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中华医学会第八次全国计划生育学术会议

作者：刘燕熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所妇产科华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉同济生殖医学专科医院

目的研究小鼠支持细胞(TM4)中睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及干扰载体在43℃热激条件下启动表达miRNAs干扰uPA基因的表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B... 详细信息

目的研究小鼠支持细胞(TM4)中睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及干扰载体在43℃热激条件下启动表达miRNAs干扰uPA基因的表达情况。方法以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,将成功获取的Hsp70-B启动子取代pGL3-BasicCMV启动子,依据有效的uPA-siRNA序列,设计合成MIR-30结构

关键词： uPA 实验组小鼠支持细胞 miRNA

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无精子症和生精功能正常者睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

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中华男科学杂志 2011年第8期17卷 712-716页

作者：池艳毛向明张欣宗张峰彬顾宇春熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心专科医院湖北武汉430030 南方医科大学南方医院泌尿外科广东广州510515 浙江大学附属妇产科医院浙江杭州310023 英国伯明翰大学医学院

目的:对人类睾丸组织中表达血红素加氧酶(HO)的细胞进行定位;通过测定原发性无精子症及梗阻性无精子症患者睾丸组织中血红素加氧酶1(HO-1)的表达量与正常睾丸组织中HO-1表达量的差异性,来探讨其与无精子症发病的相关性。方法:应用免疫... 详细信息

目的:对人类睾丸组织中表达血红素加氧酶(HO)的细胞进行定位;通过测定原发性无精子症及梗阻性无精子症患者睾丸组织中血红素加氧酶1(HO-1)的表达量与正常睾丸组织中HO-1表达量的差异性,来探讨其与无精子症发病的相关性。方法:应用免疫组化方法对人类睾丸组织中表达HO的细胞进行定位;采用逆转录-荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测无精子症患者与正常人睾丸组织HO-1及HO-2基因水平的表达量;应用W est-ern印迹检测各组之间HO蛋白水平表达量。结果:在正常睾丸组织,HO-1主要表达在支持细胞上;而HO-2在支持细胞和各级生精细胞中均有表达;FQ-PCR结果显示非梗阻性无精子症患者睾丸组织HO-1、HO-2的表达量均显著低于正常组及梗阻性无精子症组(P<0.05),差异具有统计学意义。而梗阻性无精子症患者睾丸组织表达HO-1、HO-2的量与正常组相比无显著性差异。W estern印迹结果显示HO-1蛋白水平的表达量差异与基因水平一致。而HO-2的蛋白水平在各组之间表达没有显著性差异。结论:非梗阻性无精子症患者睾丸组织中HO的表达量显著性降低,且HO-1无论是蛋白水平还是基因水平的差异一致。HO-1可以通过抗炎、抗氧化、抗凋亡的机制保护睾丸组织免受各种应激的损伤,从而维护正常的生精功能。可见,HO-1的减少可能与生精功能低下相关,这可能是非梗阻性无精子症的发病机制之一。

关键词：血红素加氧酶无精子症睾丸

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人精浆游离核酸的提取及一般特征研究

人精浆游离核酸的提取及一般特征研究

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中国性学会性医学专业委员会第七次全国性医学学术会议

作者：李红钢丁晓芳黄诗韵郭翠翠熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉 430030 武汉同济生殖医学专科医院湖北武汉 430013 华中科技大学同济医学院附属协和医院生殖医学中心湖北武汉 430022 华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉 430030

游离核酸是存在于细胞之外的RNA和DNA,来源于细胞死亡后释放或活细胞的主动分泌,又称胞外核酸。由于人体液中(如血、唾液、支气管液等)的游离核酸能反映来源器官的mRNA和microRNA表达及DNA突变、修饰等信息,近年来,诸多研究表明,人体液... 详细信息

游离核酸是存在于细胞之外的RNA和DNA,来源于细胞死亡后释放或活细胞的主动分泌,又称胞外核酸。由于人体液中(如血、唾液、支气管液等)的游离核酸能反映来源器官的mRNA和microRNA表达及DNA突变、修饰等信息,近年来,诸多研究表明,人体液中游离核酸是用于诊断疾病的新分子标志物。同时,也有研究表明,游离核酸是细胞间信息传递的一种新形式。本小组建立提取人精浆游离核酸,包括RNA和DNA的方法,并研究了人精浆游离mRNA(cell-free seminal mRNA,cfs-mRNA)、microRNA(cell-free seminal microRNA,cfs-microRNA)和DNA (cell-free seminal DNA,cfs-DNA)的一般特征。

