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短发夹状RNA基因沉默补体受体C5aR及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡

中国免疫学杂志 2010年第2期26卷 151-154页

作者：陈栋张艳李明尹注增陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030

目的:探讨短发夹状RNA基因沉默补体受体C5aR及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠补体受体C5aR基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-C5aR shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418... 详细信息

目的:探讨短发夹状RNA基因沉默补体受体C5aR及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠补体受体C5aR基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-C5aR shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达C5aR shRNA的细胞系。实验分为3组,①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染C5aR shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,γ计数仪测定125I标记的C5a与RK3E的结合情况。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),C5aR mRNA水平显著降低(P<0.01),125I标记的C5a与RK3E结合活性显著下降。结论:针对C5aR的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。

关键词： RNA干扰 C5aR 基因沉默凋亡

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CD3/CD46共刺激通路调控同种移植免疫反应的实验研究

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中国免疫学杂志 2009年第1期25卷 68-71页

作者：陈栋张驰张艳黄亚冰朱珉刘斌陈刚张伟杰陈知水陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030

目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制。方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共... 详细信息

目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制。方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞增殖的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素2(IL-2),γ-干扰素(γ-IFN),白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGFβ-)的水平,并以BALB/c小鼠的脾细胞作为刺激细胞,以转人CD46的C57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MMT法检测淋巴细胞增殖活性。结果:与CD3组或阴性对照组相比,ConA、CD3/CD28、CD3/CD46和CD3/CD28/CD46共刺激后,CD4+T细胞均出现显著增殖反应(P<0.05),而且CD3/CD28/CD46共刺激组的增殖活性较CD3/CD28或CD3/CD46共刺激组显著增高(P<0.05)。CD3/CD28共刺激后,IL-2和γ-IFN水平较阴性对照组和CD3组显著升高(P<0.05),CD3/CD46共刺激后,IL-10和TGFβ-水平较阴性对照组、ConA组、CD3组和CD3/CD28共刺激组显著升高(P<0.05)。CD3/CD46共刺激后可以显著地抑制同种混合淋巴细胞的增殖反应(P<0.05)。结论:CD3/CD46共刺激通路可以诱导CD4+T细胞产生IL-10和TGFβ-,抑制同种移植免疫反应的发生。

关键词： CD46 共刺激分子同种移植

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输注调节性T细胞延缓非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的发生

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 574-576页

作者：张伟杰吴轲陈必成徐逸林星光昌盛陈忠华郑少玲华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030 温州医学院附属第一医院移植中心

目的观察过继输注调节性T细胞（Treg）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠自发性糖尿病发生的影响。方法分选NOD小鼠天然调节性T细胞（nTreg），并诱导Naive T细胞转化为CD4^＋CD25^＋ Foxp3^＋调节性T细胞（iTreg），分别输注予4周龄的雌性NOD... 详细信息

目的观察过继输注调节性T细胞（Treg）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠自发性糖尿病发生的影响。方法分选NOD小鼠天然调节性T细胞（nTreg），并诱导Naive T细胞转化为CD4^＋CD25^＋ Foxp3^＋调节性T细胞（iTreg），分别输注予4周龄的雌性NOD小鼠，观察糖尿病的发生情况，并确定细胞输注后Treg在体内的分布、检测血清中TGF-β1、IL-10及IL-4的表达以探讨Treg的作用机制。结果对照组小鼠13周龄时即100％自发性发生糖尿病，而输注iTreg和nTreg分别能延缓糖尿病的发生时间至24周龄和25周龄，与对照组比较差异有统计学意义（P〉0．05）。Treg细胞输注后主要分布在胸腺，iTreg在体内能促进TGF-β1、IL-10及IL-4表达的上调[血中浓度分别为（543．00±26．51）、（107．67±12．66）、（93．33±12．58）ng／L]，与对照组比较差异有统计学意义[（60．67±15．82）、（20．67±6．03）、（30．67±5．51）ng／L，P〈0．05]。结论在体外诱导生成的调节性T细胞可延缓NOD小鼠糖尿病的发生，其机制与上调具有免疫抑制效应的细胞因子相关。

关键词：调节性T细胞糖尿病自身免疫性

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雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

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中华实验外科杂志 2006年第4期23卷 560-562页

作者：张翔张伟杰李开艳陈必成郭晖汤高枫华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院超声影象科武汉430030

