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Sertoli细胞对同种异体调节性T细胞/辅助性T细胞17分化平衡的调节作用

华中科技大学学报（医学版） 2014年第6期43卷 626-630,635页

作者：陈莲一谢林湖北省医学会武汉430071 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究Sertoli细胞对同种异体免疫反应过程中调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)平衡的影响。方法体外分离并培养Sertoli细胞、T淋巴细胞和骨髓来源的DC细胞,将Sertoli、DC细胞分别与同种异体T细胞混合培养,光镜及电镜下观察Sert... 详细信息

目的研究Sertoli细胞对同种异体免疫反应过程中调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)平衡的影响。方法体外分离并培养Sertoli细胞、T淋巴细胞和骨髓来源的DC细胞,将Sertoli、DC细胞分别与同种异体T细胞混合培养,光镜及电镜下观察Sertoli细胞形态,采用Western blot检测Sertoli细胞中人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、B7-H1蛋白的表达,收集培养上清液,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测Sertoli细胞培养上清内的转化生长因子(TGF)-β1、IL-17A等细胞因子水平;流式细胞术观察混合培养细胞分化结果。结果成功在体外培养Sertoli细胞;Western blot结果显示,Sertoli细胞与同种异体Nave CD4+T细胞(CD4+CD62L+CD25-)在体外混合培养时,其表面的MHC-Ⅱ类分子和B7-H1分子的表达量增加;ELISA结果显示,与同种异体Nave CD4+T细胞混合培养72h后,培养上清液中的TGF-β1浓度较单纯Sertoli培养组显著升高[(823.10±59.07)pg/mL vs.(174.89±23.51)pg/mL,P<0.01];流式细胞术结果显示,与同种异体Sertoli细胞共同培养的体系内,Nave CD4+T细胞(CD4+CD62L+CD25-)被诱导分化为CD25+Foxp3+Treg细胞的比例显著增加,从<1.0%增长至27.6%;用Sertoli细胞与Treg细胞混合培养上清液孵育DC细胞/Nave CD4+T细胞,可明显减少培养液中IL-17A的浓度,使其从(361.58±80.27)pg/mL降低至(137.54±52.19)pg/mL(P<0.05);同时IL-17A+T细胞亚群百分比也显著降低(27.2%降至17.9%)。结论Sertoli细胞体外培养产生的抗炎细胞因子和免疫抑制细胞因子能诱导Nave CD4+T细胞分化为CD25+Foxp3+Treg细胞,Sertoli细胞可能通过调节同种异体Treg/Th17分化平衡,诱导免疫耐受。

关键词： Sertoli细胞免疫耐受调节性T细胞辅助性T细胞17

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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Galeetin-9（Tim-3L）显著减弱小鼠移植排斥

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 5-10页

作者：何文涛袁劲方泽民汪峰徐逸周鸿敏高英张维娜王璐陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探究Galectin-9（即Tcell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 lig-and，Tim-3L）的真核定位与功能，及其对同种异基因排斥反应的影响。方法PCR扩增Galectin-9片段，插入到pEGFP—N1质粒，转染中国仓鼠卵巢癌细胞系（CHO）行G418筛选，分选增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性细胞。免疫组化检测Galectin-9的表达，Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响，ELISA检测IL-2水平。给予BALB／c→C57BL／6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7d。结果Galectin-9表达于细胞浆，稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生。上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转。Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[（22．7±1．2）d，（7．2±0．4）d）]。结论真核细胞中Galectin．9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫；Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物。

关键词： Tim-3 Galectin-9 免疫抑制小鼠

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免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及其在皮肤移植中的效应

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 252-255页

作者：张鑫陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型,以环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)或雷帕霉素(SRL)为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反... 详细信息

目的探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型,以环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)或雷帕霉素(SRL)为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506对IL-10水平无明显影响;而SRL对MD-1表达及IL-2与IL-10水平均无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论CsA、FK506和MMF能抑制小鼠MD-1的表达,其作用与血清IL-2水平下调有关。在免疫抑制状态下,MD-1表达下调与同种皮肤移植物存活时间延长有关,而其表达上调对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

关键词： MD-1 免疫抑制剂皮肤移植

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肝移植受者围手术期应用替加环素预防感染的效果及低纤维蛋白原血症发生情况

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器官移植 2023年第2期14卷 241-247页

作者：徐静赵圆圆陈知水杨博陈栋魏来华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室国家卫生健康委员会器官移植重点实验室中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肝移植受者围手术期使用替加环素预防感染的效果及低纤维蛋白原血症发生情况。方法回顾性分析40例使用替加环素进行预防感染的肝移植受者的临床资料,分析受者感染事件和供者来源感染事件发生情况;分析替加环素治疗时、结束时及... 详细信息

