检索结果-内蒙古大学图书馆

中国现代医学杂志 2006年第1期16卷 21-23页

作者：董冲刘云宫念樵陈曦林唐莉朱国超陈知水叶启发华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部/卫生部重点实验室湖北武汉430030 中南大学湘雅三医院器官移植研究院湖南长沙410008

目的正义基因反向克隆法构建大鼠anti-ERK2腺病毒载体。方法酶切质粒p3XFLAG-CMV7.1-ERK2,得到ERK2cDNA片段,连接到T载体进行测序,经测序正确反向克隆法插入质粒pShuttle中,最后转入AdEasy(tm)XLAdenoviralVectorSystem系统中得到anti-ERK2基因腺病毒载体。结果DraI和NotI双酶切鉴定anti-ERK2基因腺病毒载体,发现插入的基因序列与插入方向均符合预期目标。结论成功构建了大鼠anti-ERK2腺病毒载体,为研究移植排斥中ERK2基因治疗的作用提供了良好工具。

关键词：反向克隆 anti—ERK2 腺病毒载体

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抗HBsAg-Fab重组体在小鼠肝脏的表达

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世界华人消化杂志 2006年第16期14卷 1554-1560页

作者：唐莉曾志贵潘桃袁劲陈必成陈忠华陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部/卫生部重点实验室湖北省武汉市430030 温州医学院附属第一医院移植中心浙江省温州市325000

目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清... 详细信息

目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清和肝、肾、脾等组织标本,运用RT-PCR,ELISA和免疫组织化学染色等方法从基因和蛋白水平分析基因工程抗体人抗 HBsAg-Fab在体内的表达能力．结果:尾静脉液压注射pXXUF1-HBs-Fab组小鼠血清中证实了人源性Fab蛋白的分泌性表达,各实验组血清中表达量分别为201．3± 13．7、213．1±13．5、513．6±12．8和954．1± 12．7μg／L,并具有与HBsAg特异性结合的活性,蛋白表达与注射质粒剂量有正相关(r= 0．912,P<0．01);对照组和空白组血清中则未测到目的蛋白．实验组肝、肾、脾组织RT-PCR 检测可见肝组织中有Fd重链及κ轻链的mRNA 表达;免疫组织化学检测显示肝细胞胞质中有棕黄色阳性颗粒,且部分肾小球毛细血管腔内壁和肾脏集合管壁可见附着的Fab蛋白, 肾实质细胞及脾脏均未见Fd重链及κ轻链的 mRNA和目的蛋白表达;对照组和空白组均未检測到目的蛋白．结论:pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝脏分泌表达人抗HBsAg-Fab重组体,其表达水平与质粒DNA注射剂量存在正相关关系,并可通过肾小球滤过代谢．

关键词：真核表达小分子抗体乙肝表面抗原小鼠

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胰肾同期联合移植治疗糖尿病合并尿毒症37例报告

胰肾同期联合移植治疗糖尿病合并尿毒症37例报告

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中国透析移植研究会第十一届全国学术会议暨首届中国成人胰岛移植国际高峰研讨会

作者：明长生曾凡军陈知水张伟杰林正斌陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室

本文报告了37例胰肾同期移植(SPK)治疗糖尿病合并尿毒症的近期结果及经验.SPK是治疗糖尿病合并尿毒症的有效方法;改进的胰液空肠引流术式更符合生理,手术更简化、安全、可行,可避免胰液膀胱引流引起的尿道远期并发症推荐作为治疗1型和部... 详细信息

本文报告了37例胰肾同期移植(SPK)治疗糖尿病合并尿毒症的近期结果及经验.SPK是治疗糖尿病合并尿毒症的有效方法;改进的胰液空肠引流术式更符合生理,手术更简化、安全、可行,可避免胰液膀胱引流引起的尿道远期并发症推荐作为治疗1型和部分2型糖尿病并发尿毒症的首选术式;MMF+TAC能安全、有效地预防SPK后排斥反应.

