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中华器官移植杂志 2014年第7期35卷 421-425页

作者：王军祥钟山王筱啸陈松陈实陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生和计划生育委员会器官移植重点实验室武汉430030

目的建立灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型.方法选择B型血食蟹猴为受者,A型血食蟹猴为供者,行ABO血型不合同种肾移植.根据是否接受致敏预处理,将受者猴分为2组：（1）未致敏对照组（n=1）,直接施行血型不合的同种肾... 详细信息

目的建立灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型.方法选择B型血食蟹猴为受者,A型血食蟹猴为供者,行ABO血型不合同种肾移植.根据是否接受致敏预处理,将受者猴分为2组：（1）未致敏对照组（n=1）,直接施行血型不合的同种肾移植术;（2）KLH-A预致敏组（n=3）,预先皮下注射钥孔戚血蓝蛋白（KLH）偶联血型抗原A（KLH-A抗原）,致敏2周后施行血型不合的同种肾移植术.检测受者猴血清抗A血型抗体水平的变化,观察两组受者猴在移植术中开放血流1h内及术后移植肾存活情况,并对移植肾进行病理学检测及诊断.结果在术中未观察到未致敏对照组移植肾超急性排斥反应的发生,术后存活超过30 d（血肌酐为263 μmol/L）;KLH-A预致敏组3例受者猴在致敏后14 d,血清中抗A抗体水平显著升高,肾移植术中血流开放1h内移植物即转为紫黑色,HE染色及免疫荧光检测证实均发生超急性排斥反应.结论通过KLH偶联血型抗原预先致敏,以显著升高受者猴相应血型抗体水平的策略,能成功建立灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排斥反应模型.

关键词： ABO血型不合肾移植超急性排斥反应灵长类动物

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肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞数量与肝移植后肿瘤早期复发的相关性研究

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中华器官移植杂志 2016年第2期37卷 76-80页

作者：冯锦城杨博代辰张波谭如梦王媒西魏来陈栋陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTC）数量与肝移植后肿瘤早期复发的相关性。方法以2013年10月至2014年11月因原发性肝癌行肝移植的42例受者为对象，肝移植前影像学检查均未见肿瘤肝外转移灶，移植后均经病理检查明确原发病的... 详细信息

目的探讨肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTC）数量与肝移植后肿瘤早期复发的相关性。方法以2013年10月至2014年11月因原发性肝癌行肝移植的42例受者为对象，肝移植前影像学检查均未见肿瘤肝外转移灶，移植后均经病理检查明确原发病的诊断。采用CellSearchSys-tern设备检测患者肝移植前外周血CTC，肝移植后对所有受者随访1年，随访期间记录肿瘤复发和转移情况，用x2检验和Cox风险比例模型分析受者肿瘤的复发时间、临床病理资料与CTC的关系。结果42例受者中肝移植前外周血CTC阴性者13例（31．0%，13／42），呈阳性者29例（69．0％，29／42）。单因素分析显示，CTC的数量与肿瘤分化程度（X2=10．403，P=0．006）和TNM分期（X2=7．119，P=0．005）有关。随访期间，42例受者中有20例复发（其中18例CTC阳性），单因素分析显示，TNM分期（X2=5．599，P=0．010）、CTC数量（X2=6．083，P=0．007）与肝癌早期复发有关。Cox风险比例模型显示，CTC数量可以作为肝癌患者肝移植后预测肿瘤复发时间的独立预后因素，CTC≥1个者的复发时间明显早于CTC阴性者（P〈0．05）。结论肝癌患者肝移植前外周血中检出CTC者，其肝移植后早期易肿瘤复发；CTC可以作为判断肝癌患者肝移植后肿瘤复发时间的独立指标。

关键词：肝癌肝移植循环肿瘤细胞复发

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肾移植后早期抗体介导排斥反应的临床特点与治疗四例报道

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中华器官移植杂志 2016年第4期37卷 216-219页

作者：卢峡朱兰明长生陈知水陈忠华宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肾移植术后早期抗体介导的排斥反应（AMR）的临床特点和治疗。方法回顾分析3例肾移植及1例肾移植术后胰腺移植后早期发生AMR受者的临床资料。（1）病例1诊断为早期重度急性AMR，术后第8天开始出现血肌酐水平持续上升，且尿量迅... 详细信息

