检索结果-内蒙古大学图书馆

中华器官移植杂志 2008年第2期29卷 69-72页

作者：朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofecta... 详细信息

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。

关键词： RNA干扰半乳糖苷酶类内皮细胞

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Caspase-3和Caspase-8肝脏缺血再灌注损伤基因沉默保护大鼠

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 594-596,682页

作者：陈栋张艳朱珉郭晖刘斌陈刚张伟杰陈知水陈实陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030 综合医疗科

目的观察caspase-3和caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（（IRI）的保护作用。方法分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体。肝脏IRI前48h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体或cas... 详细信息

目的观察caspase-3和caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（（IRI）的保护作用。方法分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体。肝脏IRI前48h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体或caspase-3和caspase．8shRNA。实验随机分为4组，假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组。阻断大鼠70％人肝血流40min，再灌注6、12、24h、3、5、7d检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平，肝组织Caspase-3和caspase-8 mRNA的表达，caspase-3和caspase-8蛋白活性，细胞凋亡情况，丙二醛（MDA）以及超氧化物岐化酶（SOD）的含量。结果与PBS组和空载体组比较，shRNA组再灌注6、12、24h、3、5d血清ALT和AST水平显著降低（P〈0．05），caspase-3和caspase-8mRNA水平、caspase-3和caspase-8蛋白活性（caspase-3活性：0．18±0．03比0．36±0．03和0．38±0．02，P〈0．05；caspase-8活性：0．16±0．03比0．32±0．02和0．34±0．03，P〈0．05）、肝细胞凋亡指数[（22．46±3．25）％比（35．24±2．33）％和（37．36±2．51）％，P〈0．05]和肝组织中MDA含量[（76．2±15．3）比（123．5±12．4）、（136．7±13．6）nmoVmg，P〈0．05）显著降低，SOD活性显著升高[（24．1±3．2）比（12．2±3．1）、（11．4±2．9）U／mg，P〈0．05]。结论caspase．3和caspase．8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生，从而起到保护肝脏IRI的作用。

关键词：肝脏缺血再灌注损伤 Caspase-3 Caspase-8 基因沉默

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α1，3-半乳糖基转移酶基因沉默对NK细胞介导的异种细胞毒作用的影响

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中华器官移植杂志 2008年第8期29卷 460-463页

作者：朱珉祁洪刚曹荣华王璐黄亚冰刘斌林正斌陈知水陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错... 详细信息

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错配组：PED转染了错配的SiRNA；空转染组：PED未转染SiRNA。观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK92混和培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果PED转染后48h，转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量（个）分别为262±26、275±24和252±23；流动状态下分别为132±12、125±15和110±20，无论是静止还是流动状态下，各组PED对NK92的粘附能力的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。无论PED是否被活化，在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但杀伤率与效靶比呈正相关。NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌，其分泌水平[（366．9±28．7）ng／L]较其自发分泌水平[（60．1±6．4）ng／L]增加了5倍，在共孵育后12h分泌值最高，但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论利用RNA干扰技术下调PED上的α1，3-半乳糖残基（reGal）的表达，未引起NK92和PED相互作用的明显改变。α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点，其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。

关键词： RNA干扰杀伤细胞,天然内皮细胞半乳糖转移酶类

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终末期糖尿病肾病患者移植术前的评估与处理

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中华器官移植杂志 2008年第1期29卷 47-48页

作者：明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室武汉430030

终末期糖尿病肾病（ESDN）患者往往伴有各种慢性并发症，如心脏病、眼病、糖尿病足和神经病变等，病情较为复杂。由于这类患者的易感性、全身血管病变和组织修复能力减弱等，使得肾移植术后的并发症增多，危险性上升，影响切口的愈合和... 详细信息

终末期糖尿病肾病（ESDN）患者往往伴有各种慢性并发症，如心脏病、眼病、糖尿病足和神经病变等，病情较为复杂。由于这类患者的易感性、全身血管病变和组织修复能力减弱等，使得肾移植术后的并发症增多，危险性上升，影响切口的愈合和受者的术后康复。因此，必要的术前检查和充分的术前准备对移植成功与否及移植物的长期存活极为重要。

关键词：终末期糖尿病肾病肾移植术后术前准备糖尿病肾病患者慢性并发症评估组织修复能力神经病变

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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 16-19页

