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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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西罗莫司对移植动脉粥样硬化的预防作用

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中华实验外科杂志 2005年第5期22卷 620-621,i006页

作者：张伟杰徐崇松甄忠广张成德聂明朱学海华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究新型免疫抑制剂西罗莫司(Sirolimus)对大鼠移植动脉粥样硬化的预防作用。方法建立大鼠颈动脉移植模型,将受体鼠随机分为3组,即空白对照组、环孢素组及Sirolimus组,6周后对移植动脉行病理组织学检测观察移植动脉再狭窄程度、免... 详细信息

目的研究新型免疫抑制剂西罗莫司(Sirolimus)对大鼠移植动脉粥样硬化的预防作用。方法建立大鼠颈动脉移植模型,将受体鼠随机分为3组,即空白对照组、环孢素组及Sirolimus组,6周后对移植动脉行病理组织学检测观察移植动脉再狭窄程度、免疫组织化学检测转化生长因子(TGF)-β1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果Sirolimus组血管内膜增厚程度显著低于对照组和环孢素组,其移植动脉再狭窄程度为(15.00±1.21)%,而对照组和环孢素组分别为(40.00±5.91)%、(34.00±6.55)%,差异均有统计学意义(P<0.01);PCNA在Sirolimus组表达明显低于空白对照组和环孢素组,分别为(1.10±0.30)%、(14.20±2.56)%及(4.10±0.62)%,差异有统计学意义;TGF-β1在Sirolimus组表达低于对照组和环孢素组,分别为(5.00±1.39)%、(18.00±1.52)%及(16.00±2.35)%(P<0.01)。结论Sirolimus可预防大鼠移植动脉粥样硬化,TGF-β1和PCNA基因表达的下调可能是Sirolimus预防移植动脉粥样硬化机制中重要环节。

关键词：动脉粥样硬化预防作用西罗莫司 Sirolimus 增殖细胞核抗原(PCNA) 免疫组织化学检测 PCNA基因表达 TGF-β1 新型免疫抑制剂病理组织学检测移植动脉转化生长因子狭窄程度对照组环孢素移植模型方法建立内膜增厚

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探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

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小鼠CD4^+CD25^+T细胞的分离、鉴定和体外功能的检测

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 92-95,99页

作者：周洁袁劲周鸿敏杜敦峰陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院同济器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用... 详细信息

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能。结果　MACS分选法分选出的CD4 + CD2 5 + T细胞活性>97% ,纯度>95 % ;此方法获得的CD4 + CD2 5 + T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4 + CD2 5 -T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性。结论　MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4 + CD2 5 + T细胞,且不影响细胞活力。CD4 + CD2 5 + T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞免疫磁性分离 AlamarBlue 免疫无能免疫抑制

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肝胰十二指肠器官簇移植(附一例报道)

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中华器官移植杂志 2005年第6期26卷 325-328页

作者：陈知水魏来刘敦贵杜敦峰明长生曾凡军张伟杰林正斌蒋继贫陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常... 详细信息

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常,未应用胰岛素维持;术后1周肝功能恢复正常。患者目前已存活5个月,肝脏和胰腺功能均正常,未发生排斥反应,未见肿瘤复发迹象,一般情况好。结论肝胰十二指肠器官簇移植为上腹部晚期恶性肿瘤患者提供了延长生命的机会,同时更为晚期肝病伴有胰腺功能不良患者的彻底治愈探索出新的手术术式。

关键词：胰十二指肠器官簇原发性肝癌胰腺十二指肠恶性肿瘤患者联合移植术 2004年肝功能恢复生排斥反应移植术后胰腺功能肿瘤复发手术术式功能不良晚期肝病切除后远端胃胰岛素上腹部转移胰头

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供者特异性抗原静脉输注联合抗γ链单克隆抗体诱导小鼠皮肤移植物免疫耐受

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中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 154-156页

作者：昌盛沈世乾陈必成杜敦峰周洁张鑫陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植国家重点实验室武汉430030

目的　探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法　在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素... 详细信息

目的　探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法　在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体(4G3、3E12及TUGm2各0.5 mg)和抗IL 2Rβ单克隆抗体(TM β1,0.5 mg)混合液2.0 mg腹腔注射,以单纯行H Y皮肤移植模型和静脉输注供者特异性抗原的H Y皮肤移植模型为对照,观察皮肤移植物的存活时间。结果　联合给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体和供者特异性抗原输注组的皮肤移植物存活时间均超过100 d,显著长于单纯H Y皮肤移植组的33.42 d(P<0.01)及仅输注供者特异性抗原H Y皮肤移植组的14.71 d(P<0.01)。结论　在H Y皮肤移植模型中,静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体可以成功地诱导受者对皮肤移植物的免疫耐受。

关键词：皮肤移植供者特异性抗原静脉输注单克隆抗体白细胞介素2受体联合植物存活时间混合液

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人CD59/MCP双基因对人血灌注转基因小鼠离体心脏功能的保护作用

