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反义脱氧寡核苷酸静脉输注抑制小鼠MD-1表达延长皮肤移植物存活时间的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 733-736页

作者：张鑫陈必成昌盛周鸿敏杜敦峰袁劲陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的静脉输注反义脱氧寡核苷酸(简称反义核酸,AS-ODN)抑制小鼠MD-1表达,并初步探讨MD-1用于排斥反应诊断的前景。方法实验组(组1和组2)和阳性对照组(组3)行C57BL/6-BALB/c同种皮肤移植,阴性对照组(组4)行BALB/c-BALB/c同基因皮肤移植后... 详细信息

目的静脉输注反义脱氧寡核苷酸(简称反义核酸,AS-ODN)抑制小鼠MD-1表达,并初步探讨MD-1用于排斥反应诊断的前景。方法实验组(组1和组2)和阳性对照组(组3)行C57BL/6-BALB/c同种皮肤移植,阴性对照组(组4)行BALB/c-BALB/c同基因皮肤移植后,分别静脉输注小鼠MD-1AS-ODN(组1)、随机序列脱氧寡核苷酸(组2)或生理盐水(组3和组4)。于术后第11天留样检测脾细胞MD-1表达水平(FACS)、脾细胞增殖反应强度(AlamarBlue还原率)、血清IL-2和IL-10水平(ELISA)以及皮肤移植物组织学改变(组织病理学检查),并记录移植物存活时间。结果静脉输注小鼠MD-1AS-ODN能明显减少BALB/c小鼠脾细胞中MD-1阳性细胞百分数,降低脾细胞对特异性和非特异性刺激的增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,减少移植物局部淋巴细胞浸润,并显著延长同种皮肤移植物存活时间。结论静脉输注MD-1AS-ODN特异性抑制小鼠MD-1表达可显著延长皮肤移植物的存活时间。MD-1表达水平对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

关键词： MD-1 反义脱氧寡核苷酸细胞因子增殖反应存活时间反义脱氧寡核苷酸移植物存活时间皮肤移植物小鼠脾细胞 MD-1 静脉输注显著延长非特异性刺激脾细胞增殖

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小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

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中华器官移植杂志 2008年第2期29卷 69-72页

作者：朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofecta... 详细信息

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。

关键词： RNA干扰半乳糖苷酶类内皮细胞

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α1，3-半乳糖基转移酶基因沉默对NK细胞介导的异种细胞毒作用的影响

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中华器官移植杂志 2008年第8期29卷 460-463页

作者：朱珉祁洪刚曹荣华王璐黄亚冰刘斌林正斌陈知水陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错... 详细信息

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错配组：PED转染了错配的SiRNA；空转染组：PED未转染SiRNA。观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK92混和培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果PED转染后48h，转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量（个）分别为262±26、275±24和252±23；流动状态下分别为132±12、125±15和110±20，无论是静止还是流动状态下，各组PED对NK92的粘附能力的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。无论PED是否被活化，在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但杀伤率与效靶比呈正相关。NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌，其分泌水平[（366．9±28．7）ng／L]较其自发分泌水平[（60．1±6．4）ng／L]增加了5倍，在共孵育后12h分泌值最高，但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论利用RNA干扰技术下调PED上的α1，3-半乳糖残基（reGal）的表达，未引起NK92和PED相互作用的明显改变。α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点，其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。

关键词： RNA干扰杀伤细胞,天然内皮细胞半乳糖转移酶类

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免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及其在皮肤移植中的效应

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 252-255页

作者：张鑫陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型,以环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)或雷帕霉素(SRL)为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反... 详细信息

目的探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型,以环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)或雷帕霉素(SRL)为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506对IL-10水平无明显影响;而SRL对MD-1表达及IL-2与IL-10水平均无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论CsA、FK506和MMF能抑制小鼠MD-1的表达,其作用与血清IL-2水平下调有关。在免疫抑制状态下,MD-1表达下调与同种皮肤移植物存活时间延长有关,而其表达上调对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

关键词： MD-1 免疫抑制剂皮肤移植

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小鼠MD-1表达的影响因素及其在移植排斥反应中的作用

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中国免疫学杂志 2005年第6期21卷 444-448页

作者：张鑫陈忠华(指导) 华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留... 详细信息

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留取标本检测脾细胞MD-1表达水平和增殖反应强度、血清IL-2和IL-10水平以及皮肤移植物组织学改变,并记录移植物存活时间。结果:CsA、MMF和AS-ODNs处理能减少脾脏MD-1表达阳性细胞数、降低脾细胞增殖反应强度、下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506与CsA和MMF处理结果的差异在于其对血清IL-10水平无明显影响;SRL处理仅能减低脾细胞增殖反应强度和延长皮肤移植物MST,对MD-1表达及IL-2与IL-10分泌无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论:CsA、FK506、MMF和AS-ODNs处理均能有效抑制小鼠MD-1的表达。免疫抑制剂干预MD-1表达的作用与血清IL-2水平下调有关。MD-1通过影响淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、IL-10水平,在移植排斥反应中发挥重要作用。

关键词： MD-1 免疫抑制剂反义脱氧寡核苷酸

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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抗IL-2受体γ链抗体抑制T细胞表达survivin的研究

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 20-22页

作者：陈必成唐莉昌盛张鑫郭晖陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室/国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨体外封闭IL-27链抑制T细胞表达survivin的机制。方法分离Balb／C、C57BL／6小鼠脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养（MLR）及conA刺激试验。通过免疫细胞化学染色方法检测survivin表达及其规律。不同天数内加入抗γ公共链抗体，... 详细信息

