研室武汉430030

目的　探讨磷酸酶活性抑制、tau蛋白异常磷酸化与神经细胞变性死亡的关系。方法　磷酸酶 (PP) 2A/PP 1抑制剂岗田酸 (okadaicacid ,OA) 10nmol/L与成神经细胞瘤细胞 (SH SY5Y)共培养 ,DNA 梯带和末端转移酶标记技术。结果　用 10nmol/... 详细信息

目的　探讨磷酸酶活性抑制、tau蛋白异常磷酸化与神经细胞变性死亡的关系。方法　磷酸酶 (PP) 2A/PP 1抑制剂岗田酸 (okadaicacid ,OA) 10nmol/L与成神经细胞瘤细胞 (SH SY5Y)共培养 ,DNA 梯带和末端转移酶标记技术。结果　用 10nmol/LOA与SY5Y细胞共培养 2 4h和 4 8h均可引起DNA 梯带出现 ,此时末端转移酶标记显示阳性细胞数由 2 16%± 0 94 %分别增多至 18 0 5 %±3 5 7% (P <0 0 1)和 2 2 5 2 %± 4 78% (P <0 0 1)。结论　由于上述检测指标均与细胞凋亡有关 ,提示抑制PP 2A和部分抑制PP 1引起tau蛋白异常磷酸化可能通过神经细胞凋亡而引起AD患者神经细胞丢失。

关键词：阿尔茨海默病 tau蛋白类磷酰化神经元脱噬作用

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ATP敏感钾通道参与大鼠前脂肪细胞增殖和分化(英文)

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生理学报 2007年第1期59卷 8-12页

作者：王曜晖郑海燕秦娜琳余上斌刘声远华中科技大学同济医学院病理生理学系河南科技大学医学院病理学与病理生理学教研室洛阳471003 华中科技大学同济医学院免疫学系

为了探讨ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖分化中作用,本实验用逆转录实时定量PCR方法检测大鼠前脂肪细胞和诱导5 d获得的脂肪细胞中该通道磺脲类受体2(sulphonylurea receptor 2,SUR2)mRNA表达,探讨该通道阻滞剂格列本脲和激动剂二氮嗪... 详细信息

为了探讨ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖分化中作用,本实验用逆转录实时定量PCR方法检测大鼠前脂肪细胞和诱导5 d获得的脂肪细胞中该通道磺脲类受体2(sulphonylurea receptor 2,SUR2)mRNA表达,探讨该通道阻滞剂格列本脲和激动剂二氮嗪对前脂肪细胞中SUR2 mRNA表达的影响;MTT检测前脂肪细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;油红O染色法检测细胞内脂质含量;Image-Pro Plus 5．0软件测量细胞直径;逆转录PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA表达。结果显示:前脂肪细胞及诱导5 d获得的脂肪细胞均有SUR2 mRNA表达,且后者明显高于前者;格列本脲抑制前脂肪细胞SUR2 mRNA表达,剂量依赖性地促进前脂肪细胞增殖,增加G2／M +S期细胞百分比,增加细胞脂质含量,使脂肪细胞直径增大,增加PPAR-γmRNA的表达;二氮嗪在这些方面的作用与格列本脲相反。以上结果提示,ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖和分化中可能起调节作用,PPAR-γ可能参与这些作用。

关键词：大鼠钾通道:磺脲类受体脂肪细胞肥胖症细胞增殖:细胞分化

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Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

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生理学报 2008年第4期60卷 485-491页

作者：王群张家玉刘世杰李宏莲华中科技大学同济医学院病理生理学教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院组织胚胎学教研室武汉430030

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

关键词：阿尔茨海默病丝裂原活化蛋白激酶 tau蛋白磷酸化糖原合酶激酶-3 蛋白激酶A

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丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶在tau蛋白异常磷酸化中的作用

