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2013中华医学会第九次全国计划生育学学术会议

作者：吴春林李红钢熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉同济生殖医学专科医院

研究背景与目的目前有少量研究发现在非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)患者睾丸存在启动子异常甲基化,睾丸组织获取困难限制了其研究.我们前期在精浆游离DNA (cfsDNA)中鉴定了睾丸/附睾特异性甲基化启动子.精子发生...

研究背景与目的目前有少量研究发现在非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)患者睾丸存在启动子异常甲基化,睾丸组织获取困难限制了其研究.我们前期在精浆游离DNA (cfsDNA)中鉴定了睾丸/附睾特异性甲基化启动子.精子发生过程中,从生殖祖细胞开始到最后精子形成逐步重建启动子甲基化,我们推测睾丸特异性甲基化启动子在不同病理类型NOA患者睾丸的甲基化状态会有一定差异,其差异能通过分析对应cfsDNA的启动子甲基化水平得到反映.而且,可能发现生精功能低下与其它无精子形成NOA之间的差异性甲基化启动子,这些启动子具有预测睾丸精子生成的潜力.

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精浆游离DNA研究进展

精浆游离DNA研究进展

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2013中华医学会第九次全国计划生育学学术会议

游离DNA又称为胞外DNA,广泛分布于人血浆、尿液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、羊水和精浆等体液中.目前,已被广泛研究并成为多种疾病无创诊断和研究的新分子标记物.近年来,游离DNA在其存在形式和生物学功能方面取得一定进展,精浆游离DNA...

游离DNA又称为胞外DNA,广泛分布于人血浆、尿液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、羊水和精浆等体液中.目前,已被广泛研究并成为多种疾病无创诊断和研究的新分子标记物.近年来,游离DNA在其存在形式和生物学功能方面取得一定进展,精浆游离DNA在其浓度、分子量大小、来源及存在形式等一般特征和临床应用研究方面取得一定进展,并在男性特发性不育研究、诊断及睾丸生殖细胞肿瘤、前列腺癌的早期诊断、疗效检测和预后评估等方面展示出了良好应用前景.本文概述游离DN一般特征和生物学功能,并结合精浆游离DNA的研究现状和应用前景作一综述.

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人精浆游离DNA中睾丸和附睾启动子甲基化谱的鉴定

人精浆游离DNA中睾丸和附睾启动子甲基化谱的鉴定

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2013中华医学会第九次全国计划生育学学术会议

作者：吴春林丁晓芳李红钢熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心华中科技大学同济医学院协和医院生殖医学中心华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉同济生殖医学专科医院

研究背景与目的 DNA甲基化在精子发生与成熟的甲基化重建中起重要作用,已证实在不育男性睾丸或精子中存在一些基因启动子的异常甲基化.我们之前在人精浆发现高浓度的游离DNA.我们假设在人精浆游离DNA (cell-free seminal DNA,cfsDNA)能...

研究背景与目的 DNA甲基化在精子发生与成熟的甲基化重建中起重要作用,已证实在不育男性睾丸或精子中存在一些基因启动子的异常甲基化.我们之前在人精浆发现高浓度的游离DNA.我们假设在人精浆游离DNA (cell-free seminal DNA,cfsDNA)能检测到一些睾丸和附睾特异性甲基化启动子,从而有望为精子发生和精子成熟异常引起的男性不育提供无创性表观遗传标记物.为此,我们鉴定人精浆中睾丸和附睾特异性甲基化启动子.方法我们通过NimbleGen HG18 Refseq启动子芯片分别检测6例精液参数正常受试者混合cfsDNA和6例输精管切除术男性混合cfsDNA中的启动子甲基化情况,筛选睾丸和附睾特异性甲基化启动子.分别通过MeDIP-QPCR和MethyLight在4例精液参数正常和4例输精管切除的cfsDNA中检测甲基化芯片筛选的10个和10个不同睾丸和附睾特异性甲基化启动子.通过Gene Ontology分析对睾丸和附睾特异性甲基化基因进行功能归类.

