检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2005年第2期21卷 92-95,99页

作者：周洁袁劲周鸿敏杜敦峰陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院同济器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用... 详细信息

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能。结果　MACS分选法分选出的CD4 + CD2 5 + T细胞活性>97% ,纯度>95 % ;此方法获得的CD4 + CD2 5 + T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4 + CD2 5 -T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性。结论　MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4 + CD2 5 + T细胞,且不影响细胞活力。CD4 + CD2 5 + T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞免疫磁性分离 AlamarBlue 免疫无能免疫抑制

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抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第2期39卷 197-201页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验章器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移... 详细信息

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水)。ELISA法检测受鼠移植术后第3、6天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6I、FN-γI、L-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。结果①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γI、L-6I、L-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+CD25+Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间。

关键词：心脏移植急性排斥反应白细胞介素6 单克隆抗体

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下调GSK3β通过抑制ITPR1-GRP75-VDAC1复合体功能减轻衰老肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤

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器官移植 2024年第3期15卷 406-414页

作者：倪海强顾世琦彭宣宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室国家卫生健康委员会器官移植重点实验室中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对衰老小鼠原代肾小管上皮细胞(RTEC)缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及其调控机制。方法将RTEC分成为Young组即正常生长的年轻RTEC、Old组即使用Etoposide诱导的衰老RTEC、Old+Ad-shNC+H/R组即使用Etoposid... 详细信息

目的探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对衰老小鼠原代肾小管上皮细胞(RTEC)缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及其调控机制。方法将RTEC分成为Young组即正常生长的年轻RTEC、Old组即使用Etoposide诱导的衰老RTEC、Old+Ad-shNC+H/R组即使用Etoposide诱导衰老再转染腺病毒阴性对照(AdshNC)后进行H/R处理,Old+Ad-shGSK3β+H/R组即使用Etoposide诱导衰老后再转染靶向沉默GSK3β的短发夹RNA腺病毒(Ad-shGSK3β)后进行H/R处理。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平和线粒体活性氧水平,采用免疫荧光染色法检测各组钙离子水平,采用蛋白质印迹法检测各组GSK3β、线粒体相关的内质网膜(MAM)相关蛋白肌醇1,4,5-三磷酸受体1(ITPR1)、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)、葡萄糖调节蛋白75(GRP75)表达及磷酸化水平,采用免疫共沉淀分析GSK3β与MAM相关蛋白的相互作用。结果与Young组比较,Old组细胞凋亡水平、线粒体活性氧水平及线粒体钙离子水平均较高;与Old组比较,Old+AdshNC+H/R组细胞凋亡水平、线粒体活性氧水平及线粒体钙离子水平均较高;与Old+Ad-shNC+H/R组比较,Old+Ad-shGSK3β+H/R组细胞凋亡水平、线粒体活性氧水平及线粒体钙离子水平均较低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与Young组比较,Old组ITPR1、GRP75和GSK3β总蛋白表达增多,ITPR1和GRP75磷酸化水平升高,而VDAC1总蛋白和磷酸化水平均下降;与Old组比较,Old+Ad-shNC+H/R组GSK3β蛋白表达不变,ITPR1和GRP75总蛋白和磷酸化水平升高,VDAC1总蛋白表达不变,磷酸化水平增高;与Old+AdshNC+H/R组比较,Old+Ad-shGSK3β+H/R组GSK3β蛋白表达减少,ITPR1、GRP75和VDAC1总蛋白表达不变,磷酸化水平均下降。免疫共沉淀结果显示,GSK3β能够与ITPR1、GRP75和VDAC1蛋白发生相互作用。结论GSK3β在衰老RTEC中表达升高,抑制GSK3β表达能够降低ITPR1-GRP75-VDAC1复合体磷酸化水平,限制线粒体钙离子超负荷,保护线粒体功能,减少再灌注时细胞损伤。

