检索结果-内蒙古大学图书馆

数理医药学杂志 2009年第4期22卷 410-411页

作者：余毅伍龙王璐武汉市中心医院骨科武汉430021 武汉大学中南医院肿瘤科华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植国家教育部卫生部重点实验室

目的:研究塞来昔布(Celecoxib)对人骨肉瘤细胞株HOS-8603 P53表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。方法将培养HOS-8603细胞分为两组实验组(分别以20μmol/L和40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组,采用RT-PCR检测各组的P53 mRNA表达。... 详细信息

目的:研究塞来昔布(Celecoxib)对人骨肉瘤细胞株HOS-8603 P53表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。方法将培养HOS-8603细胞分为两组实验组(分别以20μmol/L和40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组,采用RT-PCR检测各组的P53 mRNA表达。结果:20μmol/L塞来昔布组P53 mRNA的表达与对照组相比无差异(P>0.05);40μmol/L塞来昔布组P53mRNA表达与对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论:塞来昔布可能通过促进人骨肉瘤细胞株HOS-8603 P53的表达发挥抗肿瘤作用。

关键词：骨肉瘤塞来息布 P53

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TGF—β1诱导的调节性T细胞体内输注延长小鼠皮肤移植物存活

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第8期28卷 680-684页

作者：袁劲吴轲何文涛汪峰陈忠华华中科技大学同济医学院同济医院肾病内科武汉430030 器官移植研究所器官移植教育部/卫生部重点实验室

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应... 详细信息

目的利用TGF-β1体外诱导naiveT细胞分化为调节性T细胞（Treg），通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间，并研究其相关机制。方法根据诱导条件不同分为3组：对照组（加入IL-2培养的C57BL／6小鼠T细胞）、MLR组（即混合淋巴细胞反应组，经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞）和TGF-β组（经同种抗原刺激活化的C57BL／6小鼠T细胞，同时加入5．0ng／ml TGF-β1诱导）。利用FACS检测CD4^＋CD25^＋T细胞比例，并用RT—PCR检测Foxp3的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型，并于第0、1、2和3天输注上述细胞，观察皮肤移植物存活时间。术后第9天，取部分受鼠行移植物病理检测，用FACS检测脾脏中TH1、TH2和CD4^＋CD25^＋Treg比例，并用AlamarBlue法检测淋巴细胞增殖能力。结果TGF-β组中CD4^＋CD25^＋T细胞比例高于对照组和MLR组（P〈0．05），且其高表达Foxp3。将培养的细胞输注给受鼠后发现，输注MLR组细胞的受鼠其移植物平均存活时间（mean survival time，MST）为（9．4±1．3）d，低于对照组（P〈0．05）；而输注TGF-β组细胞小鼠MST为（22．8±1．9）d，较对照组和MLR组明显延长（P〈0．05）。病理检测亦显示TGF-β组受鼠移植物结构完整，无明显淋巴细胞浸润。FACS结果显示TGF-β组小鼠体内TH1细胞（CD4^＋TIM-3^＋）比例低于对照组和MLR组（P〈0．05），而TH2细胞（CD4^＋TIM-1^＋）比例则与MLR组类似（P〉0．05），但低于对照组（P〈0．05）；而且TGF-β组中CD4^＋CD25^＋Treg比例明显高于对照组和MLR组（P〈0．05）。用AlamarBlue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示，TGF-β组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制，低于对照组（P〈0．05）。结论TGF-β，可诱导T细胞分化为具有抑制能力的Treg，将诱导后的细胞进行过继输注可使小鼠体内CD4^＋CD25^＋T。比例升高，同时抑制TH1和TH2细胞分化扩增，并使得外周淋巴细胞增殖能力减弱，从而延长小鼠皮肤移植物存活时间。

关键词： TGF—β1 调节性T细胞皮肤移植

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猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 712-715页

作者：谢林尹注增胡枫王璐朱珉向莹陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检... 详细信息

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度,并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定。采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较。在体外,用3H-TdR摄入法检测人PB-MCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PB-MCs共同培养,连续4d检测人PBMCs的增殖变化。结果采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%。光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征。经Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%,高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09±0.75)%(P<0.01)。并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义。结论采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞。在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用。

关键词：异种移植猪睾丸支持细胞人外周血单个核细胞细胞凋亡细胞增殖

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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 708-711,F0003页