关键词：游离核酸精浆提取方法分子标志物

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HSP70在小鼠睾丸巨细胞病毒感染中的表达及作用

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武警医学 2011年第10期22卷 849-851,855页

作者：熊锦文赵玉梅徐红于建萍胡廉官黄涛熊承良武警湖北总队医院妇产科武汉430061 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030

目的研究鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染的不同时期细胞因子热休克蛋白70(heat shockprotein 70,HSP70)在小鼠睾丸组织中的表达,探讨HSP70在MCMV致病机制及机体抵御MCMV感染中的可能作用。方法建立小鼠睾丸MCMV急性感... 详细信息

目的研究鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染的不同时期细胞因子热休克蛋白70(heat shockprotein 70,HSP70)在小鼠睾丸组织中的表达,探讨HSP70在MCMV致病机制及机体抵御MCMV感染中的可能作用。方法建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型,采用免疫组织化学SP法检测不同感染时段的睾丸组织内HSP70的表达与定位,分析其表达情况与病毒增殖及睾丸病变程度的相关性。结果接种病毒后不同时期的睾丸组织中HSP70表达程度不同,MCMV感染第1天起其表达开始增加(P<0.01),感染的第6～9天增至高峰(P<0.01),此时MCMV增殖程度最重,睾丸组织发生最为严重的病理性炎性改变。随感染时间延长,HSP70表达水平下降,病毒增殖减少,睾丸组织病损程度减轻。结论 MCMV感染时,HSP70在睾丸组织中的表达与MCMV增殖及睾丸组织病变程度相关,提示HSP70可能参与MCMV感染的致病机制及机体抵御MCMV感染机制。

关键词：鼠巨细胞病毒睾丸热休克蛋白70

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巨细胞病毒感染后雄鼠生殖细胞凋亡与睾丸NF-κBp65的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第9期31卷 818-818页

作者：熊锦文胡廉官黄涛赵玉梅徐红于建萍熊承良武警湖北总队医院妇产科武汉430061 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030

目前，大多学者认为人巨细胞病毒（HCMV）是引起男性不育的病原微生物之一。本文建立睾丸鼠巨细胞病毒（MCMV）感染模型，采用Hoechst33258染色法对MCMV感染不同时期睾丸组织进行生殖细胞凋亡检测，同时采用免疫组化染色（S-P法）检测M... 详细信息

目前，大多学者认为人巨细胞病毒（HCMV）是引起男性不育的病原微生物之一。本文建立睾丸鼠巨细胞病毒（MCMV）感染模型，采用Hoechst33258染色法对MCMV感染不同时期睾丸组织进行生殖细胞凋亡检测，同时采用免疫组化染色（S-P法）检测MCMV感染不同时期睾丸组织生殖细胞内核因子-κB亚基p65亲和肽（NF-κB：p65）的表达情况，探讨MCMV感染对雄鼠生殖细胞凋亡的影响，

关键词： NF-κBp65 生殖细胞凋亡人巨细胞病毒睾丸组织病毒感染后 Hoechst33258 雄鼠 CMV感染

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男性不育症患者生殖道解脲支原体感染与细胞因子、自身抗体的相关性研究

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中国妇幼保健 2010年第26期25卷 3761-3763页

作者：周慧杜庆龄段卓郭蕾王勇闵洁婷刘燕婕华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉同济生殖专科医院湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院

目的:探讨男性不育症生殖道解脲支原体(UU)感染与细胞因子水平及自身抗体的相关性。方法:按WHO的标准对生育组和不育组(包括少精组、弱精组及无精组)进行精液常规分析,解脲支原体培养;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血液和(或)精浆IL-... 详细信息