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不同质量精液精浆中细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α水平和氧化应激的关系

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中华腔镜泌尿外科杂志（电子版） 2013年第2期7卷 54-57页

作者：程丹熊承良李洁邹宇洁龙文武汉大学人民医院生殖医学中心武汉430060 华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030

目的探讨男性精浆中细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α浓度和氧化应激指标活性氧、丙二醛水平的关系。方法筛选41例参数正常男性、65例少弱精子症及21例无精子症患者精液,离心后分离精浆,ELISA方法测定不同组细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α浓度,... 详细信息

目的探讨男性精浆中细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α浓度和氧化应激指标活性氧、丙二醛水平的关系。方法筛选41例参数正常男性、65例少弱精子症及21例无精子症患者精液,离心后分离精浆,ELISA方法测定不同组细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α浓度,化学发光法测定精液活性氧(ROS)水平,生化比色法测定精浆中的丙二醛(MDA)浓度,并分析细胞因子浓度与氧化应激指标活性氧、丙二醛水平变化的相关性。结果 IL-2在少弱精子症组精浆中最高,与其余两组相比差异有显著性,而在精液参数正常组与无精子症组间无明显差异;IL-6、TNF-α在少弱精子症与无精子症组精浆中浓度均较精液参数正常组高,差异有显著性,而在少弱精子症与无精子症组之间差异无显著性;精浆中ROS与MDA在少弱精子症组最高,与另两组相比差异有显著性,而无精子症组与精液参数正常组间差异无显著性。在不同组精浆中ROS、MDA水平变化与IL-2浓度变化相同,而精浆中IL-6和TNF-α的变化趋势与氧化应激指标的变化无关。结论精浆中细胞因子水平变化与男性不育有关,质量异常的精液中细胞因子浓度明显升高,而少弱精子症导致的男性生育力降低与氧化应激有关。

关键词：精浆细胞因子活性氧男性不育

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小RNA在精子发生中的研究进展

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中国计划生育学杂志 2012年第2期20卷 134-136页

作者：郭翠翠(综述) 李红钢熊承良(审校) 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心专科医院武汉430030

近20年来人们在动物、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA，包括miRNA、piRNA和siRNA。与其相关的Argonaut家族蛋白分为2个亚家族：Ago亚家族和Piwi亚家族。精子发生是指由精原细胞经初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞至... 详细信息

近20年来人们在动物、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA，包括miRNA、piRNA和siRNA。与其相关的Argonaut家族蛋白分为2个亚家族：Ago亚家族和Piwi亚家族。精子发生是指由精原细胞经初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞至成熟精子形成的过程。整个过程分为3个阶段：精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程，这一复杂的过程受多种因素的调控。

关键词：精子发生小RNA 初级精母细胞非编码RNA 精原细胞 miRNA siRNA 亚家族

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淘洗离心机在生殖系统应用性研究的探讨

淘洗离心机在生殖系统应用性研究的探讨

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中华医学会第八次全国计划生育学术会议

作者：刘燕熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉同济生殖医学专科医院

不孕不育是全球性的医学问题,据世界卫生组织统计,全球约有15%-20%的夫妻存在不孕不育的问题。目前大约80%以上的男性不育是与精子密度低、精子活力低下及精子形态异常直接相关。由于男性精子发生及精子、精液的质量受众多因素的影响,... 详细信息

不孕不育是全球性的医学问题,据世界卫生组织统计,全球约有15%-20%的夫妻存在不孕不育的问题。目前大约80%以上的男性不育是与精子密度低、精子活力低下及精子形态异常直接相关。由于男性精子发生及精子、精液的质量受众多因素的影响,尤其是现在环境污染日趋严重,及某些未知的遗传因素,使男性不育比例逐渐升高。与之相应,辅助生殖技术也在迅速发展,但对男性不育病

关键词：男性不育生殖系统生殖细胞应用性研究离心机

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睾丸特异性热激调控miRNA干扰载体的构建和表达

睾丸特异性热激调控miRNA干扰载体的构建和表达

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中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）

作者：刘燕熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉同济生殖医学专科医院

目的构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及研究干扰载体在43℃热激条件下启动表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,将成功获取的Hsp7... 详细信息

目的构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及研究干扰载体在43℃热激条件下启动表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,将成功获取的Hsp70-B启动子取代pGL3-BasicCMV启动子,依据有效的CatSper1-siRNA序列,设计合成MIR-30结构寡核苷酸序列,构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA-CatSper1干扰载体。睾

关键词：干扰载体热休克蛋白 miRNA 组织特异性

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研究小鼠支持细胞中睾丸特异性热激调控的miRNA载体干扰uPA基因的表达情况

研究小鼠支持细胞中睾丸特异性热激调控的miRNA载体干扰uPA基因的...

