检索结果-内蒙古大学图书馆

中华器官移植杂志 2008年第9期29卷 522-525页

作者：胡枫尹注增王璐谢林向莹徐婧陈松李俊华陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型... 详细信息

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型胶原酶以及2．5g／L胰蛋白酶和0．5g／L DNaseI消化（两步法）分离Sertoli细胞，于37℃、含体积分数为5％CO2的培养箱中培养。采用倒置相差显微镜观察细胞形态，透射电镜进行超微结构鉴定，流式细胞仪检测细胞体外活率，逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子B（TGF-β）及Clusterin的表达，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞的活性。结果猪睾丸经分离、培养，所获得的Sertoli细胞纯度达90％以上。培养后的细胞凋亡率为（2．61±0．96）％，死亡率为（2．12±0．74）％；培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin，而FasL表达较弱。体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21d。结论采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞，该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子。

关键词：塞尔托利细胞细胞培养技术抗原 CD95 转化生长因子β 猪

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在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A的临床研究

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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 724-726页

作者：张伟杰陈栋王海灏明长生曾凡军陈知水林正斌刘斌宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A（CsA）对急性排斥反应发生率及肾功能的影响。方法选择35例肾功能稳定的肾移植受者，其中尸体肾移植23例，亲属活体肾移植12例。除2例为再次肾移植外，其余均为初次肾移植。分别在肾... 详细信息

目的研究在移植肾功能稳定的受者中主动撤除环孢素A（CsA）对急性排斥反应发生率及肾功能的影响。方法选择35例肾功能稳定的肾移植受者，其中尸体肾移植23例，亲属活体肾移植12例。除2例为再次肾移植外，其余均为初次肾移植。分别在肾移植术后6个月～6年时停用CsA，平均为术后（13．3±9．1）个月。撤除CsA后免疫抑制方案为：霉酚酸酯（MMF）＋西罗莫司（SRL）＋泼尼松（Pred）。撤除CsA前有9例做了移植肾穿刺活检，8例测定了抗HLA抗体。结果对35例受者随访6个月～4．5年，平均14．8个月。撤除CsA前、后血肌酐平均值分别为（88．1±15．5）μmol／L和（92．3±23．7）μmol／L（P〉0．05）。撤除CsA后，有2例经活检证实发生急性排斥反应，治疗后均逆转；CsA所致的毒副作用，如牙龈增生、糖耐量异常和多毛症等明显改善。9例移植肾活检中，有3例肾功能正常的受者已出现轻度慢性移植肾肾病表现。抗HLA抗体检测中，7例阴性者在撤除CsA前、后肾功能无明显变化，1例抗HLA抗体呈强阳性者在撤除CsA后进展为慢性移植肾肾病，恢复血液透析。结论对移植‘肾功能稳定的受者在移植6个月后撤除CsA，转换为“霉酚酸酯＋西罗莫司＋泼尼松”的免疫抑制方案是安全的，不增加急性排斥反应风险；撤除CsA有利于消除一些与其相关的毒副作用；对抗HLA抗体呈强阳性者，撤除CsA后很难改变肾功能的进展。

关键词：肾移植环孢菌素移植物排斥肾功能试验

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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 708-711,F0003页

作者：徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。

关键词：核转录因子κB启动子双顺反子 p27基因真核表达载体细胞周期

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移植肾间室综合征四例报道

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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 730-732页

作者：陈栋张伟杰曾凡军陈知水明长生刘斌陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨移植肾间室综合征的诊断方法和处理原则。方法分析和总结4例患者发生移植肾间室综合征的危险因素以及诊断和处理方法。结果2例由于腹胀，1例由于腰骶部垫起，1例由于再次肾移植盆腔容积狭小，腹壁张力增高而导致腹膜后压力升高... 详细信息