目的:探讨男性不育症生殖道解脲支原体(UU)感染与细胞因子水平及自身抗体的相关性。方法:按WHO的标准对生育组和不育组(包括少精组、弱精组及无精组)进行精液常规分析,解脲支原体培养;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血液和(或)精浆IL-2、IL-6、TNF、AcAb的水平;采用混合抗球蛋白反应试验(MAR)法检测AsAb;采用间接免疫荧光(IFA)法检测ANA。结果:与生育组比较,无精组血液和精浆中IL-2、IL-6、TNF-α水平显著增高,其差异具有统计学意义(P<0.01);弱精症组血液及精浆IL-6水平与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05),血液及精浆IL-2、TNF-α水平与生育组相比差异无统计学意义(P>0.05);少精症组血液和精浆中IL-2及血清IL-6与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05);在生殖道解脲支原体的培养中不育各组的阳性率均高于生育组;在AsAb、AcAb、ANA的检测中,不育症各组的阳性率均高于对照组,用IFA检测ANA阳性结果中发现,ANA核型均为胞浆颗粒/核颗粒型,而弱精症血清以及不育症各组精浆中未检测出AcAb、ANA。结论:男性生殖道UU感染可诱生细胞因子,打破细胞因子间的平衡,引起体内自身抗体的产生;同时也会影响精液质量,与男性不育密切相关;对男性不育症患者上述指标的检测,并探讨感染、细胞因子及自身抗体之间的相关性,可为不育症的诊断与治疗提供实验依据。

关键词：男性不育病原体细胞因子自身抗体

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人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

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现代妇产科进展 2010年第7期19卷 514-517,522页

作者：相文佩温子娜水丽君胡廉陈汉平华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P<0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P<0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P<0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P<0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。

关键词：肿瘤坏死因子-α 内皮型一氧化氮合酶运输介导物二硫代氨基甲酸吡咯烷人脐静脉内皮细胞

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内源性一氧化碳在生殖系统中作用的研究

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国际生殖健康／计划生育杂志 2010年第2期29卷 72-74,95页

作者：池艳熊承良顾宇春华中科技大学同济医学院计划生育研究所华中科技大学同济医学院生殖医学中心专科医院武汉430030 英国伯明翰医学院

内源性一氧化碳(endogenous CO)主要由血红素加氧酶(hemeoxygenase,HO)催化分解血红素而产生,是继一氧化氮之后发现的另一种具有重要生物学效应的气体分子,广泛参与体内的各种生理和病理过程,在心血管系统、神经系统、消化系统中起非常... 详细信息

内源性一氧化碳(endogenous CO)主要由血红素加氧酶(hemeoxygenase,HO)催化分解血红素而产生,是继一氧化氮之后发现的另一种具有重要生物学效应的气体分子,广泛参与体内的各种生理和病理过程,在心血管系统、神经系统、消化系统中起非常重要的作用。近年来,其在生殖系统的研究也日益受到重视。在女性生殖系统,HO/CO不仅会影响动情周期、分娩和哺乳行为,而且会抑制受孕子宫肌层的收缩,参与保护作用。而在男性生殖系统,HO/CO能够通过抗炎、抗氧化以及抗凋亡机制保护睾丸免受应激的损伤。这种可诱导的保护性作用将成为研究的新热点。

关键词：一氧化碳血红素加氧酶生殖系统

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无精子症患者与正常人睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

无精子症患者与正常人睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

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中华医学会第四次生殖医学学术年会暨首届中国—东盟生殖医学论坛

作者：池艳熊承良顾宇春华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心专科医院武汉430030 英国伯明翰大学医学院

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鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究

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中华医学杂志 2008年第24期88卷 1673-1675页

作者：熊锦文熊承良李丹陈素华李小兰陶德定武警湖北省总队医院妇产科武汉430071 华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心华中科技大学同济医学院附属同济医院

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠精子凋亡的影响，探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制。方法建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型（n=15），以正常小鼠作为对照（n=15），采用流式细胞术（FCM）与激光扫描共聚焦显微术（L... 详细信息

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠精子凋亡的影响，探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制。方法建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型（n=15），以正常小鼠作为对照（n=15），采用流式细胞术（FCM）与激光扫描共聚焦显微术（LCSM）对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测，同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变。结果MCMV感染第2天起精子凋亡率开始升高，第4天达最高值（39．3±1．0）％，随后逐渐下降（F=362．822，P〈0．05）。而感染第1天的精子线粒体膜电位增加至74．0±1．4，第2天开始下降至63．0±2．2，第4天降至最低40．2±2．3，随后缓慢回升（F=32．257，P〈0．05）。MCMV感染可引起精子线粒体超微结构的损伤，以感染第2～6天为重。结论生殖器官MCMV急性感染可诱导附睾尾部成熟精子的凋亡；精子线粒体主动参与并调控了精子的凋亡过程。

关键词：鼠巨细胞病毒属精子凋亡线粒体

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