关键词：糖原合成酶激酶3β 肾移植中老年供者缺血-再灌注损伤线粒体损伤衰老线粒体相关的内质网膜钙超载凋亡

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核糖核酸干扰技术在移植免疫中的应用前景

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 253-254页

作者：朱珉陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基... 详细信息

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基因小鼠上都成功实现了RNAi,更拓宽了这项技术的应用范围.虽然目前RNAi在移植学领域中的相关研究几乎处于空白阶段,但我们可以通过从相关学科RNAi的研究进展中触类旁通,探讨其在移植领域中的应用前景。

关键词：核糖核酸干扰技术移植免疫基因沉默现象哺乳动物细胞病毒载体系统 RNAi 双链RNA 靶基因表达转基因小鼠培养细胞

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建立同种大鼠心脏移植超急性排斥反应动物模型

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 235-236页

作者：李荣郭晖王大卫谢林曾梦华王树森王璐陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏... 详细信息

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏后的受者体内抗供者抗体滴度明显升高。7只受者心脏移植后有6只移植心在24h内被排斥,病理学证实为超急性排斥反应。结论供、受者间连续3次皮肤移植预致敏后,再行心脏移植可以建立稳定的同种移植超急性排斥反应模型。

关键词：心脏移植模型动物移植物排斥大鼠

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抗γc单克隆抗体联合供者特异性输注延长移植物存活

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 199-201页

作者：向芙莉陈必成袁劲吴轲周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单克隆抗体(抗γc单抗)联合供者脾细胞特异性输注(DST)诱导移植物长期存活的可行性及相关机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,组Ⅰ为单纯实施心脏移植组,组Ⅱ于移植前给予DST,组Ⅲ术前予DST联合抗γc单克隆抗体... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单克隆抗体(抗γc单抗)联合供者脾细胞特异性输注(DST)诱导移植物长期存活的可行性及相关机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,组Ⅰ为单纯实施心脏移植组,组Ⅱ于移植前给予DST,组Ⅲ术前予DST联合抗γc单克隆抗体处理,术后观察移植物的存活时间及相关指标。结果组Ⅲ心脏移植物平均存活时间明显长于组Ⅰ及组Ⅱ(P<0.05)。FACS分析显示组Ⅲ受者脾细胞中Tr比例较组Ⅰ及组Ⅱ显著增高(P<0.05),同时脾细胞增殖活性明显减低(P<0.05)。结论抗γ公共链单克隆抗体联合DST通过增加供者体内Tr的比例,减低对同种抗原的应答能力,显著延长同种心脏移植模型中移植物存活时间。

关键词：供者特异性输注抗γ公共链单克隆抗体心脏移植

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探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

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食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞检测ABO血型抗体水平的新方法

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 300-305页

作者：王璐王军祥王筱啸陈松陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTE... 详细信息

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTEC与人血清血型抗体的结合能力以及比较人红细胞与RCTEC测定血型抗体滴度的差异。结果分离得到的肾皮质细胞绝大部分是RCTEC。39．90％～73．80％的RCTEC表达ABO组织-血型抗原，且能与人血清中的血型抗体特异性结合。较长时间冻存对RCTEC的ABO组织-血型抗原表达水平无明显影响，冻存前表达B型抗原的阳性细胞比例为39．90％，冻存10个月后复苏再培养9d，阳性细胞的比例为39．．65％。利用钥孔戚血蓝蛋白偶联的血型抗原A（KLH—A）致敏前后的食蟹猴血清对比原代RCTEC与人红细胞检测血型抗体滴度的效果，结果显示，在RCTEC检测组，未出现凝集现象，与两种血清中抗体结合的几何平均荧光强度（MFI）均在最低血清稀释度（1：16）时最高，其后均随血清稀释度的增加而逐渐降低，未致敏血清的MFI值在稀释度为1：128时降至基线水平，致敏血清的MFI值在1：8192稀释度时降至基线水平，在1：16～1：8192稀释度之间，未致敏血清的MFI值均低于致敏血清；在人红细胞检测组，当抗体滴度高时凝集现象明显，未致敏血清MFI值的最高峰出现在1：64稀释度时，致敏血清MFI值的最高峰出现存1：32稀释度时，且随血清稀释度的增加呈现无明显规律的波动，在1：64～1：512稀释度之间，未致敏血清MFI值高于致敏血清。利用RCTEC检测血型抗体滴度的MFI值能较准确地反映抗体滴度自；变化。结论食蟹猴RCTEC高表达AN）组织-血型抗原，比人红细胞更适用于血清中血型抗体滴度的流式细胞术检测，具有良好的临床与科研应用潜力。

