检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 559-563页

作者：廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/教育部器官移植重点实验室/卫生部器官移植重点实验室

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC... 详细信息

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

关键词：酶联免疫斑点法 B淋巴细胞 HLA抗体美洲商陆丝裂原

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公民逝世后器官捐献供肾的病理学评估

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器官移植 2018年第1期9卷 1-8页

作者：郭晖陈知水陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

肾移植是治疗终末期肾病的最有效方法,但供体器官的严重短缺一直是阻碍肾移植发展的最大障碍。随着2015年以来我国器官移植尸体供体完全转变为公民逝世后器官捐献,移植例数稳步增长,更多的患者得到救治。但公民逝世后器官捐献因供体高... 详细信息

肾移植是治疗终末期肾病的最有效方法,但供体器官的严重短缺一直是阻碍肾移植发展的最大障碍。随着2015年以来我国器官移植尸体供体完全转变为公民逝世后器官捐献,移植例数稳步增长,更多的患者得到救治。但公民逝世后器官捐献因供体高龄、原有系统性疾病等因素导致供肾质量存在差异,而移植前的供肾病理学诊断是一项重要评估方法。本文综述了供肾病理学评估的活组织检查时机、活组织检查方法、病理学标本处理技术和目前国际上采用的组织病理学评估标准,以供大家参考,籍此希望我国更多的移植中心针对目前器官移植的实际情况对此展开更深入的研究。

关键词：肾移植病理组织学供肾公民逝世后器官捐献心脏死亡器官捐献(DCD) 扩展标准供体(ECD) 活组织检查组织病理学评分标准

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食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞检测ABO血型抗体水平的新方法

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 300-305页

作者：王璐王军祥王筱啸陈松陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTE... 详细信息

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTEC与人血清血型抗体的结合能力以及比较人红细胞与RCTEC测定血型抗体滴度的差异。结果分离得到的肾皮质细胞绝大部分是RCTEC。39．90％～73．80％的RCTEC表达ABO组织-血型抗原，且能与人血清中的血型抗体特异性结合。较长时间冻存对RCTEC的ABO组织-血型抗原表达水平无明显影响，冻存前表达B型抗原的阳性细胞比例为39．90％，冻存10个月后复苏再培养9d，阳性细胞的比例为39．．65％。利用钥孔戚血蓝蛋白偶联的血型抗原A（KLH—A）致敏前后的食蟹猴血清对比原代RCTEC与人红细胞检测血型抗体滴度的效果，结果显示，在RCTEC检测组，未出现凝集现象，与两种血清中抗体结合的几何平均荧光强度（MFI）均在最低血清稀释度（1：16）时最高，其后均随血清稀释度的增加而逐渐降低，未致敏血清的MFI值在稀释度为1：128时降至基线水平，致敏血清的MFI值在1：8192稀释度时降至基线水平，在1：16～1：8192稀释度之间，未致敏血清的MFI值均低于致敏血清；在人红细胞检测组，当抗体滴度高时凝集现象明显，未致敏血清MFI值的最高峰出现在1：64稀释度时，致敏血清MFI值的最高峰出现存1：32稀释度时，且随血清稀释度的增加呈现无明显规律的波动，在1：64～1：512稀释度之间，未致敏血清MFI值高于致敏血清。利用RCTEC检测血型抗体滴度的MFI值能较准确地反映抗体滴度自；变化。结论食蟹猴RCTEC高表达AN）组织-血型抗原，比人红细胞更适用于血清中血型抗体滴度的流式细胞术检测，具有良好的临床与科研应用潜力。

关键词：肾皮质上皮细胞 ABO血型系统肾移植流式细胞术

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肾移植后移植物抗宿主病一例的诊治

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中华器官移植杂志 2018年第4期39卷 203-208页

作者：杜敦峰周平郭晖赵圆圆陈知水蒋继贫华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨实体器官移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）的诊治方法和可能的发病机制.方法回顾性分析1例罕见肾移植术后GVHD受者的诊治经过并复习相关文献.受者肾移植术后50d因皮肤散发皮损再次入院,皮肤活体组织检查病理提示为GVHD.为明... 详细信息

目的探讨实体器官移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）的诊治方法和可能的发病机制.方法回顾性分析1例罕见肾移植术后GVHD受者的诊治经过并复习相关文献.受者肾移植术后50d因皮肤散发皮损再次入院,皮肤活体组织检查病理提示为GVHD.为明确诊断,进一步对患者进行了外周血CD3＋淋巴细胞富集后的短串联重复序列（short tandem repeats,STR）嵌合分析和皮肤组织供者特异性人类白细胞抗原（HLA）抗体免疫荧光实验,同时进行降低免疫抑制为主导的治疗.结果 STR分析结果显示,患者外周血淋巴细胞嵌合率为0,但皮肤组织供者特异性HLA抗体免疫荧光结果证实,皮肤组织大量浸润淋巴细胞为供者来源,从而确诊为肾移植术后GVHD.经过降低免疫抑制治疗,小剂量甲泼尼龙冲击治疗后,该患者迅速好转出院,目前肾功能正常.结论结合文献复习,外周血STR嵌合分析和供者特异性HLA染色是确诊实体器官移植后的GVHD有力手段;肾移植术后的GVHD预后较好;推测实体器官移植后GVHD可能是免疫抑制的结果.

