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白血病状态下正常造血干/祖细胞的生物学行为及其调控机制:国家自然科学基金重大项目结题综述

中国科学基金 2015年第4期29卷 245-249页

作者：孙瑞娟江虎军程涛诸江王健民周剑锋董尔丹国家自然科学基金委员会医学科学部北京100085 中国医学科学院血液病医院(血液学研究所) 天津300020 上海交通大学医学院瑞金医院上海血液学研究所上海200025 第二军医大学附属长海医院血液科上海200433 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科武汉430030

国家自然科学基金"十二五"重大项目"白血病状态下正常造血干/祖细胞的生物学行为及其调控机制"集中围绕正常造血干/祖细胞在白血病状态下的受抑规律及其内外调控机制这一热点科学问题进行了多团队联合攻关。经过201... 详细信息

国家自然科学基金"十二五"重大项目"白血病状态下正常造血干/祖细胞的生物学行为及其调控机制"集中围绕正常造血干/祖细胞在白血病状态下的受抑规律及其内外调控机制这一热点科学问题进行了多团队联合攻关。经过2011—2014年的4年研究,从分子、细胞、整体和临床等多个层面系统阐释了白血病状态下白血病细胞和正常造血干/祖细胞竞争的规律,揭示了白血病恶性克隆生长和正常造血干/祖细胞受抑的分子机制,提出了抑制白血病细胞特别是白血病干细胞生长及促进正常造血干/祖细胞扩增的治疗新策略,取得了一系列突破性和原创性的研究成果,为进一步提高白血病临床治疗效果奠定了重要基础。

关键词：重大项目白血病造血干细胞白血病干细胞造血微环境

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转换国际标准化的BCR-ABL（P210）转录本水平的转换系数多中心再确认研究

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中华血液学杂志 2015年第10期36卷 814-817页

作者：秦亚溱马道新王云贵王丽丽王玥刘生伟陆小军李小青岑建农肖敏林振兴耿素霞梁超程辉韩聪韩薇黄晓军北京大学人民医院、北京大学血液病研究所 100044 山东大学齐鲁医院浙江大学附属第一医院解放军总医院中国医科大学附属第一医院哈尔滨血液病肿瘤研究所四川大学华西医院武汉康圣达医学检验所/武汉协和医院干细胞中心苏州大学附属第一医院华中科技大学同济医学院附属同济医院福建医科大学附属协和医院广东省人民医院北京海思特医学检验所第二军医大学附属长海医院中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院吉林大学第一医院

目的：再确认已获得的用于转换慢性髓性白血病国际标准化的BCR-ABL（P210）转录本水平（BCR-ABLIS）的转换系数（CF）的有效性。方法北京大学人民医院（简称PKUPH）统一制备用于再确认15家单位9或18个月之前已获得的CF的比对样品，即用B... 详细信息

目的：再确认已获得的用于转换慢性髓性白血病国际标准化的BCR-ABL（P210）转录本水平（BCR-ABLIS）的转换系数（CF）的有效性。方法北京大学人民医院（简称PKUPH）统一制备用于再确认15家单位9或18个月之前已获得的CF的比对样品，即用BCR-ABL阴性患者骨髓或外周血有核细胞稀释BCR-ABL（P210）阳性细胞制备出相同16套、每套24种不同BCR-ABL水平的样本，加入TRIzol中。15家单位分别检测1套，采用GraphPad Prism 5.0软件对其与PKUPH的BCR-ABLIS检测值分别进行Bland-Altman一致性分析。对于未达到再确认标准的单位，去除结果明显偏离的样本直至其检测值与PKUPH的BCR-ABLIS之间的回归方程相关系数＞0.98，来计算新的CF。结果10家单位达到标准（偏倚介于±1.4倍，且95%可信区间介于±6.0倍），说明原有的CF依然准确，可以继续有效转换BCR-ABLIS。5家未达到标准的单位通过重新计算得出新的CF，分别是原有CF的1.8～6.3倍。结论通过室间样本比对的CF再确认过程既检验了原有CF是否依然有效，又使CF不再有效的单位获得新的适用于当前的CF，保持了BCR-ABLIS应用的准确性和连续性。