作者：徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。

关键词：核转录因子κB启动子双顺反子 p27基因真核表达载体细胞周期

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猪睾丸Sertoli细胞的分离、培养及其免疫豁免相关细胞因子的检测

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中华器官移植杂志 2008年第9期29卷 522-525页

作者：胡枫尹注增王璐谢林向莹徐婧陈松李俊华陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型... 详细信息

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型胶原酶以及2．5g／L胰蛋白酶和0．5g／L DNaseI消化（两步法）分离Sertoli细胞，于37℃、含体积分数为5％CO2的培养箱中培养。采用倒置相差显微镜观察细胞形态，透射电镜进行超微结构鉴定，流式细胞仪检测细胞体外活率，逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子B（TGF-β）及Clusterin的表达，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞的活性。结果猪睾丸经分离、培养，所获得的Sertoli细胞纯度达90％以上。培养后的细胞凋亡率为（2．61±0．96）％，死亡率为（2．12±0．74）％；培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin，而FasL表达较弱。体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21d。结论采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞，该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子。

关键词：塞尔托利细胞细胞培养技术抗原 CD95 转化生长因子β 猪

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在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A的临床研究

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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 724-726页

作者：张伟杰陈栋王海灏明长生曾凡军陈知水林正斌刘斌宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A（CsA）对急性排斥反应发生率及肾功能的影响。方法选择35例肾功能稳定的肾移植受者，其中尸体肾移植23例，亲属活体肾移植12例。除2例为再次肾移植外，其余均为初次肾移植。分别在肾... 详细信息

目的研究在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A（CsA）对急性排斥反应发生率及肾功能的影响。方法选择35例肾功能稳定的肾移植受者，其中尸体肾移植23例，亲属活体肾移植12例。除2例为再次肾移植外，其余均为初次肾移植。分别在肾移植术后6个月～6年时停用CsA，平均为术后（13．3±9．1）个月。撤除CsA后免疫抑制方案为：霉酚酸酯（MMF）＋西罗莫司（SRL）＋泼尼松（Pred）。撤除CsA前有9例做了移植肾穿刺活检，8例测定了抗HLA抗体。结果对35例受者随访6个月～4．5年，平均14．8个月。撤除CsA前、后血肌酐平均值分别为（88．1±15．5）μmol／L和（92．3±23．7）μmol／L（P〉0．05）。撤除CsA后，有2例经活检证实发生急性排斥反应，治疗后均逆转；CsA所致的毒副作用，如牙龈增生、糖耐量异常和多毛症等明显改善。9例移植肾活检中，有3例肾功能正常的受者已出现轻度慢性移植肾肾病表现。抗HLA抗体检测中，7例阴性者在撤除CsA前、后肾功能无明显变化，1例抗HLA抗体呈强阳性者在撤除CsA后进展为慢性移植肾肾病，恢复血液透析。结论对移植‘肾功能稳定的受者在移植6个月后撤除CsA，转换为“霉酚酸酯＋西罗莫司＋泼尼松”的免疫抑制方案是安全的，不增加急性排斥反应风险；撤除CsA有利于消除一些与其相关的毒副作用；对抗HLA抗体呈强阳性者，撤除CsA后很难改变肾功能的进展。

关键词：肾移植环孢菌素移植物排斥肾功能试验

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移植肾间室综合征四例报道

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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 730-732页

作者：陈栋张伟杰曾凡军陈知水明长生刘斌陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨移植肾间室综合征的诊断方法和处理原则。方法分析和总结4例患者发生移植肾间室综合征的危险因素以及诊断和处理方法。结果2例由于腹胀，1例由于腰骶部垫起，1例由于再次肾移植盆腔容积狭小，腹壁张力增高而导致腹膜后压力升高... 详细信息

目的探讨移植肾间室综合征的诊断方法和处理原则。方法分析和总结4例患者发生移植肾间室综合征的危险因素以及诊断和处理方法。结果2例由于腹胀，1例由于腰骶部垫起，1例由于再次肾移植盆腔容积狭小，腹壁张力增高而导致腹膜后压力升高，压迫移植肾，引起移植肾血液循环障碍，导致移植肾功能紊乱。彩色多普勒超声检查提示移植肾皮质血流减少，移植。肾各级动脉血流速度降低和阻力指数增高。经迅速解除引起腹膜后压力升高的危险因素，减轻腹膜后的压力，改善移植肾微循环，4例移植肾间室综合征患者的肾功能均恢复正常。结论移植肾问室综合征是肾移植术后的一种近期并发症，彩色多普勒超声检查可明确诊断；确诊后应紧急减轻腹膜后的压力，解除移植肾受压可改善患者的预后。