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生理科学进展 2006年第2期37卷 173-174页

作者：胡志红田青王建枝河南科技大学医学院生理学教研室河南洛阳471003 华中科技大学同济医学院病理生理学系

Tau蛋白过度磷酸化在阿尔采末病(A lzheimer's d isease,AD)发病过程中发挥重要作用,抑制蛋白磷酸酯酶活性,可诱导tau的过度磷酸化和聚积。本文拟就近年来蛋白磷酸酯酶在tau蛋白异常磷酸化中的作用作一综述。

关键词：蛋白磷酸酯酶阿尔采末病 tau蛋白磷酸化

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亚急性轻度缺氧增加组胺刺激的肺动脉内皮细胞钙振荡频率(英文)

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 551-556页

作者：金肆陈建国朱莉萍刘声远王迪浔胡清华华中科技大学同济医学院病理生理学系国家卫生部呼吸系疾病重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院药理学系武汉430030

钙振荡(calcium oscillation) 能以频率解码的形式调节基因转录,钙振荡的频率可反应基因转录的水平. 为探索持续缺氧是强化还是钝化肺动脉内皮细胞对组胺的反应,研究了24 h 亚急性轻度缺氧对组胺刺激的肺动脉内皮细胞钙振荡频率的影响,... 详细信息

钙振荡(calcium oscillation) 能以频率解码的形式调节基因转录,钙振荡的频率可反应基因转录的水平. 为探索持续缺氧是强化还是钝化肺动脉内皮细胞对组胺的反应,研究了24 h 亚急性轻度缺氧对组胺刺激的肺动脉内皮细胞钙振荡频率的影响,并探索了其机制. 结果是:a. 24 h 亚急性轻度缺氧可显著增加组胺刺激的肺动脉内皮细胞钙振荡频率;b.N A D PH 氧化酶抑制剂,diphenylene iodonium chloride (D PI,10 μm ol/L) 消除了组胺刺激的常氧和缺氧后肺动脉内皮细胞钙振荡;c. 黄嘌呤氧化酶抑制剂,别嘌呤醇(oxypurinol,100 μm ol/L) 能显著降低组胺刺激的缺氧后肺动脉内皮细胞升高的钙振荡频率,但降低后的钙振荡频率仍高于常氧组,别嘌呤醇对组胺刺激的常氧组肺动脉内皮细胞钙振荡频率无显著影响. 以上结果表明,在持续缺氧相关的肺疾患中,肺动脉内皮细胞对组胺反应的敏感性增加. N A D PH 氧化酶在组胺刺激的钙振荡的发生中发挥重要作用;黄嘌呤氧化酶的激活是缺氧引起组胺刺激的钙振荡频率增加的重要原因.

关键词：钙振荡组胺缺氧肺动脉 MADPH氧化酶黄嘌呤氧化酶

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不同年龄大鼠神经系统tau蛋白的表达特性

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同济医科大学学报 2001年第3期30卷 193-196页

作者：卢峡李娜江宇张苏琳魏泽兰王建枝华中科技大学同济医学院基础医学院病理生理学教研室

通过研究不同年龄组大鼠脑组织中微管相关蛋白tau的表达特性和磷酸化位点的差异，为阿尔茨海默病（AD）脑组织中tau蛋白的研究提供资料。将大鼠分为胎鼠、新生鼠、成年鼠和老年鼠4组，取各组大鼠的脑组织制成匀浆，用免疫印迹法检测各组... 详细信息

通过研究不同年龄组大鼠脑组织中微管相关蛋白tau的表达特性和磷酸化位点的差异，为阿尔茨海默病（AD）脑组织中tau蛋白的研究提供资料。将大鼠分为胎鼠、新生鼠、成年鼠和老年鼠4组，取各组大鼠的脑组织制成匀浆，用免疫印迹法检测各组tau蛋白的分子量范围及磷酸化状态。结果发现非磷酸化依赖性抗tau抗体R134d的免疫显色结果显示：胎鼠和新生鼠主要含低分子量（14.2～28.8 ku）tau蛋白；成年鼠除在脊索中显示高分子量tau（67.5～96.6 ku）外，大脑灰质和白质中的tau蛋白主要集中在中分子量（28.8～42.7 ku）范围；老年鼠的灰质、白质和脊索中均含高分子量tau蛋白，且在灰质和白质组分中中分子量tau的含量比成年组显著增高。Tau-1的显色性质与R134 d相似。PHF-1和M4只在胎鼠和新生鼠显带。认为大鼠神经系统tau蛋白的表达性质及其磷酸化状态随年龄增长而显著不同。

