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华中科技大学学报（医学版） 2009年第5期38卷 581-584,589页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体... 详细信息

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平。免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况。结果RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达。免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌。结论Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。

关键词：移植排斥反应 Th17细胞白细胞介素17 核孤独受体γt 干扰素-γ

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猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 712-715页

作者：谢林尹注增胡枫王璐朱珉向莹陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检... 详细信息

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度,并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定。采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较。在体外,用3H-TdR摄入法检测人PB-MCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PB-MCs共同培养,连续4d检测人PBMCs的增殖变化。结果采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%。光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征。经Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%,高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09±0.75)%(P<0.01)。并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义。结论采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞。在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用。

关键词：异种移植猪睾丸支持细胞人外周血单个核细胞细胞凋亡细胞增殖

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TGF—β1诱导的调节性T细胞体内输注延长小鼠皮肤移植物存活

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第8期28卷 680-684页

作者：袁劲吴轲何文涛汪峰陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院肾病内科武汉430030 器官移植研究所器官移植教育部/卫生部重点实验室

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应... 详细信息

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应组，经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞）和TGF-β组（经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞，同时加入5．0ng／ml TGF-β1诱导）。利用FACS检测CD4^＋CD25^＋T细胞比例，并用RT—PCR检测Foxp3的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型，并于第0、1、2和3天输注上述细胞，观察皮肤移植物存活时间。术后第9天，取部分受鼠行移植物病理检测，用FACS检测脾脏中TH1、TH2和CD4^＋CD25^＋Treg比例，并用AlamarBlue法检测淋巴细胞增殖能力。结果TGF-β组中CD4^＋CD25^＋T细胞比例高于对照组和MLR组（P〈0．05），且其高表达Foxp3。将培养的细胞输注给受鼠后发现，输注MLR组细胞的受鼠其移植物平均存活时间（mean survival time，MST）为（9．4±1．3）d，低于对照组（P〈0．05）；而输注TGF-β组细胞小鼠MST为（22．8±1．9）d，较对照组和MLR组明显延长（P〈0．05）。病理检测亦显示TGF-β组受鼠移植物结构完整，无明显淋巴细胞浸润。FACS结果显示TGF-β组小鼠体内TH1细胞（CD4^＋TIM-3^＋）比例低于对照组和MLR组（P〈0．05），而TH2细胞（CD4^＋TIM-1^＋）比例则与MLR组类似（P〉0．05），但低于对照组（P〈0．05）；而且TGF-β组中CD4^＋CD25^＋Treg比例明显高于对照组和MLR组（P〈0．05）。用AlamarBlue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示，TGF-β组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制，低于对照组（P〈0．05）。结论TGF-β，可诱导T细胞分化为具有抑制能力的Treg，将诱导后的细胞进行过继输注可使小鼠体内CD4^＋CD25^＋T。比例升高，同时抑制TH1和TH2细胞分化扩增，并使得外周淋巴细胞增殖能力减弱，从而延长小鼠皮肤移植物存活时间。

关键词： TGF—β1 调节性T细胞皮肤移植

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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 708-711,F0003页

作者：徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。

关键词：核转录因子κB启动子双顺反子 p27基因真核表达载体细胞周期

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云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

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中华医学杂志 2006年第21期86卷 1460-1463页

作者：李荣陈刚郭晖王大卫谢琳王树森王婉瑜熊郁良陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030 中国科学院昆明动物研究所毒素室

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给... 详细信息

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg／kg；对照组（n=7）不用Y-CVF。观察移植心的生存时间，移植心停跳后病理学检查排斥类型，免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1：1028～1：2056。对照组移植心存活时间为12．71h±13．94h，实验组移植心存活时间为99．50h±38．72h，与对照组比较差异有统计学意义（t=5．599，P〈0．01）。病理检查结果证实，实验组均未发生急性体液排斥，仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性，C3染色对照组为阳性，而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。

关键词：眼镜蛇毒素心脏移植移植排斥

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移植肺病理学诊断标准及其进展

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器官移植 2022年第1期13卷 19-31页

作者：郭晖华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室国家卫生健康委员会器官移植重点实验室中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

近年来,随着肺移植外科技术和术后管理经验的积累,我国肺移植例数逐步增长。肺移植术后移植肺可出现多种并发症,主要包括由移植肺缺血-再灌注损伤(IRI)等所致的原发性移植肺无功能(PGD)、急性与慢性排斥反应以及移植术后应用免疫抑制剂... 详细信息

