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川芎嗪抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

中国妇幼保健 2009年第6期24卷 802-804页

作者：相文佩陈汉平徐晓燕华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)的表达及川芎嗪对其表达的调节作用。方法:采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC,传代后待细胞长满至70%～80%后,加或不加川芎嗪作用... 详细信息

目的:探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)的表达及川芎嗪对其表达的调节作用。方法:采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC,传代后待细胞长满至70%～80%后,加或不加川芎嗪作用30min后分别加入正常妊娠(正常组)及子痫前期(子痫前期组)脐静脉血清,培养48h后,MTT测定细胞活力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定NOSTRIN的表达。结果:子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC,其细胞的活力(0.1318±0.031)明显低于正常组(0.1929±0.055),P<0.05,细胞中NOSTRIN mRNA的相对表达量(0.493±0.057)明显高于正常组(0.202±0.031),P<0.01,加川芎嗪预处理后,子痫前期组细胞的活力明显升高(0.1864±0.041),其细胞中NOSTRIN mRNA的相对表达量(0.273±0.048)明显下降(P<0.01)。结论:子痫前期患者脐静脉血清可诱导NOSTRIN表达增加,应用川芎嗪预处理后,可抑制NOSTRIN表达的增加,川芎嗪对子痫前期的防治有一定作用。

关键词：子痫前期 NOSTRIN 脐静脉内皮细胞川芎嗪

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体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 559-563页

作者：廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/教育部器官移植重点实验室/卫生部器官移植重点实验室

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC... 详细信息

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

关键词：酶联免疫斑点法 B淋巴细胞 HLA抗体美洲商陆丝裂原

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无精子症患者精液Y染色体微缺失检测与分析

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中华医学杂志 2008年第24期88卷 1662-1665页

作者：李红钢丁晓芳王成赵江霞左明达熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心武汉市第七医院病理科

目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，... 详细信息

目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，用4组多重PCR检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区共15个序列标签位点（STS）的缺失。PCR产物测序证实无精子症患者精液为模板扩增的准确性，琼脂糖凝胶电泳观察精液标本和相应血液标本PCR产物的一致性。结果所有多重PCR反应均成功进行，产物测序证实为目的片段。正常精液未检测到Y染色体微缺失，而无精子症患者共检测到26例（10．8％）Y染色体微缺失，均有欧洲男科学会（EAA）和欧洲分子遗传学质量控制体系（EMQN）推荐STS位点的缺失：AZFa区、AZFb区各2例（各占7．7％），3例（11．5％）位于AZFb＋AZFc区，19例（73．1％）位于AZFc区。血液标本检测结果与精液标本检测结果完全一致。结论用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查是可行、可靠的。初步表明EAA／EMQN推荐STS位点适合我国无精子症患者Y染色体微缺失检查。

关键词：无精子症精液聚合酶链反应 Y染色体微缺失

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人精子核完全裂解对RNA提取的影响

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中华医学遗传学杂志 2008年第4期25卷 465-468页

作者：李红钢丁晓芳熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 附属协和医院生殖医学中心

目的证实提取人精子RNA时，精子核完全裂解的重要性。方法人精子液化后经Percoll纯化，淋巴细胞分离液分离外周血白细胞用作对照。人精子和外周血白细胞RNA均用TRIzol和RNeasy Kit两种试剂提取，对于不同试剂提取的RNA，取相同细胞数的... 详细信息

目的证实提取人精子RNA时，精子核完全裂解的重要性。方法人精子液化后经Percoll纯化，淋巴细胞分离液分离外周血白细胞用作对照。人精子和外周血白细胞RNA均用TRIzol和RNeasy Kit两种试剂提取，对于不同试剂提取的RNA，取相同细胞数的RNA用于逆转录，并用实时PCR检测两种提取方法的β-ACTIN mRNA量，来反映所提取RNA的量。结果RNeasy Kit能完全裂解人精子和外周血白细胞的细胞核，TRIzol能完全裂解外周血白细胞的细胞核，但不能完全裂解人精子核。对于人精子，RNeasy Kit和TRIzol提取RNA量分别为（149．8±24．5）和（35．3±4．0）ng／106精子（n=3），差异有统计学意义（P=0．01）。而且这种差异不是由于提取试剂的提取效率造成的，因为对于外周血白细胞，RNeasy Kit提取RNA量还稍低于TRIzol[（765．5±229．8）和（958．8±201．0）ng／10^6细胞，n=3，P=0．168]。结论人精子核的完全裂解可显著增加精子RNA提取量，也间接说明精子核是人精子RNA存在的重要部位。

关键词：精子 RNA 实时聚合酶链反应

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无精和严重少精子症患者Y染色体的微缺失

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中华医学遗传学杂志 2008年第3期25卷 252-255页

作者：李红钢丁晓芳赵江霞左明达熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学附属协和医院生殖医学中心武汉430030 武汉市第七医院病理科