目的探讨体外封闭IL-27链抑制T细胞表达survivin的机制。方法分离Balb／C、C57BL／6小鼠脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养（MLR）及conA刺激试验。通过免疫细胞化学染色方法检测survivin表达及其规律。不同天数内加入抗γ公共链抗体，流式细胞术检测细胞凋亡（PEcy5-CD3，FTTE—Annexin-V）、细胞周期（PI）及CD25、survivin表达。结果同种抗原及ConA刺激后脾细胞可检测到survivin、CD25表达。活化淋巴细胞表达survivin，加抗γ公共链抗体后，不能检测到survivin的表达，而CD3^＋ Annexin-V^＋细胞数增加，M期细胞数下降，凋亡细胞（前G1期）增加；但在MLR后第1～2天，抗γ公共链抗体加入并不能使凋亡细胞增加。结论抗IL-2γ链抗体可诱导活化的T细胞凋亡，间接抑制活化的T细胞的survivin表达。

关键词： γ公共链凋亡 Survivin T细胞

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雌激素对天然杀伤细胞的作用

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现代免疫学 2006年第3期26卷 247-250页

作者：闫冀焕周鸿敏王雪琼周绍棠陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

为探讨雌激素对NK细胞的作用,在不同时间把不同剂量的雌激素加入培养体系中,分析雌激素对无和有外来刺激原刺激NK细胞的影响。结果显示培养开始加入生理剂量、低于生理剂量和超生理剂量的雌激素均可明显抑制NK细胞的增殖;培养48 h后加... 详细信息

为探讨雌激素对NK细胞的作用,在不同时间把不同剂量的雌激素加入培养体系中,分析雌激素对无和有外来刺激原刺激NK细胞的影响。结果显示培养开始加入生理剂量、低于生理剂量和超生理剂量的雌激素均可明显抑制NK细胞的增殖;培养48 h后加入相同剂量的雌激素,生理剂量和低于生理剂量雌激素仍可明显抑制NK细胞的增殖,超生理剂量雌激素非但不能抑制反而使NK细胞的数量增加。

关键词：雌激素天然杀伤细胞

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胰肾联合移植53例术后长期存活的临床观察

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中华器官移植杂志 2012年第9期33卷 523-527页

作者：明长生罗鲜樟宫念樵曾凡军张伟杰陈知水陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室武汉430030

目的分析53例胰肾联合移植长期存活情况及其影响因素。方法回顾性分析2000年1月至2009年6月间施行的53例胰肾联合移植受者和移植物长期存活情况，分析受者死亡原因和移植物功能丧失原因。结果3、5和8年受者存活率分别为90．1％、89．1％... 详细信息

目的分析53例胰肾联合移植长期存活情况及其影响因素。方法回顾性分析2000年1月至2009年6月间施行的53例胰肾联合移植受者和移植物长期存活情况，分析受者死亡原因和移植物功能丧失原因。结果3、5和8年受者存活率分别为90．1％、89．1％和80．0%，3、5和8年移植胰腺存活率分别为84．9％、84．S％o和60．0％，3、5和8年移植肾存活率分别为83．O％、82．6％和53．3％。受者死亡原因分别为感染（4例）、移植肾功能丧失（2例）、心血管急症（1例）和脑卒中（1例）。移植胰腺功能丧失的主要原因为带功能受者死亡、排斥反应和外科并发症。移植肾功能丧失的主要原因为排斥反应和带功能受者死亡。结论胰肾联合移植治疗终末期糖尿病肾病远期效果良好，感染、排斥反应和外科并发症是受者死亡和移植物功能丧失的主要原因。

关键词：糖尿病胰腺移植肾移植排斥反应长期存活

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他克莫司在胰、肾同期联合移植中的应用体会

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中华器官移植杂志 2007年第9期28卷 545-549页

作者：明长生曾凡军张伟杰陈知水陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室武汉430030

目的回顾性总结他克莫司(FK506)在胰、肾同期联合移植(SPK)中的应用经验。方法37例SPK受者,术后早期采用抗淋巴细胞球蛋白(最初3例)或抗白细胞介素2受体单克隆抗体(34例)诱导治疗,采用FK506、霉酚酸酯(MMF)和皮质激素维持治疗。FK506于... 详细信息

目的回顾性总结他克莫司(FK506)在胰、肾同期联合移植(SPK)中的应用经验。方法37例SPK受者,术后早期采用抗淋巴细胞球蛋白(最初3例)或抗白细胞介素2受体单克隆抗体(34例)诱导治疗,采用FK506、霉酚酸酯(MMF)和皮质激素维持治疗。FK506于术后第3～4天开始口服,起始剂量为0.05～0.08 mg·kg^(-1)·d^(-1),3～5 d后根据血药浓度调整用量,血FK506的浓度谷值,术后1个月内维持在10～12μg/L,2～3个月为6～10μg/L,3个月后为4～8μg/L。结果37例术后均停用胰岛素,仅1例(2.7%,1/37)术后6个月死于急性心肌梗死,受者、移植胰和移植肾1年存活率均为97%。空腹血糖恢复正常的时间为(13.4±8.9)d。28例1型糖尿病患者术后空腹血糖恢复正常的时间为(9.7±3.2)d,9例2型糖尿病患者术后空腹血糖恢复正常的时间显著延长,为(23.0±11.7)d。1年内急性排斥反应发生率为13.5%(5/37),其中4例为单纯移植肾排斥反应,1例同时累及移植胰腺和肾脏;2例经激素冲击治疗后逆转,1例经激素和抗淋巴细胞球蛋白治疗逆转,另2例经激素冲击治疗后,血肌酐一度下降,但2～3个月后因再次发生排斥反应,血肌酐逐渐上升,恢复血液透析,但移植胰功能良好,其后行再次肾移植。结论以FK506为基础的免疫抑制能安全、有效地预防SPK后的排斥反应。

关键词：胰腺肾移植他克莫司移植物排斥

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