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增... 详细信息

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组、高剂量组平均肿瘤体积分别为:(310．15±40．16)、(605．59±116．23)、(99．19±15．27)、(151．61±27．81) mm3。与对照组相比,雷帕常规剂量组及高剂量组肿瘤体积明显缩小,PCNA、VEGF的表达均显著下调(P<0．01);FKS06组肿瘤体积与对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P<0．01),PC- NA、VEGF的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0．01)。结论雷帕霉素具有显著抑制肝癌生长的作用,其机制可能是抑制了肝癌细胞的恶性增殖及VEGF的产生。

关键词：雷帕霉索他克莫司癌,肝细胞

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补体调节蛋白Crry对树突状细胞的调控及诱导同种移植免疫低反应

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中国免疫学杂志 2013年第1期29卷 25-28页

作者：张艳陈栋李明李永海刘斌陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制。方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时;②Crry处理组... 详细信息

目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制。方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时;②Crry处理组,加入抗小鼠Crry抗体5μg/ml,结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时,流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD86、CD40、MHCⅡ的表达,ELISA法检测其细胞上清液中IFN-γ、IL-10和IL-12的水平,ELISA法检测细胞上清液中C3、C5、C3a和C5a的含量,并以BALB/c小鼠的DC作为刺激细胞,以C57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MTT法检测淋巴细胞增殖活性。结果:经LPS刺激后,培养的DC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCⅡ分子的表达显著增加(P<0.05);Crry处理组DC表面共刺激分子CD86和MHCⅡ分子的表达较LPS刺激组显著降低(P<0.05),而CD40的表达无显著性差异;Crry处理组培养上清液中C3和C5的含量无明显变化,但C3a、C5a的含量较LPS刺激组显著减少(P<0.05);培养DC上清液中IFN-γ和IL-12的含量较LPS刺激组显著降低(P<0.05),IL-10的含量较LPS刺激组显著增加(P<0.05);培养的DC加入Crry抗体后,其淋巴细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。结论:补体调节蛋白Crry可以对DC具有重要的调控作用,可以影响其共刺激分子的表达、补体的生成以及细胞因子的合成等,从而诱导同种移植免疫低反应性,丰富先天免疫对获得性免疫的调节作用。

关键词：补体调节蛋白 Crry 树突状细胞同种移植

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2003年美国器官移植学会年会学术报道

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中华器官移植杂志 2004年第2期25卷 123-124页

作者：昌盛杜敦峰周鸿敏陈必成张鑫周洁袁劲陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植国家重点实验室武汉430030

美国器官移植学会(AST)2003年年会于5月30日～6月4日在华盛顿召开.现将大会主要议题及新进展介绍如下.

关键词： 2003年美国器官移植学会年会器官移植活体供者非定向捐赠有偿捐赠免疫抑制剂

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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 16-19页

作者：张艳陈栋贡福盛刘健刘晓晴华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的... 详细信息

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。

关键词： RNA干扰 Caspase-3 基因沉默细胞凋亡

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器官获取团队的专职化建设在器官捐献工作中的应用

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中华器官移植杂志 2018年第3期39卷 131-134页

作者：王心强昌盛徐晶杜潇潇郭宇亮陈知水蒋继贫华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的总结专职器官获取团队在器官捐献工作中的成效。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院2016年1月至2017年8月专职器官获取团队335例器官获取手术的临床资料（含婴幼儿供者27例），评价专职器官获取团队成效。结果335例... 详细信息

目的总结专职器官获取团队在器官捐献工作中的成效。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院2016年1月至2017年8月专职器官获取团队335例器官获取手术的临床资料（含婴幼儿供者27例），评价专职器官获取团队成效。结果335例供者获取手术中，专职器官获取团队平均响应时间为15min，手术室完成获取前准备平均耗时5min，器官获取手术平均耗时为27min。335例获取手术均获得成功，获取手术失误率为40／00。结论设立专职器官获取团队有利于实施器官获取流程标准化，直接缩短了器官获取手术准备时间和手术过程，减少了获取过程中人为因素造成的失误及偏差。

关键词：器官获取器官捐赠供者移植

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减少或撤除环孢素A的免疫抑制方案在HBV-DNA阳性肾移植患者中的应用

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中国综合临床 2008年第11期24卷 1158-1160页