关键词：肾皮质上皮细胞 ABO血型系统肾移植流式细胞术

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雷帕霉素在肾移植后肝功能损害患者中的应用七例

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中华器官移植杂志 2005年第7期26卷 435-436页

作者：张伟杰王海灏明长生陈知水曾凡军林正斌刘斌徐崇松聂明张成德华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肾移植术后发生肝功能损害时使用雷帕霉素治疗的有效性和安全性.方法 7例患者肾移植术后均采用以环孢素A(CsA)为基础的免疫抑制方案,发生肝功能损害后,除采取常规护肝治疗外,根据肝功能的受损程度,以雷帕霉素替代CsA,或加用雷... 详细信息

目的探讨肾移植术后发生肝功能损害时使用雷帕霉素治疗的有效性和安全性.方法 7例患者肾移植术后均采用以环孢素A(CsA)为基础的免疫抑制方案,发生肝功能损害后,除采取常规护肝治疗外,根据肝功能的受损程度,以雷帕霉素替代CsA,或加用雷帕霉素,同时CsA减量.结果肝功能损害的发生时间,3例为术后2～3周,4例为术后4～10个月.经过采取上述措施,6例肝功能恢复正常,1例死亡.迄今随访3～13个月,肝功能未再出现异常.6例患者在治疗及随访期间肾功能均正常,未发生急性排斥反应.结论肾移植术后发生肝功能损害时,使用雷帕霉素治疗是安全和有效的.

关键词：肾移植肝功能衰竭雷帕霉素

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反义细胞外信号调节激酶对移植物血管的保护作用

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中华器官移植杂志 2006年第2期27卷 99-101页

作者：董冲陈知水宫念樵陈曦林郭晖华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨反义细胞外信号调节激酶(ERK1/2)基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1/2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1/2基因转染;腹主动脉移植术... 详细信息

目的探讨反义细胞外信号调节激酶(ERK1/2)基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1/2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1/2基因转染;腹主动脉移植术后1个月内受者每日从尾静脉或阴茎背静脉注入经脂质体包装的反义ERK1/2寡核苷酸100μl。对照组移植未经任何处理的血管段,移植后也无特殊处理。移植术后60d取移植段主动脉进行组织病理学观察内膜和胶原纤维变化;免疫组织化学法观察移植段血管ERK1/2基因的表达和CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润情况;ELISA法检测血清中细胞间粘附分子(ICAM-1)的变化。结果移植术后60d,对照组的移植动脉呈慢性移植物血管病表现,血管内膜显著增厚,移植血管中ERK1/2基因高表达,CD4+、CD8+T淋巴细胞大量浸润;反义ERK1/2基因治疗组移植动脉呈血管内膜炎改变,ERK1/2基因表达不明显,内膜有少量CD4+、CD8+T淋巴细胞;对照组ICAM-1表达显著高于反义ERK1/2治疗组(P<0.05)。结论反义ERK1/2基因治疗对移植物血管具有保护作用,可以减缓慢性移植物血管病的发生,这种保护机制可能和减少ICAM-1的表达以及减少移植血管T淋巴细胞的浸润有关。

关键词：细胞外信号调节激酶类移植物外周血管病

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