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中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）

作者：刘燕熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉同济生殖医学专科医院

目的研究小鼠支持细胞(TM4)中睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及干扰载体在43℃热激条件下启动表达miRNAs干扰uPA基因的表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B... 详细信息

目的研究小鼠支持细胞(TM4)中睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及干扰载体在43℃热激条件下启动表达miRNAs干扰uPA基因的表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,设计合成MIR-30结构寡核苷酸序列,构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因

关键词： uPA 实验组小鼠支持细胞 miRNA

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Mfn-2在人类精子中的定位与分布

Mfn-2在人类精子中的定位与分布

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：孟天庆杨瑞峰黄世兴王立平赵娜李红钢熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉同济生殖医学专科医院

目的:线粒体融合蛋白-2(Mfn-2)在调节线粒体功能,细胞增殖和凋亡,氧化应激等方面发挥着极为重要的角色。本研究的目的是明确Mfn-2在人类精子中的定位与分布。方法:精液标本经过涂片、固定、透化,利用Mfn-2多克隆抗体以间接免疫荧光法通... 详细信息

目的:线粒体融合蛋白-2(Mfn-2)在调节线粒体功能,细胞增殖和凋亡,氧化应激等方面发挥着极为重要的角色。本研究的目的是明确Mfn-2在人类精子中的定位与分布。方法:精液标本经过涂片、固定、透化,利用Mfn-2多克隆抗体以间接免疫荧光法通过激光共聚焦显微镜观察Mfn-2在人类精子中的定位与分布。结果:通过激光共聚焦显微镜可见荧光仅出现在人类精子的尾部中段,且颈段与主段之间的长约5～7μm的尾部中段全部均见阳性着色。结论:确定了Mfn-2位于人类精子的尾部中段且整个中段均有分布,为研究Mfn-2在人类精子中的生物功能奠定了基础。

关键词：人类精子 Mfn-2 激光共聚焦显微镜

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Mfn-2在人类精子冷冻保护中的作用初探

Mfn-2在人类精子冷冻保护中的作用初探

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：孟天庆杨瑞峰黄世兴王立平赵娜李红钢夏伟熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉同济生殖医学专科医院

目的:探讨Mfn-2在人类精子冷冻过程中的保护作用。方法:①通过对人类精液4℃1h、2h、4h、8h、12h处理后,对不同处理组进行精子活力测定,并用Western Blot比较各处理组的Mfn-2表达量。②对精子液氮程序冷冻复苏率>40%和复苏率40%的精... 详细信息

目的:探讨Mfn-2在人类精子冷冻过程中的保护作用。方法:①通过对人类精液4℃1h、2h、4h、8h、12h处理后,对不同处理组进行精子活力测定,并用Western Blot比较各处理组的Mfn-2表达量。②对精子液氮程序冷冻复苏率>40%和复苏率<40%两组精子的Mfn-2表达量用WesternBlot测定比较。结果:经过4℃4h处理的精子Mfn-2表达量明显高于其他处理组,4℃4h处理组的精子活力也优于其他组。对精子液氮程序冷冻复苏率>40%的精液Mfn-2表达量明显高于复苏率<40%精液Mfn-2表达量。结论:精子在4℃4h时可能通过产生Mfn-2对抗冷冻损伤,耐冻精子的Mfn-2表达量明显高于不耐冻精子的Mfn-2表达量。Mfn-2可能在人类精液冷冻保护中起到很关键的作用,其作用机制尚待进一步研究。

关键词：复苏率 Mfn-2 冷冻保护

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