目的探讨肝移植受者围手术期使用替加环素预防感染的效果及低纤维蛋白原血症发生情况。方法回顾性分析40例使用替加环素进行预防感染的肝移植受者的临床资料,分析受者感染事件和供者来源感染事件发生情况;分析替加环素治疗时、结束时及治疗结束后(7±2)d受者临床指标变化情况;总结低纤维蛋白原血症的发生及治疗情况。结果40例肝移植受者中,2例受者发生感染,分别为黑曲霉和巨细胞病毒感染,均不属于替加环素抗菌谱所覆盖的范围,调整抗感染方案后感染情况控制良好。9例供肝相关培养阳性,但均未发展为供者来源性感染事件。40例受者均于术后2周左右肝功能恢复良好出院,其中6例于术后2~4 d出现低纤维蛋白原血症伴凝血功能障碍,而转氨酶、胆红素、感染相关指标术后逐步下降,白蛋白水平稳定,予以补充人纤维蛋白原及凝血酶原复合物,凝血功能好转,但纤维蛋白原水平持续下降。停用替加环素后,纤维蛋白原水平逐渐恢复至正常,考虑可能为替加环素相关药物不良反应。结论肝移植受者围手术期使用包含替加环素在内的预防感染方案可以降低敏感细菌导致的感染发生率,但药物使用期间需密切关注低纤维蛋白原血症的发生。

关键词：肝移植感染替加环素低纤维蛋白原血症药物不良反应多重耐药菌供者来源性感染凝血功能障碍

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小鼠MD-1表达的影响因素及其在移植排斥反应中的作用

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中国免疫学杂志 2005年第6期21卷 444-448页

作者：张鑫陈忠华(指导) 华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留... 详细信息

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留取标本检测脾细胞MD-1表达水平和增殖反应强度、血清IL-2和IL-10水平以及皮肤移植物组织学改变,并记录移植物存活时间。结果:CsA、MMF和AS-ODNs处理能减少脾脏MD-1表达阳性细胞数、降低脾细胞增殖反应强度、下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506与CsA和MMF处理结果的差异在于其对血清IL-10水平无明显影响;SRL处理仅能减低脾细胞增殖反应强度和延长皮肤移植物MST,对MD-1表达及IL-2与IL-10分泌无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论:CsA、FK506、MMF和AS-ODNs处理均能有效抑制小鼠MD-1的表达。免疫抑制剂干预MD-1表达的作用与血清IL-2水平下调有关。MD-1通过影响淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、IL-10水平,在移植排斥反应中发挥重要作用。

关键词： MD-1 免疫抑制剂反义脱氧寡核苷酸

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儿童肾移植术后供者特异性抗体的产生及其影响

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器官移植 2022年第3期13卷 303-306页

作者：陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室国家卫生健康委员会器官移植重点实验室中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

近年来,我国儿童肾移植发展迅速,但仍缺乏足够的有关移植肾长期存活方面的临床数据。成人肾移植术后新生供者特异性抗体(dnDSA)的产生及其介导的慢性排斥反应是影响移植肾长期存活的重要危险因素,但儿童的免疫系统发育尚未完全,其术后dn... 详细信息

近年来,我国儿童肾移植发展迅速,但仍缺乏足够的有关移植肾长期存活方面的临床数据。成人肾移植术后新生供者特异性抗体(dnDSA)的产生及其介导的慢性排斥反应是影响移植肾长期存活的重要危险因素,但儿童的免疫系统发育尚未完全,其术后dnDSA的产生及其对移植肾和受者的影响可能与成人有所不同。因此,本文就儿童免疫系统的特点、儿童肾移植术后供者特异性抗体(DSA)的产生及影响、儿童肾移植术后DSA产生的危险因素进行总结,并对预防策略提出建议,旨在为提高儿童肾移植术后移植肾的长期存活提供参考,促进我国儿童肾移植的发展。

关键词：肾移植儿童免疫系统供者特异性抗体抗体介导的排斥反应人类白细胞抗原移植肾失功

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抗白细胞介素6单克隆抗体抑制小鼠心脏移植急性排斥反应及其机制

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第3期43卷 275-280页

作者：雷钧陈知水方路刘天德袁荣发王军邵江华南昌大学第二附属医院普通外科南昌330006 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、器官移植教育部重点实验室、器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6monoclonal antibody,anti-IL-6mAb)对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植模... 详细信息