目的探讨移植肾间室综合征的诊断方法和处理原则。方法分析和总结4例患者发生移植肾间室综合征的危险因素以及诊断和处理方法。结果2例由于腹胀，1例由于腰骶部垫起，1例由于再次肾移植盆腔容积狭小，腹壁张力增高而导致腹膜后压力升高，压迫移植肾，引起移植肾血液循环障碍，导致移植肾功能紊乱。彩色多普勒超声检查提示移植肾皮质血流减少，移植。肾各级动脉血流速度降低和阻力指数增高。经迅速解除引起腹膜后压力升高的危险因素，减轻腹膜后的压力，改善移植肾微循环，4例移植肾间室综合征患者的肾功能均恢复正常。结论移植肾问室综合征是肾移植术后的一种近期并发症，彩色多普勒超声检查可明确诊断；确诊后应紧急减轻腹膜后的压力，解除移植肾受压可改善患者的预后。

关键词：肾移植移植肾间室综合征超声检查多普勒彩色

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转化生长因子-β1联合白细胞介素-2体外诱导非肥胖糖尿病小鼠调节性T细胞的产生

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中华实验外科杂志 2008年第1期25卷 45-47页

作者：吴轲徐逸昌盛吴丁安陈忠华张伟杰华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的体外诱导非肥胖糖尿病（NOD）小鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的产生并检测其免疫抑制功能。探讨外源性白细胞介素（IL）-2在诱导方案中的作用。方法分选NOD小鼠童贞T细胞（NmveT），利用Anti—CD3、Anti—CD28刺激... 详细信息

目的体外诱导非肥胖糖尿病（NOD）小鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的产生并检测其免疫抑制功能。探讨外源性白细胞介素（IL）-2在诱导方案中的作用。方法分选NOD小鼠童贞T细胞（NmveT），利用Anti—CD3、Anti—CD28刺激，同时给予转化生长因子-β1（TGF—B1）和白细胞介素-2（IL-2），共同培养5d，收获诱导性Treg（iTreg），经流式细胞仪检测其表型。利用体外T细胞增殖体系，对比NOD小鼠天然Treg（nTreg），评价iTreg的免疫抑制能力。将诱导方案中的IL-2撤除以观察其作用。结果TGF-β1联合IL-2能诱导NOD小鼠NaiveT转化为iTreg，较对照组有统计学意义[（41．33±3．21）％比（8．00±3．00）％，P〈0．05]。iTreg可有效抑制T细胞增殖，其能力与nTreg的差异无统计学意义[（40．33±1．03）％比（38．33±3．06），P〉0．05]。外源性IL-2有利于iTreg的产生[（41．33±3．21）％比（15．00±1．00）％，P〈0．05]。结论TGF-β1联合IL-2可在体外诱导Naive T转化为具有免疫抑制功能的Treg。

关键词：糖尿病 TGF-β1 IL-2 T细胞

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转录因子诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞抑制人补体介导的异种细胞毒作用

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中华器官移植杂志 2008年第10期29卷 594-597页

作者：黄亚冰王璐尹注增李荣郭晖陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨转录因子SP，诱骗性寡核苷酸（decoyODNs）转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV40-PED分为3组。转染组：SV-40PED转染了SP，decoyODNs；错配组：S驴4D—... 详细信息

目的探讨转录因子SP，诱骗性寡核苷酸（decoyODNs）转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV40-PED分为3组。转染组：SV-40PED转染了SP，decoyODNs；错配组：S驴4D—PED转染了错配的decoyODNs；空转染组：SV-40PED仅用转染试剂oligofectamine作用。转染后26h，采用细胞爬片免疫荧光技术、蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应及乳酸脱氢酶释放试验进行检测，分别观察各组SV40-PED胞膜a半乳糖残基（regal）、蛋白质和α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）mRNA等表达的变化，以及转染了SP，decoyODNs的SV-40PED对人血清补体介导的细胞毒作用的影响。结果转染组SV-40-PED胞膜α—G1的荧光表达明显减弱，部分胞膜可见点状荧光缺损，而空转染组和错配组仍可见明亮的绿色荧光。转染组蛋白表达水平均有不同程度的下降，相对吸光度（A值）仅为未转染组的52．6％。转染组α1，3GT基因异构体1和2mRNA的相对表达量分别为0．42±0．20和0．27±0．12，空转染组分别为0．72±0．17和0．50±0．19，两组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；错配组与空转染组相比，差异无统计学意义（P〉0.05）。体积分数为20％和40％的人血清对空转染组和错配组SV40-PED均有不同程度的杀伤，而对转染组SV-40-PED的杀伤明显减弱（P〈0.，05）。结论经SP，decoyODNs转染的猪血管内皮细胞可以抑制人血清补体介导的异种细胞毒作用。