目的检测我国无精和严重少精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点，及其与睾丸病理学类型的关系。方法取584例无精子症和80例严重少精子症患者精液中细胞或外周血白细胞，裂解提取DNA，用4组多重聚合酶链反应检测分布于AZFa、AZFb、A... 详细信息

目的检测我国无精和严重少精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点，及其与睾丸病理学类型的关系。方法取584例无精子症和80例严重少精子症患者精液中细胞或外周血白细胞，裂解提取DNA，用4组多重聚合酶链反应检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区，包括欧洲男科学会和欧洲分子遗传学质量控制体系推荐的6个位点在内的共15个序列标签位点（sequence tagged site，SIS）的缺失。对部分有Y染色体微缺失患者进行睾丸细针抽吸活检，检查睾丸病理学类型。结果584例无精子症患者中，共有66例（11．3％）发生Y染色体微缺失，各区发生率构成比由高到低依次为：AZFc区48例（72．7％），AZFb＋c区9例（13．6％），AZFa＋b＋c区4例（6．1％），AZFb区3例（4．5％），AZFa区2例（3．0％）。80例严重少精子症患者共有10例发生Y染色体微缺失（12．5％），均为AZFc区缺失。AZFc区缺失患者（19例）睾丸病理学类型多样化；AZFb＋c区或AZFa＋b＋c区缺失患者（7例）睾丸病理学类型为唯支持细胞综合征或生精阻滞于精原细胞。结论Y染色体微缺失在我国的发生情况与其他国家大多数报道基本一致，跨区大缺失对精子发生造成严重影响。

关键词：无精子症少精子症 Y染色体微缺失无精子基因

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人精子RNA的提取及含量分析

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生殖医学杂志 2008年第2期17卷 104-108页

作者：李红钢周慧官黄涛丁晓芳熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心武汉430022

目的建立可靠的提取人精子RNA的方法，分析其含量并用于检测基因mRNA。方法9例正常精液标本液化后，经Percoll纯化，用体细胞裂解液（含0．1％十二烷基硫酸钠和0．5％Triton X-100的水溶液）于O℃处理15min去除精子以外的细胞。用RNeasy... 详细信息

目的建立可靠的提取人精子RNA的方法，分析其含量并用于检测基因mRNA。方法9例正常精液标本液化后，经Percoll纯化，用体细胞裂解液（含0．1％十二烷基硫酸钠和0．5％Triton X-100的水溶液）于O℃处理15min去除精子以外的细胞。用RNeasy Kit提取精子RNA，微量核酸测定仪测定RNA量。RNA用于逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2（CatSper2）、鱼精蛋白2（Protamine-2）mRNA，同时，检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白（E-Cadherin）mRNA，分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染。结果体细胞裂解液于0℃处理15min能去除精子以外的细胞，使精子RNA提取量提高（2．2～4.9倍）。9例正常精液标本RNA量为（233．5±75．3）ng／10^6精子。所有标本RNA用RTPCR，均成功扩增β-Actin、CatSper2、Pmtamine-2，但扩增c-Kit、CD4、E-Cadhefin未见目的条带。结论人精子中含微量RNA，本提取方法能提取人精子中微量RNA，且避免其他细胞污染，可供人精子RNA研究和临床检测选用。

关键词：精子 RNA 精子特异性阳离子通道2 鱼精蛋白2

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鼠巨细胞病毒感染对雄性小鼠生殖性激素水平的影响

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中国优生与遗传杂志 2008年第2期16卷 100-102页

作者：徐利文熊锦文赵玉梅徐红吴昌杰胡廉熊承良武警湖北总队医院妇产科 430063 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染后雄性小鼠生殖性激素水平的变化，探讨MCMV感染影响雄性生殖功能的可能机制。方法选择无McMV活动感染的雄性小鼠，睾丸接种MCMV或不合MCMV的细胞培养液，设立实验组与对照组，采用放射免疫法检测接种... 详细信息

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染后雄性小鼠生殖性激素水平的变化，探讨MCMV感染影响雄性生殖功能的可能机制。方法选择无McMV活动感染的雄性小鼠，睾丸接种MCMV或不合MCMV的细胞培养液，设立实验组与对照组，采用放射免疫法检测接种后不同时段（小鼠一个生精周期内）的小鼠血清及睾丸组织内性激素含量，并进行比较。结果睾丸匀浆组织T浓度在MCMV感染第4～9d显著降低（P〈0．05），第14～21d有一短暂恢复过程，第38d又较对照组下降（P〈0.05）。血清LH浓度在MCMV感染的第4、9、14d显著升高（P〈0．05），其它时间点比较差异无统计学意义（P〉0．05）。而感染不同时期的血清T和FSH比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论MCMV急性感染可引起雄鼠生殖内分泌激素水平的改变：通过影响其下丘脑-垂体-性腺轴的调节导致雄鼠生殖功能障碍。

关键词：鼠巨细胞病毒睾丸性激素下丘脑-垂体-性腺轴

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巨细胞病毒体外感染对人精子存活率及其运动参数与超微结构的影响