目的探讨肾移植术后早期抗体介导的排斥反应（AMR）的临床特点和治疗。方法回顾分析3例肾移植及1例肾移植术后胰腺移植后早期发生AMR受者的临床资料。（1）病例1诊断为早期重度急性AMR，术后第8天开始出现血肌酐水平持续上升，且尿量迅速减少，移植肾血流减少；术后第12天群体反应性抗体（PRA）Ⅰ类为74．6％，11类为2．7％。术后第14天行移植肾穿刺活检显示移植肾广泛缺血和局部出血，同时检测DSA结果显示抗1362平均荧光强度（MFI）为6800。（2）病例2诊断为早期轻度急性AMR，术后第13天复查PRAI类为65．6％，Ⅱ类为78．9％，DSAI为阳性，抗A11MFI为3059，DSAⅡ为阴性，术后第21天时行移植肾穿刺活检显示轻度缺血再灌注损伤表现。（3）病例3诊断为早期重度慢性AMR，受者因Ⅰ型糖尿病、尿毒症先后接受肾移植和胰腺移植，胰腺移植后8个月时，检测针对胰腺供者DSA为阳性，抗A2MFI为7514，抗1346MFI为3159，抗DQ7MFI为1503。（4）病例4诊断为早期混合性排斥反应，术后第8天出现血肌酐升高，术后第14天检测PRAⅠ类为3％，Ⅱ类为70％，DSA为阳性，抗DR16MFI为15170；术后第16天行移植肾穿刺活检显示移植肾急性混合性排斥反应。结果病例1和病例3因AMR的诊断和治疗不及时导致移植物功能丧失；病例2和病例4在诊断AMR后，使用血浆置换、丙种球蛋白和硼替佐米等联合治疗后移植肾功能恢复正常。结论AMR的诊断需要结合移植物功能下降、DSA阳性以及移植物活检病理表现进行综合判断。早期诊断、早期治疗以及联合治疗可以提高AMR的治愈率。

关键词：移植体液性排斥反应供体特异性抗体群体反应抗体

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供者特异性抗体对难治性移植肾功能恢复延迟的影响二例报道

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中华器官移植杂志 2016年第4期37卷 212-215页

作者：朱兰陈刚张伟杰郭晖林正斌杜敦峰陈松施辉波陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肾移植术后新生供者特异性抗体（DSA）对难治性移植肾功能恢复延迟（EGF）的影响。方法病例1为42岁女性，接受丈夫供肾的活体供肾移植，受者术前群体反应性抗体（PRA）曾轻度升高，但术前DSA和淋巴细胞毒交叉配合试验（cDC）阴... 详细信息

目的探讨肾移植术后新生供者特异性抗体（DSA）对难治性移植肾功能恢复延迟（EGF）的影响。方法病例1为42岁女性，接受丈夫供肾的活体供肾移植，受者术前群体反应性抗体（PRA）曾轻度升高，但术前DSA和淋巴细胞毒交叉配合试验（cDC）阴性；病例2为49岁女性，接受公民逝世后器官捐献（D（、D）供者供肾移植，术前PRA和CDC均为阴性。2例受者术后均出现难治性DGF，且DGF超过1个月未逆转。病例1术后10dPRA轻度升高（PRAI类为28％），流式CDC（Flow-CDC）检测显示为低水平DSA（13．9%）；病例2在术后17d通过Luminex单抗原微珠法检测II类DSA阳性（抗DR9，平均荧光度MFI2500）。2例受者经移植肾穿刺活检均未发现急性抗体介导排斥反应的典型病理表现。结果病例1未经特殊处理，于术后6周恢复尿量，术后第62天血肌酐降至96μmol／L。病例2经血浆置换＋静脉注射用免疫球蛋白（WIG）处理后DSA转阴，术后7周恢复尿量，第56天血肌酐降至95μmol／L。结论早期新生DSA在水平较低和细胞毒作用较弱时可能不足以引起急性抗体介导的排斥反应，而主要表现为移植肾。肾小管损伤，导致DGF的恢复时间显著延长。及时发现和有效清除DSA能促进延期恢复的DGF早日逆转。

关键词：肾移植移植肾功能恢复延迟供者特异性抗体

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雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

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中华实验外科杂志 2006年第4期23卷 560-562页

作者：张翔张伟杰李开艳陈必成郭晖汤高枫华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院超声影象科武汉430030

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增... 详细信息

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组、高剂量组平均肿瘤体积分别为:(310．15±40．16)、(605．59±116．23)、(99．19±15．27)、(151．61±27．81) mm3。与对照组相比,雷帕常规剂量组及高剂量组肿瘤体积明显缩小,PCNA、VEGF的表达均显著下调(P<0．01);FKS06组肿瘤体积与对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P<0．01),PC- NA、VEGF的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0．01)。结论雷帕霉素具有显著抑制肝癌生长的作用,其机制可能是抑制了肝癌细胞的恶性增殖及VEGF的产生。

关键词：雷帕霉索他克莫司癌,肝细胞

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重视移植免疫学基础研究转化为临床应用

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 257-260页

作者：陈刚朱有华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 第二军医大学长征医院全军器官移植研究所

20世纪以来，随着器官移植外科技术、移植免疫基础研究以及各种免疫抑制剂研究的深入，器官移植已成为临床治疗器官功能衰竭的有效手段。虽然目前移植器官的短期存活率得到极大的提高，但长期存活率仍不理想，其主要原因仍然是移植免疫... 详细信息

20世纪以来，随着器官移植外科技术、移植免疫基础研究以及各种免疫抑制剂研究的深入，器官移植已成为临床治疗器官功能衰竭的有效手段。虽然目前移植器官的短期存活率得到极大的提高，但长期存活率仍不理想，其主要原因仍然是移植免疫反应。为进一步改善器官移植的效果，必须重视移植免疫学基础与临床研究。