关键词：胰肾联合移植糖尿病尿毒症胰液空肠引流术并发症排斥反应

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临床胰腺与胰肾联合移植研究进展

临床胰腺与胰肾联合移植研究进展

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中国透析移植研究会第十一届全国学术会议暨首届中国成人胰岛移植国际高峰研讨会

作者：明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室

胰肾联合移植已成为治疗1型糖尿病、部分2型糖尿病合并尿毒症有效的常规方法胰腺移植的难题是胰外分泌的处理.1966年Kelly等施行的全球首例临床胰肾联合移植,由于难以控制的排斥反应和其它各种严重并发症,移植效果很差.1983年,Cook等首... 详细信息

胰肾联合移植已成为治疗1型糖尿病、部分2型糖尿病合并尿毒症有效的常规方法胰腺移植的难题是胰外分泌的处理.1966年Kelly等施行的全球首例临床胰肾联合移植,由于难以控制的排斥反应和其它各种严重并发症,移植效果很差.1983年,Cook等首次报告胰液膀胱引流(BD)术式,通过检测尿pH值和淀粉酶早期诊断移植胰排斥反应,移植胰1年存活率才有了明显提高.

关键词：胰腺移植胰肾移植排斥反应并发症胰液膀胱引流术

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沙利度胺对小鼠皮肤移植的影响

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医药导报 2006年第8期25卷 725-728页

作者：曾宁唐莉袁劲吴柯周洁胡涛陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的观察沙利度胺对小鼠皮肤移植物存活及生长情况的影响,探讨沙利度胺在抗同种异体排斥反应中的作用。方法建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植模型,将模型小鼠随机分为3组,每组12只,对照组腹腔注射吐温-80溶液+0.9%氯化钠注射液(1... 详细信息

目的观察沙利度胺对小鼠皮肤移植物存活及生长情况的影响,探讨沙利度胺在抗同种异体排斥反应中的作用。方法建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植模型,将模型小鼠随机分为3组,每组12只,对照组腹腔注射吐温-80溶液+0.9%氯化钠注射液(1∶999),200 ***-1.d-1;环孢素A组腹腔注射环孢素A,10 ***-1.d-1;沙利度胺组腹腔注射沙利度胺,200 ***-1.d-1。分别于实验第7,9,11天取小鼠皮肤移植物进行病理检测,观察各组移植物平均存活时间。结果对照组小鼠移植物平均存活时间为8.2 d,环孢素A组平均为13.5 d,沙利度胺组平均为13.2 d,环孢素A组与沙利度胺组均明显高于对照组(P<0.05),环孢素A组与沙利度胺组之间差异无显著性(均P>0.05)。第7,9,11天各组移植皮片病理检测结果显示,随着时间的延长,各组均可见移植皮下淋巴细胞浸润,腺体及毛细血管破坏逐渐加重;其中对照组皮下组织破坏严重,沙利度胺组皮下组织破坏明显减轻,环孢素A组皮下组织破坏最轻。结论沙利度胺能延长Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠皮肤移植物的存活时间,具有一定的临床应用前景。

关键词：沙利度胺移植排斥反应

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可溶性组织相容性抗原-G1抑制人自然杀伤细胞释放穿孔素颗粒酶介导异种排斥反应

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医学研究生学报 2006年第7期19卷 579-582,i0009页

作者：王树森房崇云曾梦华谢林李荣王璐陈松吴雄文陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院免疫学系湖北武汉430030

目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、... 详细信息

目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)技术分别在基因水平和蛋白水平检测sHLA-G1的表达;以人类NK细胞系(NK92)为效应细胞,猪内皮细胞系PED为靶细胞,用β-己糖氨酶释放实验检测sHLA-G1抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶;单四唑(MTT)法检测sHLA-G1抑制NK细胞的杀伤活性。结果:与未加入sHLA-G1的对照组相比,NK92释放的β-己糖氨酶显著减少(P<0.05),且对sHLA-G1组PED的杀伤效率均有明显降低(P<0.01)。结论:sHLA-G1可通过抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶以减轻NK92对PED的杀伤作用。

关键词：可溶性组织相容性抗原-G1 自然杀伤细胞穿孔素颗粒酶移植

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RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用

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中华医学杂志 2005年第16期85卷 1133-1136页

作者：朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi... 详细信息

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果　SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论　PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。

关键词： RNA干扰补体介导流式细胞学检查猪半乳糖转移酶 RNAi 平均荧光强度 PED 细胞毒作用内皮细胞系 SiRNA 抗原表位 GT基因释放实验基因沉默异种移植表达量人血清转染小分子异构体统计学 Gal 溶解率靶细胞相比

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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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