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CFTR基因第8内含子5T多态与中国汉族男性先天性双侧输精管缺如的相关性研究

中华医学遗传学杂志 2013年第6期30卷 729-732页

作者：刘丽君李红钢辜秀丽朱继望赵凯唐艳平熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉同济生殖医学专科医院武汉430030 基础医学院医学遗传学系

目的研究囊性纤维化转运调节因子（cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator，CFTR）基因第8内含子中的5T等位基因多态性与中国汉族男性先天性输精管缺如（congenitalbilateralabsenceofvasdeferens，CBAVD）的相关性。方法选择33例CBAVD患者和99例不存在CBAVD的无精症患者，提取其基因组DNA，用聚合酶链反应扩增CFTR基因的第8内含子，对产物进行TA克隆后测序。结果33例CBAVD男性患者中有17例存在5T多态，异常比例为51．5％，其中有3例患者在2个等位基因上同时为5T多态，占5T多态的17．6％，占总体异常比例的9．1％。99例男性无精症患者对照中有9例存在5T多态，异常比例为9．1％，未发现2个等位基因同时为5T多态者。结论中国汉族男性CBAVD的发生和CFTR基因5T突变有明显的相关性，5T突变阴性的CBAVD患者不排除存在CFTR基因其他突变的可能性。

关键词：囊性纤维化囊性纤维化转运调节因子先天性双侧输精管缺如无精症

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无精子症患者精液Y染色体微缺失检测与分析

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中华医学杂志 2008年第24期88卷 1662-1665页

作者：李红钢丁晓芳王成赵江霞左明达熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心武汉市第七医院病理科

目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，... 详细信息

目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，用4组多重PCR检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区共15个序列标签位点（STS）的缺失。PCR产物测序证实无精子症患者精液为模板扩增的准确性，琼脂糖凝胶电泳观察精液标本和相应血液标本PCR产物的一致性。结果所有多重PCR反应均成功进行，产物测序证实为目的片段。正常精液未检测到Y染色体微缺失，而无精子症患者共检测到26例（10．8％）Y染色体微缺失，均有欧洲男科学会（EAA）和欧洲分子遗传学质量控制体系（EMQN）推荐STS位点的缺失：AZFa区、AZFb区各2例（各占7．7％），3例（11．5％）位于AZFb＋AZFc区，19例（73．1％）位于AZFc区。血液标本检测结果与精液标本检测结果完全一致。结论用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查是可行、可靠的。初步表明EAA／EMQN推荐STS位点适合我国无精子症患者Y染色体微缺失检查。

关键词：无精子症精液聚合酶链反应 Y染色体微缺失

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诱导多潜能干细胞在精子发生过程中的研究进展

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中华男科学杂志 2015年第10期21卷 925-930页

作者：方芳倪柯熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 华中科技大学附属同济医院外科学系湖北武汉430030

精子发生是一个复杂的过程,目前关于人类精子发生的认知主要来源于动物模型,而对于人类精子发生的早期阶段,仍不是非常了解。体外精子发生模型的建立不仅能促进深入了解精子发生过程及不育症发病机制,而且有助于男性不育症的临床治疗。... 详细信息

精子发生是一个复杂的过程,目前关于人类精子发生的认知主要来源于动物模型,而对于人类精子发生的早期阶段,仍不是非常了解。体外精子发生模型的建立不仅能促进深入了解精子发生过程及不育症发病机制,而且有助于男性不育症的临床治疗。本文将对多潜能干细胞(i PSCs)在诱导精子发生过程中的相关研究进行综述,并探讨诱导i PSCs应用于男性不育症临床治疗所面临的问题以及发展前景。

关键词：精子发生无精子症原始生殖细胞胚胎干细胞诱导多潜能干细胞

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男性不育患者精液细菌学分析

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生殖与避孕 2010年第1期30卷 55-58页

作者：周慧刘燕婕杜庆玲王勇段卓廖爱华熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430022

目的:探讨病原体感染男性生殖道后对精液质量的影响及其与男性不育的关系。方法:对2298例不育男性患者的精液进行细菌培养,采用法国梅里埃公司的微量生化反应系统进行细菌鉴定,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,采用MAR法检测抗精子抗体... 详细信息