关键词：融合蛋白质类, bcr-abl 实时聚合酶链反应转换系数再确认

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全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞的改良研究

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中国实验血液学杂志 2014年第2期22卷 496-502页

作者：王晓庆仲照东陈智超邹萍华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所湖北武汉430022

本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理,以传统的全骨髓贴壁法为基础,探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法。采用6孔板培养细胞,将骨髓标本用MSC完全培养液培养48 h,吸取上层无红细胞的上清层,置于新的培养孔以分离获取... 详细信息

本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理,以传统的全骨髓贴壁法为基础,探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法。采用6孔板培养细胞,将骨髓标本用MSC完全培养液培养48 h,吸取上层无红细胞的上清层,置于新的培养孔以分离获取MSC。用倒置显微镜观察细胞形态及贴壁情况,记录细胞首次贴壁时间、首次传代时间,并以传统全骨髓贴壁法为对照;应用流式细胞术检测细胞周期、细胞表面标记;用油红O及碱性磷酸酶试剂盒分别对MSC成脂、成骨能力进行鉴定;应用计数板计数法描绘第1代,第3代,第5代MSC增殖曲线。结果表明,用改良法培养的MSC高表达CD90、CD105、CD13、CD44,低表达CD14、CD45、CD34;细胞周期中G0/G1期88.76%,G2/M期3.04%,S期8.2%,符合干细胞周期特征;增殖曲线呈典型"S"型;油红O与碱性磷酸酶染色均为阳性。同时与传统方法相比,改良方法的细胞贴壁率显著高于传统方法(P=0.0004),首次贴壁时间短(P<0.0001)、首次传代时间短(P=0.001)。结论:骨髓标本培养48 h后的上清层中含大量贴壁活性的悬浮MSC,改良方法是一种比传统贴壁法更具有便捷、高效等优点的培养方法。

关键词：骨髓间充质干细胞全骨髓贴壁法改良培养方法

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外源性VEGF促小鼠造血干细胞动员

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中国实验血液学杂志 2014年第1期22卷 154-159页

作者：朱晓健李翊游泳李青曾辰仲照东邹萍华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所湖北武汉430022

本研究旨在探讨外源性注射血管内皮生长因子(VEGF)对正常小鼠造血干细胞的动员作用及其对免疫功能的影响。将正常C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、VEGF短期组(5 d)和VEGF长期组(27 d);实验组腹腔注射VEGF 100 ng/d,正常对照组腹腔注射P... 详细信息

本研究旨在探讨外源性注射血管内皮生长因子(VEGF)对正常小鼠造血干细胞的动员作用及其对免疫功能的影响。将正常C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、VEGF短期组(5 d)和VEGF长期组(27 d);实验组腹腔注射VEGF 100 ng/d,正常对照组腹腔注射PBS;应用全自动血细胞分析仪检测不同时间小鼠外周血白细胞数量和淋巴细胞的比例,流式细胞术检测各组外周血和脾脏的造血干细胞、淋巴细胞亚群、调节T细胞(Treg)和髓源抑制性细胞(MDSC)的数量,显微镜观察对照组和长期组脾脏形态学改变,测定脾指数。结果表明:注射VEGF后,小鼠外周血WBC数明显升高,第3天达峰值;短期组外周血和脾脏中干细胞比例显著高于正常对照组(P<0.05);长期组脾脏增大,脾指数升高(P<0.05),可见明显髓外造血;给药后,小鼠外周血淋巴细胞总数没有明显改变,但长期组CD3+细胞比例和CD3+/B220+细胞比值下降;实验组外周血和脾脏CD4+CD25+Treg和Gr-1+CD11b+MDSC水平均增高(P<0.05),在长期组升高更明显(P<0.05)。结论:外源性VEGF可提高造血干细胞的动员,同时上调多种抑制性免疫细胞,导致机体免疫功能发生改变。

关键词：血管内皮生长因子造血干细胞动员免疫调节髓源抑制性细胞

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白血病细胞来源微粒BCR-ABLmRNA检测在监测慢性髓性白血病治疗反应中的意义

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中华血液学杂志 2014年第2期35卷 138-141页

作者：朱晓健李青曾辰仲照东游泳邹萍武汉华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所 430022