关键词：转录因子 SP1 寡核苷酸类补体内皮细胞

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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 16-19页

作者：张艳陈栋贡福盛刘健刘晓晴华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的... 详细信息

目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。

关键词： RNA干扰 Caspase-3 基因沉默细胞凋亡

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小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

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中华器官移植杂志 2008年第2期29卷 69-72页

作者：朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofecta... 详细信息

目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。

关键词： RNA干扰半乳糖苷酶类内皮细胞

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Caspase-3和Caspase-8肝脏缺血再灌注损伤基因沉默保护大鼠

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 594-596,682页

作者：陈栋张艳朱珉郭晖刘斌陈刚张伟杰陈知水陈实陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030 综合医疗科

目的观察caspase-3和caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（（IRI）的保护作用。方法分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体。肝脏IRI前48h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体或cas... 详细信息

目的观察caspase-3和caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（（IRI）的保护作用。方法分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体。肝脏IRI前48h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体或caspase-3和caspase．8shRNA。实验随机分为4组，假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组。阻断大鼠70％人肝血流40min，再灌注6、12、24h、3、5、7d检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平，肝组织Caspase-3和caspase-8 mRNA的表达，caspase-3和caspase-8蛋白活性，细胞凋亡情况，丙二醛（MDA）以及超氧化物岐化酶（SOD）的含量。结果与PBS组和空载体组比较，shRNA组再灌注6、12、24h、3、5d血清ALT和AST水平显著降低（P〈0．05），caspase-3和caspase-8mRNA水平、caspase-3和caspase-8蛋白活性（caspase-3活性：0．18±0．03比0．36±0．03和0．38±0．02，P〈0．05；caspase-8活性：0．16±0．03比0．32±0．02和0．34±0．03，P〈0．05）、肝细胞凋亡指数[（22．46±3．25）％比（35．24±2．33）％和（37．36±2．51）％，P〈0．05]和肝组织中MDA含量[（76．2±15．3）比（123．5±12．4）、（136．7±13．6）nmoVmg，P〈0．05）显著降低，SOD活性显著升高[（24．1±3．2）比（12．2±3．1）、（11．4±2．9）U／mg，P〈0．05]。结论caspase．3和caspase．8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生，从而起到保护肝脏IRI的作用。

关键词：肝脏缺血再灌注损伤 Caspase-3 Caspase-8 基因沉默

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α1，3-半乳糖基转移酶基因沉默对NK细胞介导的异种细胞毒作用的影响

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中华器官移植杂志 2008年第8期29卷 460-463页

作者：朱珉祁洪刚曹荣华王璐黄亚冰刘斌林正斌陈知水陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错... 详细信息

目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错配组：PED转染了错配的SiRNA；空转染组：PED未转染SiRNA。观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK92混和培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果PED转染后48h，转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量（个）分别为262±26、275±24和252±23；流动状态下分别为132±12、125±15和110±20，无论是静止还是流动状态下，各组PED对NK92的粘附能力的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。无论PED是否被活化，在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但杀伤率与效靶比呈正相关。NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌，其分泌水平[（366．9±28．7）ng／L]较其自发分泌水平[（60．1±6．4）ng／L]增加了5倍，在共孵育后12h分泌值最高，但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论利用RNA干扰技术下调PED上的α1，3-半乳糖残基（reGal）的表达，未引起NK92和PED相互作用的明显改变。α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点，其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。

关键词： RNA干扰杀伤细胞,天然内皮细胞半乳糖转移酶类

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