目的观察抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6monoclonal antibody,anti-IL-6mAb)对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植模型组、移植对照组(注射rat-IgG)和移植治疗组(注射anti-IL-17mAb或anti-IL-6mAb)。观察各组移植心脏存活时间并检测病理组织学改变;Real-time PCR检测各组移植心脏中细胞因子IL-17、干扰素-γ(IFN-γ)及Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测各组受鼠脾脏CD4+、CD8+T细胞中IL-17、IFN-γ的表达水平。结果①anti-IL-6mAb、anti-IL-17mAb输注均可显著抑制小鼠急性排斥反应的发生,移植心脏存活时间分别延长至(22.0±2.3)d、(13.0±1.8)d,anti-IL-6mAb组抑制排斥反应发生的效果更加显著。组织病理学结果显示anti-IL-6mAb组排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);②anti-IL-6mAb组移植心脏中IL-17、IFN-γ和RORγt mRNA的转录水平较rat-IgG对照组及移植模型组显著下降,anti-IL-17mAb输注可部分下调IFN-γmRNA的转录水平;③anti-IL-6mAb组受鼠脾脏CD4+及CD8+T细胞中IFN-γ+的比例均有不同程度的下降,且CD4+IFN-γ+T细胞较CD8+IFN-γ+T细胞下降更为明显,同时CD4+IL-17+T(Th17)细胞的比例在anti-IL-6mAb组中亦明显下降。结论 anti-IL-6mAb可有效抑制急性排斥反应小鼠体内Th17和Th1细胞的活化,并延长同种异体心脏移植物的存活时间。

关键词：急性排斥反应心脏移植抗白细胞介素6单克隆抗体白细胞介素-17 RORyt 干扰素-γ

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抗IL-2受体γ链抗体抑制T细胞表达survivin的研究

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 20-22页

作者：陈必成唐莉昌盛张鑫郭晖陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室/国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨体外封闭IL-27链抑制T细胞表达survivin的机制。方法分离Balb／C、C57BL／6小鼠脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养（MLR）及conA刺激试验。通过免疫细胞化学染色方法检测survivin表达及其规律。不同天数内加入抗γ公共链抗体，... 详细信息

目的探讨体外封闭IL-27链抑制T细胞表达survivin的机制。方法分离Balb／C、C57BL／6小鼠脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养（MLR）及conA刺激试验。通过免疫细胞化学染色方法检测survivin表达及其规律。不同天数内加入抗γ公共链抗体，流式细胞术检测细胞凋亡（PEcy5-CD3，FTTE—Annexin-V）、细胞周期（PI）及CD25、survivin表达。结果同种抗原及ConA刺激后脾细胞可检测到survivin、CD25表达。活化淋巴细胞表达survivin，加抗γ公共链抗体后，不能检测到survivin的表达，而CD3^＋ Annexin-V^＋细胞数增加，M期细胞数下降，凋亡细胞（前G1期）增加；但在MLR后第1～2天，抗γ公共链抗体加入并不能使凋亡细胞增加。结论抗IL-2γ链抗体可诱导活化的T细胞凋亡，间接抑制活化的T细胞的survivin表达。

关键词： γ公共链凋亡 Survivin T细胞

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老龄亲属活体供肾移植疗效观察

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肾脏病与透析肾移植杂志 2009年第4期18卷 338-342页

作者：孟凡迎陈知水陈孝平吴敏杜敦峰魏来蒋继贫曾凡军张伟杰林正斌周平明长生宫念樵刘敦贵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的：探讨老龄亲属活体供肾移植的疗效。方法：我院自2006年1月至2006年12月共施行亲属活体肾移植74例,收集该74例活体供肾移植的临床资料,按供者年龄大小分为2组：老龄组（≥55岁）11例,低龄组（〈55岁）63例。分别对两组受体术后不... 详细信息

目的：探讨老龄亲属活体供肾移植的疗效。方法：我院自2006年1月至2006年12月共施行亲属活体肾移植74例,收集该74例活体供肾移植的临床资料,按供者年龄大小分为2组：老龄组（≥55岁）11例,低龄组（〈55岁）63例。分别对两组受体术后不同时间点临床资料和两组供体术前术后的临床资料进行分析比较,探讨老龄活体供肾移植的疗效。结果：（1）受者情况：老龄组有1例术后发生移植肾功能延迟恢复,低龄组有7例,组间比较无差别（P〉0.05）,两组受者移植术后肾功能恢复情况比较无差异,1年人/肾存活率均为100%。供者情况：两组供者术后一周血肌酐均明显升高,老龄组术前血肌酐（85.6±13.7）μmol/L,术后1周升高至（106.4±15.6）μmol/L,而低龄供者术前血肌酐（73.7±6.8）μmol/L,术后1周升高至（101.8±13.1）μmol/L。但术后1年随访,两组供者血肌酐恢复术前水平。结论：在严格供体筛查的前提下,老龄供肾（5565岁）对供者是安全的;而对受者,接受老龄供肾术后近期肾功能恢复情况良好,远期效果有待进一步观察。

关键词：肾移植老龄供肾疗效

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