关键词：阿尔茨海默病 tau蛋白磷酸化

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促红细胞生成素对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力及其超微结构的影响

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中国老年学杂志 2014年第6期35卷 1620-1623页

作者：李宜培彭蕤蕤柴高尚靳力王黎河南医学高等专科学校病理生理学教研室河南郑州451191 华中科技大学同济医学院病理生理学教研室郑州大学基础医学院病理生理学教研室

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对阿尔茨海默病(AD)样大鼠记忆能力和超微结构的影响.方法雄性Wistar大鼠应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练5d后,将达到学会标准的48只大鼠随机分为4组:正常对照组、生理盐水组、模型组、EPO治疗组,每... 详细信息

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对阿尔茨海默病(AD)样大鼠记忆能力和超微结构的影响.方法雄性Wistar大鼠应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练5d后,将达到学会标准的48只大鼠随机分为4组:正常对照组、生理盐水组、模型组、EPO治疗组,每组12只.其中生理盐水组双侧海马注射生理盐水各5μl,模型组和EPO治疗组双侧海马注射凝聚态Aβ各5μ***治疗组从造模手术当天按5 000 IU/kg腹腔注射EPO,隔天1次.术后第10天Y迷宫法检测各组大鼠空间定向学习和记忆能力,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变,使用免疫组化技术检测各组大鼠海马组织神经生长因子(NGF)蛋白的表达.结果 ①与生理盐水组相比,模型组学习记忆能力均明显下降,Y迷宫作业的错误反应次数增多,尝试次数增多,全天总反应时间显著延长(P＜0.05);与模型组相比,EPO治疗组Y迷宫作业的错误反应次数减少,尝试次数减少,全天总反应时间缩短(P＜0.05);②透射电镜结果显示:正常对照组和生理盐水组神经细胞结构完整,线粒体膜、脊完整,神经轴突和神经突触结构完整;EPO治疗组大鼠海马线粒体和神经突触基本正常;模型组大鼠海马线粒体结构破坏,线粒体肿胀,线粒体脊断裂,结构紊乱,神经突触密度降低,突触膜增厚,突触间隙不清,突触小泡数量减少.③与生理盐水组及EPO治疗组相比,模型组NGF表达降低(P＜0.05).结论 EPO注射可以减轻AD样大鼠记忆能力损伤,减轻Aβ对大鼠海马超微结构的破坏.EPO可以显著改善AD样大鼠的空间记忆能力,其机制可能与提高NGF蛋白表达有关.

关键词：促红细胞生成素 Aβ 海马线粒体神经突触神经生长因子

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慢性低氧对肺动脉内皮及平滑肌细胞急性低氧时胞浆游离钙变化的影响

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中国病理生理杂志 2002年第10期18卷 1225-1227页

作者：刘晨虹刘声远王迪浔华中科技大学同济医学院病理生理学教研室湖北武汉430030

目的和方法 :以Fura - 2 /AM荧光指示剂负载 ,检测常氧 (PO2 2 1 3kPa)及慢性低氧 [PO2 (5 3± 0 7)kPa]培养的大鼠肺内动脉平滑肌细胞及猪肺动脉内皮细胞胞浆游离钙的水平及其对急性低氧刺激反应的变化。结果 :慢性低氧条件培养... 详细信息

