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2014中国器官移植大会

作者：邢帅周平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部、教育部器官移植重点实验室

目的:探讨异基因骨髓移植受体髓样分化因子88 (MyD88)在小鼠移植物抗宿主病(GvHD)进展中的作用.方法:以与雄性C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为骨髓移植的供者,雌性BALB/c (H-2Kd)野生型(wt)或MyD88基因敲除(ko)小鼠为受者,术前受者接受致死剂量(...

目的:探讨异基因骨髓移植受体髓样分化因子88 (MyD88)在小鼠移植物抗宿主病(GvHD)进展中的作用.方法:以与雄性C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为骨髓移植的供者,雌性BALB/c (H-2Kd)野生型(wt)或MyD88基因敲除(ko)小鼠为受者,术前受者接受致死剂量(8.0Gy)的全身照射处理,4～6小时内输注供者来源的骨髓细胞(BMs,1*107)和不同数量的脾脏淋巴细胞(SCs,1*107或2*107)建立不同严重程度的急性GVHD模型;单纯BMs输注的BALB/c小鼠为对照.以GVHD临床评分,生存期,靶器官病理损害为GVHD的评价指标.采用免疫组化法检测模型小鼠小肠组织中MyD88的表达;实时荧光定量PCR检测靶器官中炎性因子的表达;ELISA检测血清中脂多糖(LPs)含量免疫荧光检测明确供着特异性细胞在靶器官中的含量差异;TUNEL和PCNA法检测肠上皮细胞的凋亡和增殖;通过在体外分别诱导wt和ko受体骨髓源性不成熟的树突状细胞(DC),加入LPS刺激后,流式检测DC表面功能性分子的表达情况,并通过与CFSE标记的异基因T淋巴细胞的混合培养,明确MyD88敲除对T淋巴细胞增殖的影响.

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补体抑制为基础的策略克服灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排斥反应

补体抑制为基础的策略克服灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排...

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第九届全国免疫学学术大会

作者：王军祥钟山陈松王璐赵光远王筱啸陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

背景:已有研究证明补体抑制为基础的策略能够使供者皮肤预致敏的受者移植肾长期存活和产生"适应"。本研究旨在证明采取类似的策略能否使ABO血型不合的肾移植产生同样的效果。方法:因为食蟹猴的ABO血型抗体水平较人类低,所以... 详细信息

背景:已有研究证明补体抑制为基础的策略能够使供者皮肤预致敏的受者移植肾长期存活和产生"适应"。本研究旨在证明采取类似的策略能否使ABO血型不合的肾移植产生同样的效果。方法:因为食蟹猴的ABO血型抗体水平较人类低,所以我们采用合成的KLH-A抗原致敏B型血食蟹猴,等其血清中抗A抗体水平明显增高后,再与A型血食蟹猴供者配对,施行ABO血型不合肾移植。KLH-A致敏

关键词：急性排斥反应肾移植抗体介导的排斥反应灵长类动物 ABO

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CD40L激活B细胞诱导食蟹猴同种抗原特异性CD4+Treg的实验研究

CD40L激活B细胞诱导食蟹猴同种抗原特异性CD4+Treg的实验研究

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：王璐闫玉涛陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

研究背景:利用CD40L激活的人B细胞能在体外诱导并扩增出大量供者抗原特异性Treg,该方法简单高效、重复性强,具有良好的临床应用前景,但需要在灵长类动物模型中进一步验证其免疫抑制效应及安全性.目的体外培养出CD40L激活的供者食蟹猴B细... 详细信息

研究背景:利用CD40L激活的人B细胞能在体外诱导并扩增出大量供者抗原特异性Treg,该方法简单高效、重复性强,具有良好的临床应用前景,但需要在灵长类动物模型中进一步验证其免疫抑制效应及安全性.目的体外培养出CD40L激活的供者食蟹猴B细胞,并诱导受者食蟹猴CD4+CD25T细胞转变为抗原特异性Treg.方法将供者食蟹猴PBMCs与钴60-γ射线灭活的稳定转染人CD40L的NIH3T3细胞系(tCD40L-NIH3T3)混合培养,于不同时间点鉴定CD19、MHCⅡ、CD80、CD86等活化B细胞的表型.

关键词：食蟹猴 CD40L 活化B细胞调节性T细胞

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CD40L激活B细胞诱导食蟹猴同种抗原特异性CD4+Treg的实验研究

CD40L激活B细胞诱导食蟹猴同种抗原特异性CD4+Treg的实验研究

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第九届全国免疫学学术大会

作者：王璐闫玉涛陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

研究背景:利用CD40L激活的人B细胞能在体外诱导并扩增出大量供者抗原特异性Treg,该方法简单高效、重复性强,具有良好的临床应用前景,但需要在灵长类动物模型中进一步验证其免疫抑制效应及安全性。目的体外培养出CD40L激活的供者食蟹猴B... 详细信息