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中华医学杂志 2005年第42期85卷 3001-3004页

作者：谢林朱珉王树森李荣曾梦华黄亚冰王璐郭晖魏庆信李文鑫陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030 湖北省农业科学院生物技术研究所武汉大学生命科学院

目的研究转人补体调节蛋白hCD59/hMCP双基因抑制人补体激活从而抑制补体介导的超急性反应、延长体外灌注小鼠心脏功能的作用。方法利用显微注射法建立转hCD59/hMCP双基因小鼠的模型,其子代中hCD59单基因阳性小鼠8只、hMCP单基因阳性小... 详细信息

目的研究转人补体调节蛋白hCD59/hMCP双基因抑制人补体激活从而抑制补体介导的超急性反应、延长体外灌注小鼠心脏功能的作用。方法利用显微注射法建立转hCD59/hMCP双基因小鼠的模型,其子代中hCD59单基因阳性小鼠8只、hMCP单基因阳性小鼠11只和hCD59/hMCP双基因阳性小鼠8只分别为3个实验组,同窝非转基因小鼠10只为对照组。用新鲜人血浆体外灌注小鼠心脏,研究小鼠表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白后,对补体介导的异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果转双基因组心脏搏动时间(138min±25min)明显长于单基因组(hCD59组78min±27min,hMCP组43min±21min)及非转基因组(20min±12min)(Dunnett′s T检验,均P<0.01);免疫荧光染色及免疫酶组织化学染色显示转双基因组心脏内补体C3c及C9沉积也明显减少。结论转人补体调节蛋白hCD59/hMCP双基因能够有效地抑制补体介导的异种移植超急性排斥反应。

关键词：小鼠转基因移植异种血液灌注抗原 CD59

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舒莱预防肾脏移植物急性排斥反应的随机对照试验研究

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军医进修学院学报 2005年第6期26卷 407-409页

作者：蔡明石炳毅陈忠华钱叶勇莫春柏周文强解放军总医院第309临床部器官移植中心北京100091 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所-国家教育部器官移植重点实验室-国家卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨白细胞介素2受体单克隆抗体--舒莱(Simulect)对移植肾急性排斥反应的预防作用以及用药的安全性与药物的毒副作用.方法:将我器官移植移植中心1999年3月～2002年10月共46例肾移植受者为研究对象,随机分成舒莱组(23例)和对照组(23... 详细信息

目的:探讨白细胞介素2受体单克隆抗体--舒莱(Simulect)对移植肾急性排斥反应的预防作用以及用药的安全性与药物的毒副作用.方法:将我器官移植移植中心1999年3月～2002年10月共46例肾移植受者为研究对象,随机分成舒莱组(23例)和对照组(23例),两组肾移植术后均接受以Neoral为基础的三联免疫抑制剂.舒莱组术前2h和术后4d各给予舒莱20mg静脉滴注.观察急性排斥反应、Neoral、皮质激素和硫唑嘌呤用量及药物的毒副作用.实验室检测血CsA浓度和肝肾功能.结果:研究结果表明,舒莱组无1例发生急性排斥反应,对照组术后8周内发生3例4次急性排斥反应.两组均未发生明显的毒副作用.两组间Neoral用量及血CsA浓度无明显差异.对照组因发生急性排斥反应,8周内皮质激素用药量总量大于舒莱组.结论:舒莱对移植肾急性排斥反应具有明显的预防作用,且用药方法简便,疗程短,无明显的毒副作用.

关键词：肾移植移植物排斥舒莱

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重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig转染延长同种大鼠心脏移植存活时间

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中华器官移植杂志 2005年第2期26卷 68-71页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖孔强汪道文陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科实验室武汉430030

目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉... 详细信息

目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉全身注射1×109斑点形成单位(PFU)的rAAV-CTLA4Ig.观察移植心存活时间;ELISA法检测血清CTLA4Ig、干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;免疫组织化学法(SABC法)检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润.对移植心存活时间明显延长的受者,用其脾细胞与供者脾细胞进行混合淋巴细胞培养,观察受者对供者的免疫反应状态.结果转染组移植心存活时间较对照组明显延长(P＜0.05);转染组血清CTLA4Ig蛋白一直维持在26.67～35.47 mg/L,移植后转染组血清IFN-γ水平下调,血清IL-4水平上调(P＜0.05);对照组出现典型的急性排斥反应表现,转染组心肌组织基本正常,间质内无炎性细胞浸润或血管外周及心肌间质内有局灶性炎性细胞浸润,未见坏死:对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于转染组(P＜0.01);转染组受者对供者的脾细胞增殖反应明显低于对照组(P＜0.05).结论重组腺相关病毒载体可以介导CTLA4Ig基因的持续表达,通过全身途径转染受者可以明显延长同种移植心的存活时间,降低受者对供者的免疫反应性.

关键词：重组腺相关病毒载体介导 CTLA4Ig 转染大鼠心脏移植

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