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可溶性组织相容性抗原-G1抑制人自然杀伤细胞释放穿孔素颗粒酶介导异种排斥反应

医学研究生学报 2006年第7期19卷 579-582,i0009页

作者：王树森房崇云曾梦华谢林李荣王璐陈松吴雄文陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院免疫学系湖北武汉430030

目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、... 详细信息

目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)技术分别在基因水平和蛋白水平检测sHLA-G1的表达;以人类NK细胞系(NK92)为效应细胞,猪内皮细胞系PED为靶细胞,用β-己糖氨酶释放实验检测sHLA-G1抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶;单四唑(MTT)法检测sHLA-G1抑制NK细胞的杀伤活性。结果:与未加入sHLA-G1的对照组相比,NK92释放的β-己糖氨酶显著减少(P<0.05),且对sHLA-G1组PED的杀伤效率均有明显降低(P<0.01)。结论:sHLA-G1可通过抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶以减轻NK92对PED的杀伤作用。

关键词：可溶性组织相容性抗原-G1 自然杀伤细胞穿孔素颗粒酶移植

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RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用

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中华医学杂志 2005年第16期85卷 1133-1136页

作者：朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi... 详细信息

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果　SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论　PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。

关键词： RNA干扰补体介导流式细胞学检查猪半乳糖转移酶 RNAi 平均荧光强度 PED 细胞毒作用内皮细胞系 SiRNA 抗原表位 GT基因释放实验基因沉默异种移植表达量人血清转染小分子异构体统计学 Gal 溶解率靶细胞相比

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反义脱氧寡核苷酸静脉输注抑制小鼠MD-1表达延长皮肤移植物存活时间的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 733-736页

作者：张鑫陈必成昌盛周鸿敏杜敦峰袁劲陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所国家教育部器官移植重点实验室国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的静脉输注反义脱氧寡核苷酸(简称反义核酸,AS-ODN)抑制小鼠MD-1表达,并初步探讨MD-1用于排斥反应诊断的前景。方法实验组(组1和组2)和阳性对照组(组3)行C57BL/6-BALB/c同种皮肤移植,阴性对照组(组4)行BALB/c-BALB/c同基因皮肤移植后... 详细信息

目的静脉输注反义脱氧寡核苷酸(简称反义核酸,AS-ODN)抑制小鼠MD-1表达,并初步探讨MD-1用于排斥反应诊断的前景。方法实验组(组1和组2)和阳性对照组(组3)行C57BL/6-BALB/c同种皮肤移植,阴性对照组(组4)行BALB/c-BALB/c同基因皮肤移植后,分别静脉输注小鼠MD-1AS-ODN(组1)、随机序列脱氧寡核苷酸(组2)或生理盐水(组3和组4)。于术后第11天留样检测脾细胞MD-1表达水平(FACS)、脾细胞增殖反应强度(AlamarBlue还原率)、血清IL-2和IL-10水平(ELISA)以及皮肤移植物组织学改变(组织病理学检查),并记录移植物存活时间。结果静脉输注小鼠MD-1AS-ODN能明显减少BALB/c小鼠脾细胞中MD-1阳性细胞百分数,降低脾细胞对特异性和非特异性刺激的增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,减少移植物局部淋巴细胞浸润,并显著延长同种皮肤移植物存活时间。结论静脉输注MD-1AS-ODN特异性抑制小鼠MD-1表达可显著延长皮肤移植物的存活时间。MD-1表达水平对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

关键词： MD-1 反义脱氧寡核苷酸细胞因子增殖反应存活时间反义脱氧寡核苷酸移植物存活时间皮肤移植物小鼠脾细胞 MD-1 静脉输注显著延长非特异性刺激脾细胞增殖

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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胰、肾联合移植术式的选择

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中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 186-188页

作者：明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

由于胰腺外分泌液的引流方式和移植胰腺排斥反应难以诊断的特殊性,胰、肾联合移植的总数和效果都远远落后于其它器官移植.直到最近十年,胰、肾联合移植的手术方式才趋向定型,成为治疗1型糖尿病合并尿毒症的最佳选择.在我国,胰、肾联合... 详细信息

由于胰腺外分泌液的引流方式和移植胰腺排斥反应难以诊断的特殊性,胰、肾联合移植的总数和效果都远远落后于其它器官移植.直到最近十年,胰、肾联合移植的手术方式才趋向定型,成为治疗1型糖尿病合并尿毒症的最佳选择.在我国,胰、肾联合移植的经验积累十分有限,手术方式尚无统一标准,多数中心仅仅实施单一术式.因此,本文结合我们的经验,对胰腺与胰、肾联合移植手术选择的有关问适题作一综述.

关键词：联合移植术式诊断治疗手术方式引流方式胰腺外分泌总数定型趋向

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小鼠CD4^+CD25^+T细胞的分离、鉴定和体外功能的检测

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 92-95,99页

作者：周洁袁劲周鸿敏杜敦峰陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院同济器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用... 详细信息

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能。结果　MACS分选法分选出的CD4 + CD2 5 + T细胞活性>97% ,纯度>95 % ;此方法获得的CD4 + CD2 5 + T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4 + CD2 5 -T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性。结论　MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4 + CD2 5 + T细胞,且不影响细胞活力。CD4 + CD2 5 + T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞免疫磁性分离 AlamarBlue 免疫无能免疫抑制

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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

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肝胰十二指肠器官簇移植(附一例报道)

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中华器官移植杂志 2005年第6期26卷 325-328页

作者：陈知水魏来刘敦贵杜敦峰明长生曾凡军张伟杰林正斌蒋继贫陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常... 详细信息

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常,未应用胰岛素维持;术后1周肝功能恢复正常。患者目前已存活5个月,肝脏和胰腺功能均正常,未发生排斥反应,未见肿瘤复发迹象,一般情况好。结论肝胰十二指肠器官簇移植为上腹部晚期恶性肿瘤患者提供了延长生命的机会,同时更为晚期肝病伴有胰腺功能不良患者的彻底治愈探索出新的手术术式。

关键词：胰十二指肠器官簇原发性肝癌胰腺十二指肠恶性肿瘤患者联合移植术 2004年肝功能恢复生排斥反应移植术后胰腺功能肿瘤复发手术术式功能不良晚期肝病切除后远端胃胰岛素上腹部转移胰头

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