关键词：器官移植免疫学基础临床应用长期存活率转化免疫基础研究器官功能衰竭移植免疫反应

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儿童供肾移植的免疫抑制方案探讨

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中华器官移植杂志 2015年第8期36卷 465-468页

作者：朱兰陈松林正斌张伟杰曾凡军刘斌杜敦峰卢峡蒋继贫陈知水陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨适合公民逝世后器官捐赠儿童供肾移植的免疫抑制方案。方法回顾总结单中心自2013年7月至2015年8月实施的46例儿童供肾移植的免疫抑制方案。46例中，双肾整块移植14例，供者年龄为（61．2±63．2）d，受者体质量为（39．0... 详细信息

目的探讨适合公民逝世后器官捐赠儿童供肾移植的免疫抑制方案。方法回顾总结单中心自2013年7月至2015年8月实施的46例儿童供肾移植的免疫抑制方案。46例中，双肾整块移植14例，供者年龄为（61．2±63．2）d，受者体质量为（39．0±9．9）kg，多数采用兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白（rATG）诱导治疗及环孢素A＋麦考酚钠肠溶片（MPA）的维持方案；单肾移植32例，供者年龄为（2．8±2．3）岁，受者体质量为（47．3±10．6）妇，经rATG或巴利昔单抗诱导治疗，多数采用他克莫司＋吗替麦考酚酯（MMF）或MPA的方案。结果双肾整块移植受者发生移植肾功能恢复延迟（DGF）2例（14．3％），急性排斥反应0例，肺部感染1例（7．1％）。单肾移植受者发生DGF4例（12．5％），急性排斥2例（6．3％），肺部感染6例（18．8％）。结论根据儿童供肾移植的特点选择合适的诱导治疗及维持免疫抑制治疗方案，能够取得满意的移植效果。

关键词：肾移植移植物儿童供者免疫抑制剂

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补体调节蛋白Crry对树突状细胞的调控及诱导同种移植免疫低反应

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中国免疫学杂志 2013年第1期29卷 25-28页

作者：张艳陈栋李明李永海刘斌陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制。方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时;②Crry处理组... 详细信息

目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制。方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时;②Crry处理组,加入抗小鼠Crry抗体5μg/ml,结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时,流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD86、CD40、MHCⅡ的表达,ELISA法检测其细胞上清液中IFN-γ、IL-10和IL-12的水平,ELISA法检测细胞上清液中C3、C5、C3a和C5a的含量,并以BALB/c小鼠的DC作为刺激细胞,以C57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MTT法检测淋巴细胞增殖活性。结果:经LPS刺激后,培养的DC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCⅡ分子的表达显著增加(P<0.05);Crry处理组DC表面共刺激分子CD86和MHCⅡ分子的表达较LPS刺激组显著降低(P<0.05),而CD40的表达无显著性差异;Crry处理组培养上清液中C3和C5的含量无明显变化,但C3a、C5a的含量较LPS刺激组显著减少(P<0.05);培养DC上清液中IFN-γ和IL-12的含量较LPS刺激组显著降低(P<0.05),IL-10的含量较LPS刺激组显著增加(P<0.05);培养的DC加入Crry抗体后,其淋巴细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。结论:补体调节蛋白Crry可以对DC具有重要的调控作用,可以影响其共刺激分子的表达、补体的生成以及细胞因子的合成等,从而诱导同种移植免疫低反应性,丰富先天免疫对获得性免疫的调节作用。

关键词：补体调节蛋白 Crry 树突状细胞同种移植

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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 16-19页

作者：张艳陈栋贡福盛刘健刘晓晴华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的... 详细信息

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。

关键词： RNA干扰 Caspase-3 基因沉默细胞凋亡

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改良法分离小鼠移植心内浸润淋巴细胞

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中华实验外科杂志 2010年第9期27卷 1222-1223页

作者：方泽民何文涛王升周鸿敏陈忠华明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的建立简便而高效的分离小鼠心脏移植物内浸润淋巴细胞的方法.方法移植物剪碎后用Ⅱ型胶原酶（250 U/ml,30～40 min）消化,Ficoll密度梯度离心（800 g/min,20 min）分离单个核细胞,荧光标记抗体行表面抗原或胞内细胞因子染色后用流... 详细信息

目的建立简便而高效的分离小鼠心脏移植物内浸润淋巴细胞的方法.方法移植物剪碎后用Ⅱ型胶原酶（250 U/ml,30～40 min）消化,Ficoll密度梯度离心（800 g/min,20 min）分离单个核细胞,荧光标记抗体行表面抗原或胞内细胞因子染色后用流式细胞仪分析其亚群.结果移植物分离的单个核细胞数量稳定在1 × 10^6个以上,淋巴细胞的比例为（31.9±2.3）%,活性（95.1±2.1）%,流式细胞仪能同时检测到荧光标记的淋巴细胞表面和胞内的抗原.结论本法单用胶原酶消化移植心,减少了对心脏移植物内浸润淋巴细胞的损伤,获得的细胞可进一步用于流式表型分析.

关键词：心脏移植淋巴细胞移植物胶原酶Ⅱ 流式细胞仪

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