目的探讨通过检测白血病细胞来源微粒（Me）BCR-ABL融合基因水平对达完全分子学反应（cMR）后慢性髓性白血病（CML）患者进行分层的可能。方法收集29例不同疾病状态的CML患者，采用实时定量PCR方法分别检测患者外周血细胞与MP中的BCR-AB... 详细信息

目的探讨通过检测白血病细胞来源微粒（Me）BCR-ABL融合基因水平对达完全分子学反应（cMR）后慢性髓性白血病（CML）患者进行分层的可能。方法收集29例不同疾病状态的CML患者，采用实时定量PCR方法分别检测患者外周血细胞与MP中的BCR-ABLmRNA水平。结果患者外周血MP和细胞中均能稳定检测出BCR-ABLmRNA；CMR、主要分子学反应（MMR）、完全细胞遗传学反应（CCyR）三种疾病状态下患者MP中的BCR-ABLmRNA水平分别为9．1±2．8、25．2±4-6．9和62．8±6-3，差异具有统计学意义（P〈0．05）；细胞内BCR-ABL转录本为阴性时，来源于同一份样本的MP仍可检测到***[中位水平6．5（3．7～15．3）]；CMR患者MP中BCR—ABL融合基因水平与服药时间呈负相关（t=0．656，P〈0．05）；在同样达到CMR的前提下，造血干细胞移植组患者和酪氨酸激酶抑制剂治疗组患者相比，MP中***水平更低（分别为3．3±2．1和9．14±2．8，P〈0．05）。结论CML患者外周血细胞来源MP中可以稳定检出BCR-ABLmRNA，并有望成为患者达CMR后继续监测的重要指标。

关键词：融合蛋白类 BCR-ABL 细胞源性微粒白血病髓系慢性 BCR-ABL阳性实时聚合酶链反应

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人β-珠蛋白小分子RNAs调控γ-珠蛋白基因表达及开关机制研究

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新乡医学院学报 2015年第1期32卷 19-23页

作者：汪靖熊蓓宜昌市第二人民医院儿科湖北宜昌443000 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所湖北武汉430022

目的从RNA角度研究珠蛋白基因表达调控,探讨人γ-珠蛋白向β-珠蛋白转换的分子机制,为β-珠蛋白生成障碍性贫血的分子治疗提供新靶位,并为诱导肿瘤细胞分化治疗肿瘤提供依据。方法通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较白血病和非白血病... 详细信息

目的从RNA角度研究珠蛋白基因表达调控,探讨人γ-珠蛋白向β-珠蛋白转换的分子机制,为β-珠蛋白生成障碍性贫血的分子治疗提供新靶位,并为诱导肿瘤细胞分化治疗肿瘤提供依据。方法通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较白血病和非白血病患者外周血白细胞血红蛋白基因分子水平的差异,将β-珠蛋白基因转染K562细胞,运用噻唑蓝比色法、细胞流式分选等技术检测β-珠蛋白基因对K562细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,通过Western blot及RT-PCR分别从蛋白质水平和mRNA水平分析其调控γ-珠蛋白基因表达的作用,同时运用生物信息学预测人β-珠蛋白基因可以产生具有基因表达调控作用的小分子RNAs。结果白血病患者血红蛋白A1、血红蛋白B、血红蛋白E1、细胞珠蛋白、脑红蛋白的mRNA表达均显著低于非白血病患者(P<0.05)。β-珠蛋白基因能以时间依赖的方式诱导K562细胞增殖受抑,并在第7天达到最佳时间效应。用RT-PCR检测转染后K562细胞α、β、γ-珠蛋白等mRNA的表达,发现β-mRNA上升导致转染后的K562细胞γ-珠蛋白表达下调,同时α-珠蛋白表达上调;β-珠蛋白基因可能产生作用于γ-珠蛋白的小分子RNA,符合条件的二级结构在热力学上稳定,空间位阻也在一定范围内。结论白血病患者外周血白细胞珠蛋白基因低表达,β-珠蛋白基因能以时间依赖的方式诱导K562细胞增殖受抑,其高表达可诱导K562细胞增殖受抑和凋亡,并抑制K562细胞γ基因表达,通过小分子RNAs调控γ-珠蛋白基因表达沉默,有助于揭示人γ-珠蛋白向β-珠蛋白转换的基因表达调控及开关机制。