目的:探讨病原体感染男性生殖道后对精液质量的影响及其与男性不育的关系。方法:对2298例不育男性患者的精液进行细菌培养,采用法国梅里埃公司的微量生化反应系统进行细菌鉴定,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,采用MAR法检测抗精子抗体。结果:2298例标本中208份分离出细菌208株,总检出率为9.05%,其中G+菌188株,占90.38%,G-菌20株,占9.62%,主要优势菌株为金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌;药敏试验显示,以头孢呋辛、头孢唑啉、万古霉素抑菌最为显著;病原体感染不育组的精子活率、活力明显低于未感染的正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01),而在抗精子抗体的检查中,病原体感染不育组的阳性率显著高于对照组。结论:在男性不育的诊治过程中,精液的细菌培养是非常必要的。

关键词：男性不育细菌培养药敏纸片药敏试验

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男性不育症患者生殖道解脲支原体感染与细胞因子、自身抗体的相关性研究

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中国妇幼保健 2010年第26期25卷 3761-3763页

作者：周慧杜庆龄段卓郭蕾王勇闵洁婷刘燕婕华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉同济生殖专科医院湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院

目的:探讨男性不育症生殖道解脲支原体(UU)感染与细胞因子水平及自身抗体的相关性。方法:按WHO的标准对生育组和不育组(包括少精组、弱精组及无精组)进行精液常规分析,解脲支原体培养;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血液和(或)精浆IL-... 详细信息

目的:探讨男性不育症生殖道解脲支原体(UU)感染与细胞因子水平及自身抗体的相关性。方法:按WHO的标准对生育组和不育组(包括少精组、弱精组及无精组)进行精液常规分析,解脲支原体培养;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血液和(或)精浆IL-2、IL-6、TNF、AcAb的水平;采用混合抗球蛋白反应试验(MAR)法检测AsAb;采用间接免疫荧光(IFA)法检测ANA。结果:与生育组比较,无精组血液和精浆中IL-2、IL-6、TNF-α水平显著增高,其差异具有统计学意义(P<0.01);弱精症组血液及精浆IL-6水平与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05),血液及精浆IL-2、TNF-α水平与生育组相比差异无统计学意义(P>0.05);少精症组血液和精浆中IL-2及血清IL-6与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05);在生殖道解脲支原体的培养中不育各组的阳性率均高于生育组;在AsAb、AcAb、ANA的检测中,不育症各组的阳性率均高于对照组,用IFA检测ANA阳性结果中发现,ANA核型均为胞浆颗粒/核颗粒型,而弱精症血清以及不育症各组精浆中未检测出AcAb、ANA。结论:男性生殖道UU感染可诱生细胞因子,打破细胞因子间的平衡,引起体内自身抗体的产生;同时也会影响精液质量,与男性不育密切相关;对男性不育症患者上述指标的检测,并探讨感染、细胞因子及自身抗体之间的相关性,可为不育症的诊断与治疗提供实验依据。

关键词：男性不育病原体细胞因子自身抗体

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人精子核完全裂解对RNA提取的影响

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中华医学遗传学杂志 2008年第4期25卷 465-468页

作者：李红钢丁晓芳熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 附属协和医院生殖医学中心

目的证实提取人精子RNA时，精子核完全裂解的重要性。方法人精子液化后经Percoll纯化，淋巴细胞分离液分离外周血白细胞用作对照。人精子和外周血白细胞RNA均用TRIzol和RNeasy Kit两种试剂提取，对于不同试剂提取的RNA，取相同细胞数的... 详细信息

目的证实提取人精子RNA时，精子核完全裂解的重要性。方法人精子液化后经Percoll纯化，淋巴细胞分离液分离外周血白细胞用作对照。人精子和外周血白细胞RNA均用TRIzol和RNeasy Kit两种试剂提取，对于不同试剂提取的RNA，取相同细胞数的RNA用于逆转录，并用实时PCR检测两种提取方法的β-ACTIN mRNA量，来反映所提取RNA的量。结果RNeasy Kit能完全裂解人精子和外周血白细胞的细胞核，TRIzol能完全裂解外周血白细胞的细胞核，但不能完全裂解人精子核。对于人精子，RNeasy Kit和TRIzol提取RNA量分别为（149．8±24．5）和（35．3±4．0）ng／106精子（n=3），差异有统计学意义（P=0．01）。而且这种差异不是由于提取试剂的提取效率造成的，因为对于外周血白细胞，RNeasy Kit提取RNA量还稍低于TRIzol[（765．5±229．8）和（958．8±201．0）ng／10^6细胞，n=3，P=0．168]。结论人精子核的完全裂解可显著增加精子RNA提取量，也间接说明精子核是人精子RNA存在的重要部位。

关键词：精子 RNA 实时聚合酶链反应

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人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

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现代妇产科进展 2010年第7期19卷 514-517,522页