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武警医学 2008年第1期19卷 30-34页

作者：熊锦文熊承良卫海李红钢官黄涛赵玉梅徐红于建萍武警湖北总队医院妇产科武汉430061 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对人精子存活率、精子各运动参数及其超微结构的影响。方法将HCMV与10例经过上游法优化的正常人精子体外共同孵育，于0、1、2、3、4h分别取样，检测精子存活率，并应用计算机辅助精子分析系统（CASA）... 详细信息

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对人精子存活率、精子各运动参数及其超微结构的影响。方法将HCMV与10例经过上游法优化的正常人精子体外共同孵育，于0、1、2、3、4h分别取样，检测精子存活率，并应用计算机辅助精子分析系统（CASA）测定精子直线运动速度（VSL）、曲线运动速度（VCL）、平均路径速度（VAP）、头部侧摆幅度（ALH）和前向运动百分率（a＋b级精子百分率）；同时，电镜观察HCMV感染不同时间人精子超微病理结构的改变。结果与空白、阴性对照组比较，人精子存活率在高浓度HCMV感染后1、3h时明显降低，差异显著（P〈0．05），4h时差异非常显著（P〈0．001）。a＋b级精子百分率仅在高浓度HCMV感染4h时明显降低，差异显著（P〈0．05）。精子VSL在各时间点各组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。精子VCL在高浓度HCMV感染3h时明显下降，差异显著（P〈0．05），4h时显著下降，差异非常显著（P〈0．001）。而中浓度HCMV感染4h时，精子VCL才下降，差异显著（P〈0．05）。精子VAP在高、中浓度HCMV感染2、3、4h时明显降低，差异显著（P〈0．05）。精子ALH在高浓度HCMV感染3、4h时明显下降，差异显著（P〈0．05）。电镜结果显示：人精子超微结构的异常改变在高浓度HCMV感染时常见，4h时严重；主要表现有精子核解聚、空泡增多、顶体破裂、质膜破损、线粒体肿胀及其排列紊乱。结论HCMV体外感染3～4h可造成人精子存活率与运动参数及精子超微结构的异常，且这种改变与HCMV浓度存有一定的量效关系，高浓度HCMV感染的影响结果显著。

关键词：人巨细胞病毒人精子精子存活率精子运动参数超微结构

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CatSper1在小鼠睾丸发育过程中的动态表达及与人精子活力的关系

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生殖医学杂志 2007年第3期16卷 187-191页

作者：李红钢丁晓芳孔祥斌熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心武汉430022

目的研究CatSper1 mRNA在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,并探讨CatSper1蛋白表达与精子运动的关系。方法采用荧光实时逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)相对定量法检测CatSper1 mRNA在出生后11、15、18、21、25、28、35、42、56和120 d龄C57B... 详细信息

目的研究CatSper1 mRNA在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,并探讨CatSper1蛋白表达与精子运动的关系。方法采用荧光实时逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)相对定量法检测CatSper1 mRNA在出生后11、15、18、21、25、28、35、42、56和120 d龄C57BL/6小鼠(每天龄3只)睾丸中的表达;分别从4例正常精液标本中用四层密度梯度Percoll(浓度分别为95%、76%、57%和47.5%)离心分离出高活力和低活力精子,用于Western Blot定量检测CatSper1蛋白的表达。结果CatSper1 mRNA在18 d龄小鼠睾丸开始表达,在25和28 d龄表达上调明显,分别为21 d龄表达水平的2.95和7.59倍。自42 d后上调缓慢,至成年小鼠时达到最高水平。CatSper1蛋白在每例标本高活力精子中的表达量均显著高于低活力精子(P<0.05)。结论CatSper1与精子活力特性有关,为进一步研究CatSper家族各成员间的关系和确切功能提供参考依据。

关键词： CatSper1 钙离子通道睾丸发育生物学精子

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复方精氨酸胶囊治疗男性少弱精症疗效观察

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郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 730-733页

作者：苏迎春孙莹璞郭艺红辛志敏董悦芝熊承良尹平郑州大学第一附属医院生殖医学中心郑州450052 华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院统计学教研室武汉430030

目的:探讨复方精氨酸胶囊治疗男性少弱精症的有效性和安全性。方法:将80例男性少弱精症不育患者随机分为试验组及安慰剂组,各40例。分别给予复方精氨酸胶囊和安慰剂,共服药60d。于停药后第10d评价有效性和安全性。结果:试验组有效率(63.... 详细信息

目的:探讨复方精氨酸胶囊治疗男性少弱精症的有效性和安全性。方法:将80例男性少弱精症不育患者随机分为试验组及安慰剂组,各40例。分别给予复方精氨酸胶囊和安慰剂,共服药60d。于停药后第10d评价有效性和安全性。结果:试验组有效率(63.64%,21/33)明显高于安慰剂组(31.43%,11/35),2组间差异有统计学意义(P<0.01)。2组患者在治疗过程中无严重不良事件发生。结论:复方精氨酸胶囊能有效治疗少弱精症,短期用药无严重不良反应。

关键词：复方精氨酸胶囊少精弱精

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