关键词：珠蛋白基因表达开关机制小分子RNAs

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阵发性睡眠性血红蛋白尿患者并发大脑上矢状窦血栓形成1例并文献复习

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临床血液学杂志 2014年第3期27卷 412-413,417页

作者：胡彬岳青芳陈烨卜凡丹刘新月华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所武汉430022

目的:提高对阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)并发血栓形成的认识。方法:报告1例以癫痫发作为首发表现的并发大脑上矢状窦血栓形成的PNH患者。结果:该患者诊断PNH后长期口服糖皮质激素治疗,在甲泼尼龙冲击治疗期间出现癫痫;通过磁共振大脑... 详细信息

目的:提高对阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)并发血栓形成的认识。方法:报告1例以癫痫发作为首发表现的并发大脑上矢状窦血栓形成的PNH患者。结果:该患者诊断PNH后长期口服糖皮质激素治疗,在甲泼尼龙冲击治疗期间出现癫痫;通过磁共振大脑静脉造影确定该患者为大脑上矢状窦静脉血栓形成。结论:PNH是一种高凝状态性疾病,静脉血栓形成是其主要并发症和首要致死原因。PNH患者并发血栓形成的概率与患者的PNH克隆负荷密切相关。在PNH的诊治过程中应密切监测患者的凝血功能,避免血栓事件的发生。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿血栓形成

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下一代测序技术在淋巴瘤中的应用

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临床血液学杂志 2014年第6期27卷 931-935页

作者：崔国惠吴要功华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所武汉430022

淋巴瘤是发生于淋巴结和（或）结外淋巴组织的恶性肿瘤,是具有相当异质性的一大类肿瘤,随着分子生物学的不断发展,人们对淋巴瘤的发病机制、分类和预后等方面的认识也在不断的深入。同其他恶性增殖性疾病类似,淋巴瘤存在基因不稳定性,... 详细信息

淋巴瘤是发生于淋巴结和（或）结外淋巴组织的恶性肿瘤,是具有相当异质性的一大类肿瘤,随着分子生物学的不断发展,人们对淋巴瘤的发病机制、分类和预后等方面的认识也在不断的深入。同其他恶性增殖性疾病类似,淋巴瘤存在基因不稳定性,染色体异常是淋巴瘤发生发展的直接原因之一。

关键词：下一代测序技术淋巴瘤

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SUMO化修饰在恶性血液病中的意义

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临床血液学杂志 2014年第5期27卷 745-749页

作者：胡静宇陈燕华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所武汉430022

1 SUMO修饰简述1.1 SUMO分子组成小泛素相关修饰蛋白（small-ubiquitin related modifier,SUMO）是一种广泛存在于真核生物体内且在生物进化过程中高度保守的一类类泛素蛋白,由大约98个氨基酸残基组成。在脊椎动物中,细胞主要表达3种SUM... 详细信息

1 SUMO修饰简述 1.1 SUMO分子组成小泛素相关修饰蛋白（small-ubiquitin related modifier,SUMO）是一种广泛存在于真核生物体内且在生物进化过程中高度保守的一类类泛素蛋白,由大约98个氨基酸残基组成。在脊椎动物中,细胞主要表达3种SUMO分子：SUMO-1,SUMO-2和SUMO-3。

关键词：小泛素相关修饰物 SUMO化修饰恶性血液病

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新药在慢性淋巴细胞白血病中的研究进展

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临床血液学杂志 2014年第5期27卷 741-744页

作者：刘芳张君丽华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所武汉430022

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征。CLL是西方国家最常见的成人白血病，大约占所有白血病的30％，氟达拉滨（Flu）的问... 详细信息

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征。CLL是西方国家最常见的成人白血病，大约占所有白血病的30％，氟达拉滨（Flu）的问世结束了CLL的治疗长期依赖于苯丁酸氮芥（clb）的局面，利妥昔单抗（RTX）的出现更是显著提高了患者的完全缓解率。目前临床上以Flu、环磷酰胺和RTX联合治疗（FCR）为标准一线治疗方案。

关键词：白血病淋巴细胞慢性新药

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