研究背景:利用CD40L激活的人B细胞能在体外诱导并扩增出大量供者抗原特异性Treg,该方法简单高效、重复性强,具有良好的临床应用前景,但需要在灵长类动物模型中进一步验证其免疫抑制效应及安全性。目的体外培养出CD40L激活的供者食蟹猴B细胞,并诱导受者食蟹猴CD4CD25T细胞转变为抗原特异性Treg。方法将供者食蟹猴PBMCs与钴60-γ射线灭活的稳定转染人CD40L的NIH3T3细胞系（tCD40L-NIH3T3）混合培养,于不同时间点鉴定CD19、MI-ICII、CD80、CD86等活化B细胞的表型。将激活B细胞与受者食蟹猴CD4CD25T细胞以1:1比例混合培养,加入终浓度为100U/ml重组人IL-2、2ng/ml重组人TGF-β和1nM TSA,诱导6d后,鉴定Treg相关表型,并利用CFSE标记测增殖法检测诱导的T细胞对受者及第三方CD4及CD8T细胞活化增殖的抑制作用。结果供者PBMC与tCD40L-NIH3T3混合培养8d1d,B细胞的比例增加并维持在73%以上,且大于95%的B细胞高表达MHCⅡ、CD80和CD86,冻存复苏对活化B细胞的比例和增殖能力无明显影响。受者CD4CD25T细胞与供者活化B细胞混合培养6d后,CD25、Foxp3、CTLA4、CD27、CD127、CD62L、CXCR3、CCR7的表达比例分别为16.39%、14.80%、71.58%、53.62%、20.61%、40.74%、8.23%和3.31%,T细胞增殖2.02倍,存活B细胞比例降至13%。增殖检测结果显示,当反应细胞:刺激细胞:诱导细胞比例分别为1:2:0.5、1:2:0.13、1:2:0.03时,受者CD4T细胞的增殖率分别被抑制73.31%、27.39%和15.92%,CD8T细胞的增殖率无显著降低,诱导细胞对第三方反应细胞的增殖无明显抑制作用。结论改进的T、B细胞混培法能在体外诱导出一定比例的食蟹猴抗原特异性CD4Treg,这为灵长类动物过继输注Treg诱导移植免疫耐受的研究奠定了基础。

关键词：食蟹猴 CD40L 活化B细胞调节性T细胞

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体外诱导imDC高表达HO-1显著增强其免疫负调节能力

体外诱导imDC高表达HO-1显著增强其免疫负调节能力

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第九届全国免疫学学术大会

作者：赵越贾钰王璐陈松黄霞陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

目的:研究钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1高表达对小鼠骨髓来源imDC致耐受性的影响及其体外免疫学机制。方法:采用流式细胞术、Western-blot、激光共聚焦技术等检测经CoPP、SnPP及LPS预处理的小鼠骨髓源性imDC表型及HO-1表达水平,并检测其在体... 详细信息

目的:研究钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1高表达对小鼠骨髓来源imDC致耐受性的影响及其体外免疫学机制。方法:采用流式细胞术、Western-blot、激光共聚焦技术等检测经CoPP、SnPP及LPS预处理的小鼠骨髓源性imDC表型及HO-1表达水平,并检测其在体外抑制CD3/CD28刺激的naive T细胞增殖水平等指标的变化;C57BL/6小鼠经尾静脉过继输注不同处理的BALB/c小鼠来源的imDC(5x106)

关键词：体外诱导高表达小鼠骨髓

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补体抑制为基础的策略克服灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排斥反应

补体抑制为基础的策略克服灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排...

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：王军祥钟山陈松王璐赵光远王筱啸陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

背景:已有研究证明补体抑制为基础的策略能够使供者皮肤预致敏的受者移植肾长期存活和产生"适应".本研究旨在证明采取类似的策略能否使ABO血型不合的肾移植产生同样的效果.方法:因为食蟹猴的ABO血型抗体水平较人类低,所以我...

背景:已有研究证明补体抑制为基础的策略能够使供者皮肤预致敏的受者移植肾长期存活和产生"适应".本研究旨在证明采取类似的策略能否使ABO血型不合的肾移植产生同样的效果.方法:因为食蟹猴的ABO血型抗体水平较人类低,所以我们采用合成的KLH-A抗原致敏B型血食蟹猴,等其血清中抗A抗体水平明显增高后,再与A型血食蟹猴供者配对,施行ABO血型不合肾移植.KLH-A致敏受者分为两组:(1)未治疗组,n=4;(2) CsA+MMF+Pred+Y-CVF治疗组,n=8,云南孟加拉种眼镜蛇毒因子(Y-CVF)术前2天用量为0.05mg/kg,术前1天和术后每2天(0-13天)用量均为0.02mg/kg.

