检索结果-内蒙古大学图书馆

Blimp1-短发夹RNA基因转染对骨髓源性树突状细胞前体细胞分化的影响

中华器官移植杂志 2013年第12期34卷 749-753页

作者：李幸戴晓敏姜汉英周平陈知水宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点实验室器官移植教育部重点实验室武汉430030

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒... 详细信息

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中。实验分为3组：空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体，空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预，实验组培养体系中进行lenti—Blimp1-短发夹RNA干预。转染1周内观察转染效率，观察细胞的形态变化，记录细胞的生长曲线；于培养第4、5天收集细胞，实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况；检测培养第8天CD11c^＋、CD86^＋及主要组织相容性复合物Ⅱ（MHC-Ⅱ）＋细胞的百分率。结果病毒转染后第3天细胞出现荧光，其后荧光持续存在；培养过程中出现典型DC形态，接受病毒转染的细胞有形态受损表现。空白对照组细胞在培养的前3d内呈对数增长，第4天细胞数目达到峰值，为（2．45±0．26）×10^6／孔，第8天为（2．27±0．19）×10^6／孔；空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞，细胞数目稳定在（1．69±0．39）×10^6／孔。空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76％和1％以及105％和74％。在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c^＋细胞分别占（69．2±5．0）％、（68．6±5．9）％和（72．8±5．5）％（P〉0．05）；CD86^＋细胞分别占（51．1±4．9）％、（49．5±4．3）％和（50．2±6．0）％（P〉0．05）；MHC-Ⅱ^＋细胞分别占（56．3±7．3）％、（69．4±4．5）％和（46．5±5．7）％，3组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段；Blimp1基因的下调不影响DC前体细胞的定向分化，但能够抑制DC的成熟。

关键词：树突细胞慢病毒载体小鼠

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TGF—β1诱导的调节性T细胞体内输注延长小鼠皮肤移植物存活

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第8期28卷 680-684页

作者：袁劲吴轲何文涛汪峰陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院肾病内科武汉430030 器官移植研究所器官移植教育部/卫生部重点实验室

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应... 详细信息

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应组，经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞）和TGF-β组（经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞，同时加入5．0ng／ml TGF-β1诱导）。利用FACS检测CD4^＋CD25^＋T细胞比例，并用RT—PCR检测Foxp3的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型，并于第0、1、2和3天输注上述细胞，观察皮肤移植物存活时间。术后第9天，取部分受鼠行移植物病理检测，用FACS检测脾脏中TH1、TH2和CD4^＋CD25^＋Treg比例，并用AlamarBlue法检测淋巴细胞增殖能力。结果TGF-β组中CD4^＋CD25^＋T细胞比例高于对照组和MLR组（P〈0．05），且其高表达Foxp3。将培养的细胞输注给受鼠后发现，输注MLR组细胞的受鼠其移植物平均存活时间（mean survival time，MST）为（9．4±1．3）d，低于对照组（P〈0．05）；而输注TGF-β组细胞小鼠MST为（22．8±1．9）d，较对照组和MLR组明显延长（P〈0．05）。病理检测亦显示TGF-β组受鼠移植物结构完整，无明显淋巴细胞浸润。FACS结果显示TGF-β组小鼠体内TH1细胞（CD4^＋TIM-3^＋）比例低于对照组和MLR组（P〈0．05），而TH2细胞（CD4^＋TIM-1^＋）比例则与MLR组类似（P〉0．05），但低于对照组（P〈0．05）；而且TGF-β组中CD4^＋CD25^＋Treg比例明显高于对照组和MLR组（P〈0．05）。用AlamarBlue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示，TGF-β组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制，低于对照组（P〈0．05）。结论TGF-β，可诱导T细胞分化为具有抑制能力的Treg，将诱导后的细胞进行过继输注可使小鼠体内CD4^＋CD25^＋T。比例升高，同时抑制TH1和TH2细胞分化扩增，并使得外周淋巴细胞增殖能力减弱，从而延长小鼠皮肤移植物存活时间。

关键词： TGF—β1 调节性T细胞皮肤移植

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供心过表达微小RNA-499减轻心脏缺血再灌注损伤的研究

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中华实验外科杂志 2014年第10期31卷 2217-2219,F0004页

作者：张玄黄霞栾宙王平良陈知水杨军华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察供心过表达微小RNA-499 （miR-499）对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用聚合酶链反应（PCR）行miR-499转基因小鼠鉴定.分别获取野生型C57BL/6小鼠（WT）和同系（C57BL/6背景）miR-499转基因小鼠（Tg）来源的供心,均置于... 详细信息

目的观察供心过表达微小RNA-499 （miR-499）对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用聚合酶链反应（PCR）行miR-499转基因小鼠鉴定.分别获取野生型C57BL/6小鼠（WT）和同系（C57BL/6背景）miR-499转基因小鼠（Tg）来源的供心,均置于4℃生理盐水中保存16h,检测保存液中心肌酶谱：肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的释放量.实验分为WT供心组和Tg供心组,建立同系小鼠腹部异位心脏移植模型,通过视诊和触诊观察不同小鼠供心经过冷保存,移植给相同受体后心功能的恢复,并于移植后24h获取供心,行苏木素-伊红（HE）染色,观察移植心脏组织病理学改变.结果 PCR结果显示miR-499转基因小鼠能检测到miR-499基因及相关载体片段,在图中呈现阳性条带;WT小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为（5 043.0±523.8） U/L和（1 068.0±150.0）U/L,Tg小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为（3 667.0±194.7） U/L和（684.0±19.1） U/L,Tg小鼠心脏在冷缺血过程中,两种心肌酶谱的释放值均明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.移植后相同时间点观测结果显示,WT小鼠来源心脏的临床功能评分明显低于Tg小鼠,15 min时的平均评分分别为0.9分和2.3分,24 h的平均评分分别为2.1分和3.4分（P＜0.05）.移植后24 h,WT小鼠来源供心有大量炎性细胞浸润并伴有心肌细胞坏死,而Tg小鼠供心的炎性细胞浸润和心肌细胞坏死较少（P＜0.05）.结论供心过表达miR-499能减轻心脏在冷缺血和热灌注过程中造成的炎性损伤和心肌细胞凋亡,有利于再灌注后心功能的恢复,在心脏移植过程中具有保护作用.

