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Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

生理学报 2008年第4期60卷 485-491页

作者：王群张家玉刘世杰李宏莲华中科技大学同济医学院病理生理学教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院组织胚胎学教研室武汉430030

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

关键词：阿尔茨海默病丝裂原活化蛋白激酶 tau蛋白磷酸化糖原合酶激酶-3 蛋白激酶A

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慢性复合应激增强大鼠空间学习和记忆能力

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生理学报 2004年第5期56卷 615-619页

作者：刘能保李辉刘向前孙臣友陈少容张敏海刘少纯汪薇曦华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模... 详细信息

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模型。采用 Morris 水迷宫和 Y- 迷宫测试大鼠学习与记忆成绩,并用 Cresyl violet 染色法对大鼠海马结构进行神经细胞计数。结果显示,应激组动物慢性复合应激后, 在 Morris 水迷宫内寻找隐蔽平台所需的时间(潜伏期)比对照组的明显地短(P<0.05), 表明应激鼠的空间记忆能力明显强于对照鼠;在 Y- 迷宫内寻找安全区的正确率比对照组的明显地高(P<0.05), 表明应激鼠的明暗分辨学习能力明显强于对照鼠; 应激鼠慢性复合应激后, 其海马结构齿状回、CA3 和CA1 区神经细胞密度极明显地高于对照鼠(P<0.001)。这些结果提示, 慢性复合应激可增强大鼠空间记忆能力和明暗分辨学习能力。本文并对慢性复合应激模式增强大鼠学习和记忆能力的可能原因进行了讨论。

关键词：慢性复合应激学习与记忆 Morris水迷宫 Y-迷宫海马

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一种应用振荡切片显示神经元的Cox染色法

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解剖学报 2008年第5期39卷 779-781页

作者：汪薇曦杨世明叶翠芳李宏莲李和华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

目的探索一种快捷、简便的大脑锥体细胞和小脑普肯耶细胞的染色方法。方法取猫、家兔、大鼠和豚鼠的大脑和小脑组织,升汞-重铬酸钾-铬酸钾固定液固定、浸染后,部分组织按传统的Cox法制片,即固定后进行火棉胶包埋、滑式切片机切片;部分... 详细信息

目的探索一种快捷、简便的大脑锥体细胞和小脑普肯耶细胞的染色方法。方法取猫、家兔、大鼠和豚鼠的大脑和小脑组织,升汞-重铬酸钾-铬酸钾固定液固定、浸染后,部分组织按传统的Cox法制片,即固定后进行火棉胶包埋、滑式切片机切片;部分组织用改良法制片,即组织不经包埋而直接进行振荡切片。结果与传统Cox法相比,应用振荡切片的Cox法减少了操作程序,大大缩短了制片时间,神经元染色均匀,神经元突起更为完整,小突起细节显示更为满意,且背景浅淡,非特异性沉淀颗粒极少。结论应用振荡切片的Cox改良法快捷、简便,神经元染色效果明显优于传统Cox法。

关键词：神经元改良振荡切片 Cox染色法猫兔大鼠豚鼠

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正丁醇替代无水乙醇和二甲苯在制作大鼠全胚切片中的应用

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解剖学报 2012年第6期43卷 864-867页

作者：杨世明李和华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

目的探索一种以正丁醇替代无水乙醇和二甲苯制作不同胎龄大鼠全胚切片的简便方法。方法收集胚龄14d(E14)、E16、E18、E20大鼠胚胎,固定及低浓度乙醇脱水后,部分标本按传统方法用无水乙醇脱水和二甲苯透明(无水乙醇-二甲苯法),另一部分... 详细信息

目的探索一种以正丁醇替代无水乙醇和二甲苯制作不同胎龄大鼠全胚切片的简便方法。方法收集胚龄14d(E14)、E16、E18、E20大鼠胚胎,固定及低浓度乙醇脱水后,部分标本按传统方法用无水乙醇脱水和二甲苯透明(无水乙醇-二甲苯法),另一部分标本用正丁醇脱水、透明(正丁醇法)。所有标本进行石蜡包埋、切片、HE染色。对两种方法从蜡块质量和切片质量等方面进行比较和评价。结果正丁醇法大大简化了操作步骤,标本处理时间容易控制,包埋块的切割性能及对肝脏组织的保存优于无水乙醇-二甲苯制片法。结论正丁醇法步骤简单且制片安全可靠,可替代无水乙醇-二甲苯法制作大鼠全胚切片。

关键词：全胚切片正丁醇无水乙醇二甲苯苏木素-伊红染色大鼠

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乙二胺四乙酸联合正丁醇在大鼠胫骨癌痛标本石蜡切片制作中的应用

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解剖学报 2012年第3期43卷 430-432页

作者：杨世明刘希江曹菲刘向前华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室武汉430030

目的探索一种简便有效的制作大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片的方法。方法取大鼠胫骨癌痛模型组和正常组胫骨标本,使用乙二胺四乙酸(EDTA)加温脱钙联合正丁醇取代传统强酸脱钙、纯酒精脱水和二甲苯透明,制作石蜡切片后HE染色观察。结果两... 详细信息

目的探索一种简便有效的制作大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片的方法。方法取大鼠胫骨癌痛模型组和正常组胫骨标本,使用乙二胺四乙酸(EDTA)加温脱钙联合正丁醇取代传统强酸脱钙、纯酒精脱水和二甲苯透明,制作石蜡切片后HE染色观察。结果两组大鼠胫骨癌痛标本形态结构均保存完整。与传统方法相比,制片步骤简单,脱水和透明时间较为灵活,蜡块切割性能较好。结论 EDTA与正丁醇的联合应用,是大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片制作适宜和可靠的方法。