关键词：

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体外诱导imDC高表达HO-1显著增强其免疫负调节能力

体外诱导imDC高表达HO-1显著增强其免疫负调节能力

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：赵越贾钰王璐陈松黄霞陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、教育部/卫生部重点实验室

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Blimp1-短发夹RNA基因转染对骨髓源性树突状细胞前体细胞分化的影响

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中华器官移植杂志 2013年第12期34卷 749-753页

作者：李幸戴晓敏姜汉英周平陈知水宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点实验室器官移植教育部重点实验室武汉430030

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒... 详细信息

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中。实验分为3组：空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体，空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预，实验组培养体系中进行lenti—Blimp1-短发夹RNA干预。转染1周内观察转染效率，观察细胞的形态变化，记录细胞的生长曲线；于培养第4、5天收集细胞，实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况；检测培养第8天CD11c^＋、CD86^＋及主要组织相容性复合物Ⅱ（MHC-Ⅱ）＋细胞的百分率。结果病毒转染后第3天细胞出现荧光，其后荧光持续存在；培养过程中出现典型DC形态，接受病毒转染的细胞有形态受损表现。空白对照组细胞在培养的前3d内呈对数增长，第4天细胞数目达到峰值，为（2．45±0．26）×10^6／孔，第8天为（2．27±0．19）×10^6／孔；空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞，细胞数目稳定在（1．69±0．39）×10^6／孔。空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76％和1％以及105％和74％。在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c^＋细胞分别占（69．2±5．0）％、（68．6±5．9）％和（72．8±5．5）％（P〉0．05）；CD86^＋细胞分别占（51．1±4．9）％、（49．5±4．3）％和（50．2±6．0）％（P〉0．05）；MHC-Ⅱ^＋细胞分别占（56．3±7．3）％、（69．4±4．5）％和（46．5±5．7）％，3组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段；Blimp1基因的下调不影响DC前体细胞的定向分化，但能够抑制DC的成熟。

关键词：树突细胞慢病毒载体小鼠

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小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导扩增和鉴定

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华中科技大学学报（医学版） 2013年第4期42卷 386-390页

作者：马东霞赵越向莹刘斌华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的体外诱导扩增获取大量高纯度的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC),并研究不同生长状态的DC成熟情况及进行生物学特性鉴定。方法以重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4),体外诱导小鼠骨髓细胞分化... 详细信息

目的体外诱导扩增获取大量高纯度的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC),并研究不同生长状态的DC成熟情况及进行生物学特性鉴定。方法以重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4),体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,脂多糖(LPS)刺激24h,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,并分别收集悬浮细胞、贴壁细胞,流式细胞术(FACS)分析DC细胞表面分子CD11c、MHCⅡ类分子、CD80和CD86的表达水平,并应用混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激异基因淋巴细胞增殖的能力。结果经体外诱导培养第3天即可见大量细胞集落形成;培养至第9天,细胞形态不规则,具有典型DC形态。同组悬浮DC表面MHCⅡ类分子和共刺激分子CD80、CD86的表达水平高于贴壁DC。LPS刺激24h后,DC表面MHCⅡ类分子、CD80、CD86的表达水平显著升高,同时可以显著刺激同种异基因淋巴细胞增殖。结论体外简易诱导培养可以获得高纯度小鼠骨髓来源的各具特性的DC,为开展DC的相关实验研究提供大量稳定的细胞来源。

关键词：树突状细胞诱导鉴定

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一氧化碳释放分子2减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤

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中华器官移植杂志 2013年第11期34卷 685-689页

作者：阮永乐王璐赵越王军祥陈松明长生陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨一氧化碳释放分子2（CORM-2）对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用及其效应。方法制备Balb／c小鼠原位肾脏缺血再灌注模型：在32℃下完全阻断小鼠左肾血流40min，然后恢复血流灌注，同时切除小鼠对侧肾脏。小鼠分别于术前1h经尾静... 详细信息

目的探讨一氧化碳释放分子2（CORM-2）对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用及其效应。方法制备Balb／c小鼠原位肾脏缺血再灌注模型：在32℃下完全阻断小鼠左肾血流40min，然后恢复血流灌注，同时切除小鼠对侧肾脏。小鼠分别于术前1h经尾静脉注射CORM-2溶液（CoRM-2组）或失活CORM-2溶液（iCORM-2组），另设假手术组作为对照。再灌注24h后，检测各组小鼠肾功能，取肾脏组织行HE和原位末端转移酶标记染色检查，评价其肾脏组织损伤程度。再灌注1、3、7d后，取小鼠肾脏组织进行免疫组织化学和免疫荧光检测，观察小鼠肾缺血再灌注损伤过程中炎症反应的情况。结果IRI组出现明显肾功能损害，其小鼠血肌酐和尿素氮水平与假手术组相比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；CORM-2组肾功能损害程度减轻，其小鼠血肌酐和尿素氮水平低于IRI组和iCORM-2组（P〈0．05）。常规病理学检查发现，IRI小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞发生凋亡坏死；CORM-2组肾小管上皮细胞的凋亡减轻。IRI组小鼠缺血再灌注损伤早期（再灌注1d和3d），肾脏组织中出现大量MPO阳性中心粒细胞和肿瘤坏死因子α，介导急性炎症反应。CORM-2组MPO阳性中性粒细胞浸润和肿瘤坏死因子α产生明显减少。结论CORM-2可以减轻小鼠肾缺血再灌注中的炎症反应，发挥保护作用。

关键词：缺血再灌注损伤一氧化碳肾

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