关键词：微小RNA-499 缺血再灌注损伤心脏移植

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基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子在移植肝慢性排斥反应中的表达

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中华器官移植杂志 2006年第7期27卷 441-442页

作者：聂明张伟杰张成德徐崇松华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质(ECM)的酶,它在组织纤维化、肿瘤侵袭、缺血-再灌注损伤及器官移植后慢性移植物功能丧失中的作用,近年日益引起人们的重视,成为新的研究热点.迄今有关基质金属蛋白酶对肾移植后慢性排斥反应的影响... 详细信息

基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质(ECM)的酶,它在组织纤维化、肿瘤侵袭、缺血-再灌注损伤及器官移植后慢性移植物功能丧失中的作用,近年日益引起人们的重视,成为新的研究热点.迄今有关基质金属蛋白酶对肾移植后慢性排斥反应的影响以及在肝纤维化中的作用的报道较多,但它在肝移植后慢性排斥反应中的作用尚不明了.为此,我们以正常肝组织、发生肝硬化的肝组织、移植后发生慢性排斥反应的肝组织为观察对象,应用免疫组化的方法,观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制因子(TIMP-2)在肝组织中的表达,以期探讨其在肝移植慢性排斥反应中可能起到的作用。

关键词：基质金属蛋白酶-2 慢性排斥反应组织抑制因子移植肝细胞外基质(ECM) 正常肝组织缺血-再灌注损伤组织纤维化慢性移植物移植后

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IL-17参与小鼠心脏移植排斥反应的实验研究

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第5期38卷 581-584,589页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体... 详细信息

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平。免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况。结果RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达。免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌。结论Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。

关键词：移植排斥反应 Th17细胞白细胞介素17 核孤独受体γt 干扰素-γ

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猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 712-715页

作者：谢林尹注增胡枫王璐朱珉向莹陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检... 详细信息

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度,并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定。采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较。在体外,用3H-TdR摄入法检测人PB-MCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PB-MCs共同培养,连续4d检测人PBMCs的增殖变化。结果采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%。光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征。经Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%,高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09±0.75)%(P<0.01)。并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义。结论采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞。在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用。

关键词：异种移植猪睾丸支持细胞人外周血单个核细胞细胞凋亡细胞增殖

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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 708-711,F0003页

作者：徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。

关键词：核转录因子κB启动子双顺反子 p27基因真核表达载体细胞周期

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肝癌患者肝移植术后早期激素撤离对肿瘤复发的影响

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中华器官移植杂志 2006年第3期27卷 156-159页

作者：陈知水何凡曾凡军明长生蒋继贫杜敦峰刘斌张伟杰刘敦贵陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨肝癌患者肝移植术后激素撤离对肿瘤复发的影响。方法对54例中、晚期原发性肝癌患者施行了肝移植,术后根据3个月内是否撤离激素分为激素撤离组(28例)和激素维持组(26例)。比较两组间排斥反应发生率、半年及1年的肿瘤复发率、1年... 详细信息

目的探讨肝癌患者肝移植术后激素撤离对肿瘤复发的影响。方法对54例中、晚期原发性肝癌患者施行了肝移植,术后根据3个月内是否撤离激素分为激素撤离组(28例)和激素维持组(26例)。比较两组间排斥反应发生率、半年及1年的肿瘤复发率、1年存活率、血他克莫司(FK506)浓度及生化指标的平均值,运用统计学方法分析两组间差异。结果激素撤离组和激素维持组排斥反应发生率、半年肿瘤复发率、1年存活率相比,差异无统计学意义;激素维持组1年肿瘤复发率明显高于激素撤离组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后半年,两组FK506浓度的差异无统计学意义。术后1周及术后半年,两组丙氨酸转氨酶、胆红素总量及肌酐分别相比,差异均无统计学意义。术后半年,两组胆固醇总量、中餐前血糖水平相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌患者肝移植术后3个月内撤离激素是安全的,并不增加排斥反应的发生率,也不需要增加其它免疫抑制剂的用量,可明显降低肿瘤复发率,提高患者的长期存活率。

关键词：肝移植肿瘤复发,局部激素肝肿瘤

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云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

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中华医学杂志 2006年第21期86卷 1460-1463页

作者：李荣陈刚郭晖王大卫谢琳王树森王婉瑜熊郁良陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030 中国科学院昆明动物研究所毒素室

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给... 详细信息

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg／kg；对照组（n=7）不用Y-CVF。观察移植心的生存时间，移植心停跳后病理学检查排斥类型，免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1：1028～1：2056。对照组移植心存活时间为12．71h±13．94h，实验组移植心存活时间为99．50h±38．72h，与对照组比较差异有统计学意义（t=5．599，P〈0．01）。病理检查结果证实，实验组均未发生急性体液排斥，仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性，C3染色对照组为阳性，而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。

关键词：眼镜蛇毒素心脏移植移植排斥

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体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 559-563页

作者：廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/教育部器官移植重点实验室/卫生部器官移植重点实验室

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC... 详细信息

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

关键词：酶联免疫斑点法 B淋巴细胞 HLA抗体美洲商陆丝裂原

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