关键词：肾移植移植肾间室综合征超声检查多普勒彩色

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转化生长因子-β1联合白细胞介素-2体外诱导非肥胖糖尿病小鼠调节性T细胞的产生

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中华实验外科杂志 2008年第1期25卷 45-47页

作者：吴轲徐逸昌盛吴丁安陈忠华张伟杰华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的体外诱导非肥胖糖尿病（NOD）小鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的产生并检测其免疫抑制功能。探讨外源性白细胞介素（IL）-2在诱导方案中的作用。方法分选NOD小鼠童贞T细胞（NmveT），利用Anti—CD3、Anti—CD28刺激... 详细信息

目的体外诱导非肥胖糖尿病（NOD）小鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的产生并检测其免疫抑制功能。探讨外源性白细胞介素（IL）-2在诱导方案中的作用。方法分选NOD小鼠童贞T细胞（NmveT），利用Anti—CD3、Anti—CD28刺激，同时给予转化生长因子-β1（TGF—B1）和白细胞介素-2（IL-2），共同培养5d，收获诱导性Treg（iTreg），经流式细胞仪检测其表型。利用体外T细胞增殖体系，对比NOD小鼠天然Treg（nTreg），评价iTreg的免疫抑制能力。将诱导方案中的IL-2撤除以观察其作用。结果TGF-β1联合IL-2能诱导NOD小鼠NaiveT转化为iTreg，较对照组有统计学意义[（41．33±3．21）％比（8．00±3．00）％，P〈0．05]。iTreg可有效抑制T细胞增殖，其能力与nTreg的差异无统计学意义[（40．33±1．03）％比（38．33±3．06），P〉0．05]。外源性IL-2有利于iTreg的产生[（41．33±3．21）％比（15．00±1．00）％，P〈0．05]。结论TGF-β1联合IL-2可在体外诱导Naive T转化为具有免疫抑制功能的Treg。

关键词：糖尿病 TGF-β1 IL-2 T细胞

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转录因子诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞抑制人补体介导的异种细胞毒作用

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中华器官移植杂志 2008年第10期29卷 594-597页

作者：黄亚冰王璐尹注增李荣郭晖陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨转录因子SP，诱骗性寡核苷酸（decoyODNs）转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV40-PED分为3组。转染组：SV-40PED转染了SP，decoyODNs；错配组：S驴4D—... 详细信息

目的探讨转录因子SP，诱骗性寡核苷酸（decoyODNs）转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV40-PED分为3组。转染组：SV-40PED转染了SP，decoyODNs；错配组：S驴4D—PED转染了错配的decoyODNs；空转染组：SV-40PED仅用转染试剂oligofectamine作用。转染后26h，采用细胞爬片免疫荧光技术、蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应及乳酸脱氢酶释放试验进行检测，分别观察各组SV40-PED胞膜a半乳糖残基（regal）、蛋白质和α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）mRNA等表达的变化，以及转染了SP，decoyODNs的SV-40PED对人血清补体介导的细胞毒作用的影响。结果转染组SV-40-PED胞膜α—G1的荧光表达明显减弱，部分胞膜可见点状荧光缺损，而空转染组和错配组仍可见明亮的绿色荧光。转染组蛋白表达水平均有不同程度的下降，相对吸光度（A值）仅为未转染组的52．6％。转染组α1，3GT基因异构体1和2mRNA的相对表达量分别为0．42±0．20和0．27±0．12，空转染组分别为0．72±0．17和0．50±0．19，两组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；错配组与空转染组相比，差异无统计学意义（P〉0.05）。体积分数为20％和40％的人血清对空转染组和错配组SV40-PED均有不同程度的杀伤，而对转染组SV-40-PED的杀伤明显减弱（P〈0.，05）。结论经SP，decoyODNs转染的猪血管内皮细胞可以抑制人血清补体介导的异种细胞毒作用。

关键词：转录因子 SP1 寡核苷酸类补体内皮细胞

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小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

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中华器官移植杂志 2008年第2期29卷 69-72页

作者：朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofecta... 详细信息

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。

关键词： RNA干扰半乳糖苷酶类内皮细胞

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