作者：相文佩温子娜水丽君胡廉陈汉平华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P<0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P<0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P<0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P<0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。

关键词：肿瘤坏死因子-α 内皮型一氧化氮合酶运输介导物二硫代氨基甲酸吡咯烷人脐静脉内皮细胞

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ANCA水平检测在SLE活动期和SLE引起的新月体肾炎中的临床意义

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第4期38卷 548-550页

作者：刘燕婕胡丽华沈凌讯周慧华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院风湿免疫科武汉430022 华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030

目的探讨抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)在系统性红斑狼疮(SLE)活动期和在SLE特殊临床症状如SLE引起的新月体肾炎(CGN)中的临床意义。方法采用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(Western blot)测定126例SLE患者的ANCA和与SLE活动性及SLE引起... 详细信息

目的探讨抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)在系统性红斑狼疮(SLE)活动期和在SLE特殊临床症状如SLE引起的新月体肾炎(CGN)中的临床意义。方法采用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(Western blot)测定126例SLE患者的ANCA和与SLE活动性及SLE引起的CGN密切相关的特异性自身抗体:抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗核小体(AnuA)抗体和抗组蛋白(His)抗体,用ELISA法检测验证ANCA阳性率,用SLE活动指数(SLEDAI)判断SLE活动性,用肾组织病理学检查了解由SLE引起的CGN的发生情况,分析ANCA、SLEDAI和特定自身抗体间的关系。结果在126例SLE患者中IIF法检测ANCA的阳性率为31.7%(40/126),且均为PANCA。用ELISA法验证全部ANCA阳性患者血清,阳性率为77.5%(31/40),且均为髓过氧化物酶(MPO)即为PANCA。ANCA阳性组SLEDAI评分>10分者(即SLE活动期)占71.0%与ANCA阴性组(39.5%)相比差异有显著性意义(P<0.01)。ANCA阳性率与抗ds-DNA抗体、抗AnuA抗体和抗His抗体的阳性率呈正相关。ANCA阳性的40例SLE患者32例有肾损害,病理切片显示为CGN的有21例,即ANCA阳性组CGN患者的比例为52.5%,明显高于阴性组CGN的18.6%(P<0.01)。结论ANCA对诊断SLE活动性有一定的临床意义,并可用于对SLE引起的CGN的预测。

关键词：抗中性粒细胞胞质抗体系统性红斑狼疮新月体肾炎

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甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

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中华男科学杂志 2013年第11期19卷 977-983页

作者：官黄涛吕金明吴春林李红钢朱长虹熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 武汉同济生殖医学专科医院湖北武汉430030 蕲春县计划生育服务站湖北黄冈435300 武汉市第一医院生殖医学中心湖北武汉430022

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通... 详细信息

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。

关键词：精浆游离DNA 甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR 输精管结扎睾丸附睾启动子

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利用母血中胎儿有核红细胞结合血清筛查和三维超声无创性产前诊断唐氏综合征

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中国妇幼保健 2011年第7期26卷 1034-1037页

作者：相文佩温子娜水丽君徐晓燕陈汉平华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:利用母外周血中胎儿有核红细胞结合血清三联筛查及三维超声,建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。方法:早、中期孕妇共670例,采取血清三联筛查结合三维超声和病史选取唐氏高危孕妇,抽取高危孕妇的外周血,流式细胞术富集... 详细信息

目的:利用母外周血中胎儿有核红细胞结合血清三联筛查及三维超声,建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。方法:早、中期孕妇共670例,采取血清三联筛查结合三维超声和病史选取唐氏高危孕妇,抽取高危孕妇的外周血,流式细胞术富集母血中的胎儿有核红细胞(Fetal Nucleated Red Blood Cells,FNRBCs);次日进行多重引物原位杂交(muti-primed in situ labeling,multi-PRINS)检测胎儿细胞21号染色体与Y染色体。结果:通过血清三联筛查和三维超声结合病史筛选出高危孕妇24例,高危孕妇在两日内即可确诊,24例中诊断23例染色体正常胎儿,包括男胎12例、女胎11例;诊断1例男性唐氏综合征胎儿。24例标本检测结果和实际胎儿核型符合。结论:血清三联筛查、超声检查结合病史筛选出高危孕妇,然后利用母血中胎儿有核红细胞进行多重引物原位杂交检测细胞染色体,可作为快速、无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式,并可为其他胎儿染色体基因异常或者宫内感染的无创性产前诊断提供参考。

关键词：唐氏综合征胎儿有核红细胞多重引物原位杂交产前诊断

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