目的和方法 :以Fura - 2 /AM荧光指示剂负载 ,检测常氧 (PO2 2 1 3kPa)及慢性低氧 [PO2 (5 3± 0 7)kPa]培养的大鼠肺内动脉平滑肌细胞及猪肺动脉内皮细胞胞浆游离钙的水平及其对急性低氧刺激反应的变化。结果 :慢性低氧条件培养的第 6代肺内动脉平滑肌细胞在急性低氧时 [Ca2 + ]i 升高的程度明显降低 (P <0 0 5 ) ;而慢性低氧条件培养的第 5代肺动脉内皮细胞对急性低氧引起的 [Ca2 + ]i 升高程度明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :慢性低氧可以减弱肺内动脉平滑肌细胞对急性低氧所致 [Ca2 + ]i升高的反应而增强肺动脉内皮细胞低氧性 [Ca2 + ]i 升高的反应。这可能在慢性低氧时肺血管对低氧的反应性降低中起重要作用。

关键词：低氧钙平滑肌内皮细胞肺动脉

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急性缺氧对肺动脉内皮细胞血栓素合酶基因表达及PGI_2、TXA_2代谢产物的影响

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同济医科大学学报 2001年第4期30卷 295-297页

作者：孔炜方华丰王迪浔孙秉庸华中科技大学同济医学院基础医学院病理生理学教研室武汉430030

为进一步研究 PGI2 和 TXA2 在慢性缺氧性肺动脉高压和机体对慢性缺氧习服过程中的作用 ,动态观察了慢性缺氧进程中肺动脉内皮细胞 (PAEC)血栓素合酶 (TXS)基因表达及 PGI2 、TXA2 代谢产物的变化。结果显示 :常氧培养的 PAEC,急性缺氧... 详细信息

为进一步研究 PGI2 和 TXA2 在慢性缺氧性肺动脉高压和机体对慢性缺氧习服过程中的作用 ,动态观察了慢性缺氧进程中肺动脉内皮细胞 (PAEC)血栓素合酶 (TXS)基因表达及 PGI2 、TXA2 代谢产物的变化。结果显示 :常氧培养的 PAEC,急性缺氧后 TXS、 6 -酮 - PGF1α、TXB2 均增加 ,以 6 -酮 - PGF1α增加更明显 ,TXA2 / PGI2 比值降低 ;慢性缺氧 [PO2 (5 .3± 0 .7) k Pa]培养的 PAEC TXS、 6 -酮 - PGF1α、TXB2 均高于同代常氧组 ,复氧再急性缺氧 ,6 -酮 - PGF1α在第 2、 4代减少 ,第 6代不变 ,TXS、TXB2 在第 4代增加 ,第 6代减少 ;TXA2 / PGI2 在第 2、 4代增加 ,第 6代减少。提示在慢性缺氧的不同阶段 ,由急性缺氧所致 TXS、 6 -酮 - PGF1α、 TXB2 及 TXA2 / PGI2

关键词：缺氧性肺动脉高压内皮细胞血栓素合酶基因表达 PGI2 TXA2 前列环素血栓素A2

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人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定

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解剖学报 2005年第1期36卷 52-56页

作者：鄢文海刘计荣王建枝曹孟德许燕韩雪飞邢莹华中科技大学同济医学院病理生理学教研室郑州大学医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学医学院病理生理学教研室郑州大学医学院干细胞研究中心

目的　探讨人脐血单个核细胞 (MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。　方法　密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞 ,部分接种于培养瓶内 ,部分细胞接种在 6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT PCR方法检测M... 详细信息

目的　探讨人脐血单个核细胞 (MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。　方法　密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞 ,部分接种于培养瓶内 ,部分细胞接种在 6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF M及MAP2mRNA的表达 ,培养 14d后行免疫细胞化学鉴定。　结果　培养前脐血MNCs胞体小呈圆形 ,神经干前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF M阳性细胞散在分布 ,阳性率分别为 1 5 %、3 4 %和 2 5 %。培养 14d后 ,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群 ,相邻细胞突起连成网状 ;免疫细胞化学检测MAP2、NF M染色阳性细胞成片状分布 ,阳性率分别为 2 7 6 %和 2 1 7%。RT PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF M及MAP2基因表达呈阳性 ,培养 14d后上述基因表达上调。　结论　脐血细胞中可能沉寂有神经 (干 )前体细胞 ,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞。

关键词：脐血细胞神经干细胞神经细胞细胞分化

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