近年来,随着肺移植外科技术和术后管理经验的积累,我国肺移植例数逐步增长。肺移植术后移植肺可出现多种并发症,主要包括由移植肺缺血-再灌注损伤(IRI)等所致的原发性移植肺无功能(PGD)、急性与慢性排斥反应以及移植术后应用免疫抑制剂所致机体免疫力下降出现的机会性感染或淋巴组织异常增生等。移植肺并发症的确诊主要依据移植肺活组织检查(活检)。本文对移植肺病理学研究的简史、移植肺活检的主要方法及其病理学处理技术、肺移植术后主要并发症及其活检病理学诊断标准进行阐述,旨在为指导临床对上述并发症采取针对性的治疗方案提供参考。

关键词：慢性阻塞性肺疾病囊性纤维化急性细胞性排斥反应(ACR) 抗体介导的排斥反应(AMR) T细胞介导的排斥反应(TCMR) 经支气管肺活检(TBLB) 经支气管冷冻肺活检(TBCB) 支气管肺泡灌洗闭塞性细支气管炎(OB) 移植相关血管病(TAV)

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抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第2期39卷 197-201页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验章器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移... 详细信息

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水)。ELISA法检测受鼠移植术后第3、6天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6I、FN-γI、L-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。结果①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γI、L-6I、L-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+CD25+Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间。

关键词：心脏移植急性排斥反应白细胞介素6 单克隆抗体

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体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 559-563页

作者：廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/教育部器官移植重点实验室/卫生部器官移植重点实验室

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC... 详细信息

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

关键词：酶联免疫斑点法 B淋巴细胞 HLA抗体美洲商陆丝裂原

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器官移植与疫苗接种

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器官移植 2022年第1期13卷 6-11页

作者：陈松张伟杰华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室国家卫生健康委员会器官移植重点实验室中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

器官移植受者术后需长期服用免疫抑制剂,因此免疫功能低下,是感染的高危人群,且其住院率、危重率和病死率均较高。接种疫苗是目前公认的预防感染的有效方式,器官移植受者可以根据实际情况进行疫苗接种。但器官移植受者对疫苗的敏感性降... 详细信息

器官移植受者术后需长期服用免疫抑制剂,因此免疫功能低下,是感染的高危人群,且其住院率、危重率和病死率均较高。接种疫苗是目前公认的预防感染的有效方式,器官移植受者可以根据实际情况进行疫苗接种。但器官移植受者对疫苗的敏感性降低,其接种疫苗的种类、接种方式和时机一直是临床研究的热点。本文就器官移植受者疫苗接种的一般原则、器官移植受者特定疫苗的接种以及器官移植受者新型冠状病毒疫苗的接种做一简要述评,以期为器官移植受者的疫苗接种提供参考,并特别关注全球新型冠状病毒肺炎疫情大流行的情况下器官移植受者接种新型冠状病毒疫苗的现状。

关键词：器官移植流行性感冒疫苗肺炎球菌疫苗乙型肝炎疫苗甲型肝炎疫苗狂犬病疫苗破伤风疫苗人乳头瘤病毒疫苗新型冠状病毒疫苗

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移植肾T细胞介导的排斥反应的病理学

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器官移植 2021年第2期12卷 134-142页

T细胞介导的排斥反应(TCMR)是器官移植排斥反应的主要效应机制之一,也是最常见的急性排斥反应类型。2019年Banff移植病理学诊断标准(Banff标准)根据免疫损伤病变的特征将TCMR分为急性TCMR(aTCMR)和慢性活动性TCMR(caTCMR)。本文对TCMR... 详细信息

T细胞介导的排斥反应(TCMR)是器官移植排斥反应的主要效应机制之一,也是最常见的急性排斥反应类型。2019年Banff移植病理学诊断标准(Banff标准)根据免疫损伤病变的特征将TCMR分为急性TCMR(aTCMR)和慢性活动性TCMR(caTCMR)。本文对TCMR的基本定义、移植肾Banff标准中TCMR病理学的研究历程和TCMR的基本病变及其诊断分级进行综述,旨在为早期识别、诊断和治疗TCMR提供依据,以预防其进展为caTCMR,进而保障移植肾和受者的长期存活。

关键词： Banff移植病理学诊断标准(Banff标准) T细胞介导的排斥反应(TCMR) 抗体介导的排斥反应(AMR) 慢性移植物血管病(CAV) 慢性移植物损伤指数(CADI) 肾小管萎缩间质纤维化动脉内膜炎

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