关键词：肾移植移植物抗宿主病短串联重复序列免疫荧光

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Sertoli细胞对同种异体调节性T细胞/辅助性T细胞17分化平衡的调节作用

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第6期43卷 626-630,635页

作者：陈莲一谢林湖北省医学会武汉430071 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究Sertoli细胞对同种异体免疫反应过程中调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)平衡的影响。方法体外分离并培养Sertoli细胞、T淋巴细胞和骨髓来源的DC细胞,将Sertoli、DC细胞分别与同种异体T细胞混合培养,光镜及电镜下观察Sert... 详细信息

目的研究Sertoli细胞对同种异体免疫反应过程中调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)平衡的影响。方法体外分离并培养Sertoli细胞、T淋巴细胞和骨髓来源的DC细胞,将Sertoli、DC细胞分别与同种异体T细胞混合培养,光镜及电镜下观察Sertoli细胞形态,采用Western blot检测Sertoli细胞中人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、B7-H1蛋白的表达,收集培养上清液,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测Sertoli细胞培养上清内的转化生长因子(TGF)-β1、IL-17A等细胞因子水平;流式细胞术观察混合培养细胞分化结果。结果成功在体外培养Sertoli细胞;Western blot结果显示,Sertoli细胞与同种异体Nave CD4+T细胞(CD4+CD62L+CD25-)在体外混合培养时,其表面的MHC-Ⅱ类分子和B7-H1分子的表达量增加;ELISA结果显示,与同种异体Nave CD4+T细胞混合培养72h后,培养上清液中的TGF-β1浓度较单纯Sertoli培养组显著升高[(823.10±59.07)pg/mL vs.(174.89±23.51)pg/mL,P<0.01];流式细胞术结果显示,与同种异体Sertoli细胞共同培养的体系内,Nave CD4+T细胞(CD4+CD62L+CD25-)被诱导分化为CD25+Foxp3+Treg细胞的比例显著增加,从<1.0%增长至27.6%;用Sertoli细胞与Treg细胞混合培养上清液孵育DC细胞/Nave CD4+T细胞,可明显减少培养液中IL-17A的浓度,使其从(361.58±80.27)pg/mL降低至(137.54±52.19)pg/mL(P<0.05);同时IL-17A+T细胞亚群百分比也显著降低(27.2%降至17.9%)。结论Sertoli细胞体外培养产生的抗炎细胞因子和免疫抑制细胞因子能诱导Nave CD4+T细胞分化为CD25+Foxp3+Treg细胞,Sertoli细胞可能通过调节同种异体Treg/Th17分化平衡,诱导免疫耐受。

关键词： Sertoli细胞免疫耐受调节性T细胞辅助性T细胞17

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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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Galeetin-9（Tim-3L）显著减弱小鼠移植排斥

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 5-10页

作者：何文涛袁劲方泽民汪峰徐逸周鸿敏高英张维娜王璐陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探究Galectin-9（即Tcell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 lig-and，Tim-3L）的真核定位与功能，及其对同种异基因排斥反应的影响。方法PCR扩增Galectin-9片段，插入到pEGFP—N1质粒，转染中国仓鼠卵巢癌细胞系（CHO）行G418筛选，分选增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性细胞。免疫组化检测Galectin-9的表达，Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响，ELISA检测IL-2水平。给予BALB／c→C57BL／6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7d。结果Galectin-9表达于细胞浆，稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生。上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转。Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[（22．7±1．2）d，（7．2±0．4）d）]。结论真核细胞中Galectin．9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫；Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物。

关键词： Tim-3 Galectin-9 免疫抑制小鼠

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核糖核酸干扰技术在移植免疫中的应用前景

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 253-254页

作者：朱珉陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基... 详细信息

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基因小鼠上都成功实现了RNAi,更拓宽了这项技术的应用范围.虽然目前RNAi在移植学领域中的相关研究几乎处于空白阶段,但我们可以通过从相关学科RNAi的研究进展中触类旁通,探讨其在移植领域中的应用前景。

关键词：核糖核酸干扰技术移植免疫基因沉默现象哺乳动物细胞病毒载体系统 RNAi 双链RNA 靶基因表达转基因小鼠培养细胞

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