作者：张艳陈栋贡福盛刘健刘晓晴华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的... 详细信息

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。

关键词： RNA干扰 Caspase-3 基因沉默细胞凋亡

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输注调节性T细胞延缓非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的发生

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 574-576页

作者：张伟杰吴轲陈必成徐逸林星光昌盛陈忠华郑少玲华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030 温州医学院附属第一医院移植中心

目的观察过继输注调节性T细胞（Treg）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠自发性糖尿病发生的影响。方法分选NOD小鼠天然调节性T细胞（nTreg），并诱导Naive T细胞转化为CD4^＋CD25^＋ Foxp3^＋调节性T细胞（iTreg），分别输注予4周龄的雌性NOD... 详细信息

目的观察过继输注调节性T细胞（Treg）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠自发性糖尿病发生的影响。方法分选NOD小鼠天然调节性T细胞（nTreg），并诱导Naive T细胞转化为CD4^＋CD25^＋ Foxp3^＋调节性T细胞（iTreg），分别输注予4周龄的雌性NOD小鼠，观察糖尿病的发生情况，并确定细胞输注后Treg在体内的分布、检测血清中TGF-β1、IL-10及IL-4的表达以探讨Treg的作用机制。结果对照组小鼠13周龄时即100％自发性发生糖尿病，而输注iTreg和nTreg分别能延缓糖尿病的发生时间至24周龄和25周龄，与对照组比较差异有统计学意义（P〉0．05）。Treg细胞输注后主要分布在胸腺，iTreg在体内能促进TGF-β1、IL-10及IL-4表达的上调[血中浓度分别为（543．00±26．51）、（107．67±12．66）、（93．33±12．58）ng／L]，与对照组比较差异有统计学意义[（60．67±15．82）、（20．67±6．03）、（30．67±5．51）ng／L，P〈0．05]。结论在体外诱导生成的调节性T细胞可延缓NOD小鼠糖尿病的发生，其机制与上调具有免疫抑制效应的细胞因子相关。

关键词：调节性T细胞糖尿病自身免疫性

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减少或撤除环孢素A的免疫抑制方案在HBV-DNA阳性肾移植患者中的应用

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中国综合临床 2008年第11期24卷 1158-1160页

作者：陈栋张伟杰陈知水曾凡军刘斌魏来陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨减少或撤除环孢素A（CsA）的免疫抑制方案在乙型病毒性肝炎DNA阳性肾移植患者中的应用价值。方法对我院2004年1月至2007年12月64例肾移植术后HBV—DNA阳性患者初始免疫抑制剂的治疗方案进行总结，分为：①环孢素A（CsA）＋霉酚... 详细信息

目的探讨减少或撤除环孢素A（CsA）的免疫抑制方案在乙型病毒性肝炎DNA阳性肾移植患者中的应用价值。方法对我院2004年1月至2007年12月64例肾移植术后HBV—DNA阳性患者初始免疫抑制剂的治疗方案进行总结，分为：①环孢素A（CsA）＋霉酚酸酯（MMF）组（A组），CsA的谷值C0在200～250ng／ml，MMF用量在1．0—1．5g／d；②普乐可复（FK506）＋MMF组（B组），FK506的谷值浓度维持在7～9ng／ml，MMF用量在1．0～1．5g／d；③低剂量CsA＋西罗莫司（SRL）组（C组），CsA的谷值C0在150ng／ml左右，C0维持750ng／ml左右，SRL浓度维持在6—10ng／ml。所有病例应用恩替卡韦抑制HBV-DNA的复制和常规保肝利胆治疗，随访6个月。结果三组肾移植术后急性排斥反应的发生率差异无统计学意义（P〉0．05），A组有12例（80％）患者出现肝功能异常，HBV-DNA转阴者8例（53％），应用恩替卡韦抑制乙型肝炎病毒复制和加强护肝治疗后，有7例肝功能好转，其中肝功能恢复缓慢且HBV-DNA持续阳性者2例改为FK506＋MMF的治疗方案，3例改为低剂量CsA＋SRL的治疗方案。B组有5例（20％）患者出现肝功能异常，HBV-DNA转阴者18例（75％）。C组有4例（16％）患者出现肝功能异常，HBV—DNA转阴者18例（72％）。结论减少或撤除CsA的免疫抑制方案对于HBV-DNA阳性的。肾移植患者是安全有效的，不增加排斥反应的发生，也不加重肝功能的损害。