作者：陈栋张伟杰陈知水曾凡军刘斌魏来陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨减少或撤除环孢素A（CsA）的免疫抑制方案在乙型病毒性肝炎DNA阳性肾移植患者中的应用价值。方法对我院2004年1月至2007年12月64例肾移植术后HBV—DNA阳性患者初始免疫抑制剂的治疗方案进行总结，分为：①环孢素A（CsA）＋霉酚... 详细信息

目的探讨减少或撤除环孢素A（CsA）的免疫抑制方案在乙型病毒性肝炎DNA阳性肾移植患者中的应用价值。方法对我院2004年1月至2007年12月64例肾移植术后HBV—DNA阳性患者初始免疫抑制剂的治疗方案进行总结，分为：①环孢素A（CsA）＋霉酚酸酯（MMF）组（A组），CsA的谷值C0在200～250ng／ml，MMF用量在1．0—1．5g／d；②普乐可复（FK506）＋MMF组（B组），FK506的谷值浓度维持在7～9ng／ml，MMF用量在1．0～1．5g／d；③低剂量CsA＋西罗莫司（SRL）组（C组），CsA的谷值C0在150ng／ml左右，C0维持750ng／ml左右，SRL浓度维持在6—10ng／ml。所有病例应用恩替卡韦抑制HBV-DNA的复制和常规保肝利胆治疗，随访6个月。结果三组肾移植术后急性排斥反应的发生率差异无统计学意义（P〉0．05），A组有12例（80％）患者出现肝功能异常，HBV-DNA转阴者8例（53％），应用恩替卡韦抑制乙型肝炎病毒复制和加强护肝治疗后，有7例肝功能好转，其中肝功能恢复缓慢且HBV-DNA持续阳性者2例改为FK506＋MMF的治疗方案，3例改为低剂量CsA＋SRL的治疗方案。B组有5例（20％）患者出现肝功能异常，HBV-DNA转阴者18例（75％）。C组有4例（16％）患者出现肝功能异常，HBV—DNA转阴者18例（72％）。结论减少或撤除CsA的免疫抑制方案对于HBV-DNA阳性的。肾移植患者是安全有效的，不增加排斥反应的发生，也不加重肝功能的损害。

关键词：肾移植 HBV-DNA 环孢素A

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马蹄肾供肾肾移植2例报告

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中华器官移植杂志 2016年第7期37卷 401-405页

作者：张学丁左川杨敏苗妍郭晖蒋继贫张伟杰周平昌盛华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨马蹄肾作为供肾的临床肾移植效果及手术经验总结。方法回顾分析2015年8月1例心脏死亡供者捐献的马蹄肾作为供肾，成功为2例尿毒症患者施行肾移植术的临床资料。供者因自发性脑出血发生心脏死亡，符合中国二类标准进行器官捐献... 详细信息

目的探讨马蹄肾作为供肾的临床肾移植效果及手术经验总结。方法回顾分析2015年8月1例心脏死亡供者捐献的马蹄肾作为供肾，成功为2例尿毒症患者施行肾移植术的临床资料。供者因自发性脑出血发生心脏死亡，符合中国二类标准进行器官捐献。捐献前供者尿量及血肌酐正常，未发现肾脏先天畸形以及相关病史。受者1为男性，年龄49岁，慢性肾炎，肾功能衰竭，透析治疗9个月余；受者2为男性，年龄42岁，IgA肾病，慢性肾炎肾功能衰竭，透析治疗1个月余。供肾获取时，采用低位髂血管插管灌注；供肾修整时仔细分离各动静脉分支，最后结扎峡部小分支动脉，分离峡部，并U形缝合峡部断端。左肾动脉双支，分别带主动脉袖片与受者1的髂外动脉行2个端侧吻合；单支肾静脉与受者髂外静脉行端侧吻合。右肾动脉3支，其中2支与受者2的髂外动脉端侧吻合，肾下极1支与远心端髂外动脉行端端吻合；静脉双支带下腔静脉行延长后，与受者2的髂外静脉行端侧吻合。双侧输尿管肾盂段均有轻度扩张，余无异常，均与受者膀胱行常规隧道包埋法吻合。2例受者术后均采用他克莫司＋吗替麦考酚酯＋泼尼松预防排斥反应。结果肾移植手术耗时3h左右。术后受者尿量均在2000ml／d以上，血肌酐逐渐下降至正常，恢复满意，均于2周左右出院。结论在供肾功能良好，充分评估及仔细操作的情况下，马蹄肾可以作为安全的供肾。

关键词：马蹄肾马蹄肾供肾肾移植

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