关键词：胫骨癌痛乙二胺四乙酸正丁醇石蜡切片 HE染色大鼠

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δ-连环素在雌激素替代治疗大鼠小脑中的表达

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解剖学报 2007年第5期38卷 511-514页

作者：魏建峰刘冠兰王芳刘汉武王小丽袁琳娜宋国颖刘胜洪华中科技大学同济医学院组织学胚胎学教研室武汉430030

目的探讨卵巢切除大鼠小脑中δ-连环素(δ-catenin)的表达特征及雌激素对其表达的影响。方法将大鼠分为正常组、假手术组、雌激素替代组和安慰剂组。卵巢切除后人工注射雌二醇或安慰剂,应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在小脑的定位表... 详细信息

目的探讨卵巢切除大鼠小脑中δ-连环素(δ-catenin)的表达特征及雌激素对其表达的影响。方法将大鼠分为正常组、假手术组、雌激素替代组和安慰剂组。卵巢切除后人工注射雌二醇或安慰剂,应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在小脑的定位表达;用免疫印迹法做定量分析。结果与假手术组和雌激素替代组相比,免疫组织化学和免疫印迹法均显示安慰剂组大鼠小脑中δ-连环素表达最低,假手术组和雌激素替代组δ-连环素表达明显高于安慰剂组。结论雌激素可上调卵巢切除大鼠小脑δ-连环素的表达。

关键词： δ-连环素小脑卵巢切除雌激素免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达

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解剖学报 2007年第1期38卷 18-22页

作者：周艳玲刘能保张敏海李晓恒陈鸿伟洪小平孙臣友华中科技大学同济医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周... 详细信息

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩。运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Westernblotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化。结果与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P<0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P<0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P<0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P<0.05)。结论慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一。

关键词：慢性复合应激学习与记忆海马 Doublecortin 免疫细胞化学免疫印迹 RT-PCR 大鼠

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慢性复合应激对学习记忆的影响及cAMP/PKA-CREB信号通路的作用

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解剖学报 2006年第6期37卷 611-616页

作者：刘能保洪小平李晓恒张敏海孙臣友华中科技大学同济医学院解剖学系组织学胚胎学教研室武汉430030

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。... 详细信息

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫(MWM)测试大鼠空间学习与记忆成绩;免疫组织化学方法观察大鼠海马PKA-Cβ和磷酸化的CREB的表达水平;应用RT-PCR法半定量检测海马组织内BDNF和Bcl-2的mRNAs水平。结果应激后在MWM寻找平台潜伏期,与对照组(18.9±13.0)s相比,慢性复合应激组(14.2±5.8)s明显缩短(P<0.05),显示其空间记忆明显增强,而慢性单一应激组(20.4±12.8)s无明显差异(P>0.05);慢性复合应激组大鼠海马CA1和CA3区PKA-Cβ的表达以及CA1区和齿状回pCREB的表达明显上调(P<0.05);而慢性单一应激组海马各亚区PKA-Cβ和pCREB的表达无显著性改变(P>0.05)。BDNF和Bcl-2mRNAs的表达水平3组间差别无显著性(P>0.05)。结论慢性复合应激可增强海马依赖的学习与记忆功能,多元的环境刺激可能是其增强的主要原因。PKA-CREB信号通路在其影响机制中发挥了一定的作用。

关键词：慢性复合应激学习与记忆蛋白激酶A-Cβ亚基 cAMP反应元件结合蛋白海马免疫组织化学 RT-PCR 大鼠

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慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体NR1亚基表达的影响

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解剖学杂志 2004年第6期27卷 616-619页

作者：程少容刘能保张敏海刘少纯孙臣友李辉刘向前汪薇曦华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室

目的 :观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR1表达的变化。方法 :成年雄性Wistar大鼠实验组每天交替暴露于复合应激原环境中达 6w ,然后作Morris水迷宫和Y迷宫作业测试 ,再采用免疫组织化学和图像处理方法分... 详细信息

目的 :观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR1表达的变化。方法 :成年雄性Wistar大鼠实验组每天交替暴露于复合应激原环境中达 6w ,然后作Morris水迷宫和Y迷宫作业测试 ,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马CA1、CA3和齿状回区内NR1的表达变化。结果 :慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短 ,学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多 ;海马内NMDA受体亚基NR1的表达水平较对照组明显上调。结论 :慢性复合应激可增强学习与记忆能力。

关键词：慢性 NMDA受体海马 NR1 学习与记忆表达大鼠亚基应激体表

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慢性复合性应激大鼠学习和记忆与海马突触后致密物质CaMKII的表达变化

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解剖学报 2005年第1期36卷 19-23页

作者：孙臣友刘能保张敏海刘少纯程少荣李辉刘向前汪薇曦华中科技大学同济医学院组织学胚胎学教研室

目的　探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。　方法　采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6... 详细信息

目的　探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。　方法　采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6周的慢性复合性应激试验。实验后 ,动物进行 3d的Morris水迷宫和Y迷宫测试 ,记录其学习和记忆成绩 ,同时观察CaMKII在海马CA1和CA3区的分布和表达。　结果　应激组动物的学习与记忆成绩均超过或优于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;与对照组比较 ,CaMKII在应激组海马CA3区辐射层灰度明显降低(P <0 0 1) ,而始层灰度无明显变化 (P >0 0 5 ) ,在应激组CA1区海马辐射层和始层的灰度均较对照组降低 (P <0 0 5 ) ;大鼠的学习记忆成绩与CaMKII的表达呈正相关。　结论　慢性复合性应激致大鼠的学习与记忆能力加强 ,CaMKII在海马CA1区和CA3区的表达增加 ,说明CaMKII参与了慢性复合性应激对学习记忆的影响。

关键词：慢性复合性应激学习和记忆海马突触后致密物质 Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 迷宫免疫组织化学大鼠

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