关键词：肾移植 HBV-DNA 环孢素A

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大鼠供肾转染反义ERK2基因减缓肾移植后慢性移植肾肾病的作用及机制

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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 733-736页

作者：丁召宫念樵陈曦林郭晖陈知水陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾... 详细信息

目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾灌注无菌HTK液0．5ml，空载病毒组供肾灌注含5×10^9pfuLacZ基因腺病毒（Ad-LacZ）的HTK液0．5ml，基因转染组供肾灌注含5×10^9pfuAdantbERK2的HTK液0．5m1。肾移植术后24周行移植肾的病理学观察，免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞的浸润情况；酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β（TGF-β1）的含量。结果肾移植术后24周，对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现；肾小球硬化，肾小管萎缩明显，伴严重间质纤维化以及明显的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少，Vimentin、TβRI表达显著增多。基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常。对照组和空载病毒组血清中TGF-β。含量明显高于基因转染组。结论AdantkERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生，对移植肾具有保护作用。这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关。

关键词：肾移植大鼠细胞外信号调节MAP激酶类

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雷帕霉素对肝脏缺血再灌注损伤修复的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第1期37卷 63-65页

作者：孙仁虎曾志贵甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制。方法建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型。将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手... 详细信息

目的应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制。方法建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型。将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手术组;D组(n=12):生理盐水假手术组。给药后第4天对各组小鼠行手术及假手术处理。术后第1天、第4天分批处死各组动物,取出损伤肝组织作组织病理学检测;免疫组织化学方法检测组织内增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达。结果①在术后各检测时间点,A组小鼠肝组织病理学变化明显重于B组,表现为肝细胞有明显肿胀变性,肝板结构紊乱,肝窦结构不清晰,伴有肝细胞坏死;C组及D组未见明显组织病理损伤。②在各时间点,A组小鼠肝组织中PCNA阳性率显著低于B组;而且CyclinD1的阳性率也低于B组,差异有统计学意义(均P<0.05)。C组及D组未见明显PCNA及CyclinD1的表达。结论雷帕霉素阻抑了缺血再灌注损伤肝脏的修复过程,而对正常肝脏无明显损伤作用。

关键词：雷帕霉素缺血再灌注损伤肝再生

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染料木黄酮在减轻肾间质纤维化中的作用

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中华实验外科杂志 2008年第10期25卷 1326-1328页

作者：何凡蒋继贫徐胜元郑翔陈必成陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部重点实验室武汉430030

目的探讨染料木黄酮（Genistein）在减轻单侧输尿管结扎模型（UUO）诱导肾间质纤维化中的作用及可能机制。方法将30只SD大鼠随机分为5组，A组：假手术＋DMSO1ml／d×14d；B组：假手术＋Genistein每日20mg／kg体重×14d；C组：UU... 详细信息

目的探讨染料木黄酮（Genistein）在减轻单侧输尿管结扎模型（UUO）诱导肾间质纤维化中的作用及可能机制。方法将30只SD大鼠随机分为5组，A组：假手术＋DMSO1ml／d×14d；B组：假手术＋Genistein每日20mg／kg体重×14d；C组：UUO＋DMSO1ml／d×14d；D组：UUO＋Genistein5mg／kg体重每日×14d；E组：UUO＋Genistein20mg／kg体重每日×14d。术后14d比较各组大鼠左／右肾重量和长度的比值；酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清INF-γ和TGF-β1表达；病理观察肾小管扩张和肾间质增生的程度，免疫组织化学观察肾脏α-SMA和ED-1表达。结果C、D、E组左／右肾重量及长度比值均明显高于A、B组，但E组左／右肾重量及长度比值、血清TGF-β1及INF-γ浓度、肾小管扩张分数和肾小管容量分数、α-SMA和ED-1的表达均低于C组。结论染料木黄酮可明显降低由单侧输尿管结扎模型所导致的肾间质纤维化的病理改变，其可能机制是染料木黄酮抑制TGF-β1及INF-γ的表达，从而抑制肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化。

关键词：染料木黄酮肾间质纤维化 TGF-β1

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