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中华器官移植杂志 2008年第12期29卷 733-736页

作者：丁召宫念樵陈曦林郭晖陈知水陈孝平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾... 详细信息

目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾灌注无菌HTK液0．5ml，空载病毒组供肾灌注含5×10^9pfuLacZ基因腺病毒（Ad-LacZ）的HTK液0．5ml，基因转染组供肾灌注含5×10^9pfuAdantbERK2的HTK液0．5m1。肾移植术后24周行移植肾的病理学观察，免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞的浸润情况；酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β（TGF-β1）的含量。结果肾移植术后24周，对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现；肾小球硬化，肾小管萎缩明显，伴严重间质纤维化以及明显的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少，Vimentin、TβRI表达显著增多。基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常。对照组和空载病毒组血清中TGF-β。含量明显高于基因转染组。结论AdantkERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生，对移植肾具有保护作用。这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关。

关键词：肾移植大鼠细胞外信号调节MAP激酶类

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慢性移植肾肾病的临床病理学特点与免疫抑制剂转换治疗

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中华器官移植杂志 2007年第7期28卷 420-424页

作者：宫念樵明长生郭晖陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨慢性移植肾肾病(CAN)的病理学特点与临床应对策略。方法对20例临床诊断为慢性移植肾功能减退、病理诊断为CAN者的病理资料进行系统分析,依据Banff97标准对肾小球硬化、间质纤维化、肾小管萎缩及小动脉内膜炎等CAN特征性表现进... 详细信息

目的探讨慢性移植肾肾病(CAN)的病理学特点与临床应对策略。方法对20例临床诊断为慢性移植肾功能减退、病理诊断为CAN者的病理资料进行系统分析,依据Banff97标准对肾小球硬化、间质纤维化、肾小管萎缩及小动脉内膜炎等CAN特征性表现进行综合评分后,做出病理诊断和分层分析。20例肾移植后采用以环孢素A(CsA)为基础的免疫抑制方案,诊断为CAN后,3例转换为他克莫司(FK506)与霉酚酸酯(MMF)联用,17例转换为西罗莫司(Sir)与MMF联用,比较转换治疗前后肾功能的变化。结果9例(45%,9/20)合并发生亚临床排斥反应,激素冲击治疗有效;20例均存在间质纤维化、肾小管萎缩与肾小球硬化。慢性移植肾功能减退对转换治疗的反应与间质纤维化和肾小管萎缩的程度无明显相关性,但与肾小球硬化率密切相关,肾小球硬化率低于30%者预后良好,超过50%者移植肾功能丧失。结论肾小球硬化率有可能成为判断CAN病变程度和预后的指标;治疗慢性移植肾功能减退时应重视合并发生的亚临床排斥反应,撤除CsA、采用Sir与MMF联用方案值得推荐。

关键词：肾病移植物活组织检查针吸治疗结果肾移植

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雷帕霉素对肝脏缺血再灌注损伤修复的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第1期37卷 63-65页

作者：孙仁虎曾志贵甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制。方法建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型。将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手... 详细信息

目的应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制。方法建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型。将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手术组;D组(n=12):生理盐水假手术组。给药后第4天对各组小鼠行手术及假手术处理。术后第1天、第4天分批处死各组动物,取出损伤肝组织作组织病理学检测;免疫组织化学方法检测组织内增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达。结果①在术后各检测时间点,A组小鼠肝组织病理学变化明显重于B组,表现为肝细胞有明显肿胀变性,肝板结构紊乱,肝窦结构不清晰,伴有肝细胞坏死;C组及D组未见明显组织病理损伤。②在各时间点,A组小鼠肝组织中PCNA阳性率显著低于B组;而且CyclinD1的阳性率也低于B组,差异有统计学意义(均P<0.05)。C组及D组未见明显PCNA及CyclinD1的表达。结论雷帕霉素阻抑了缺血再灌注损伤肝脏的修复过程,而对正常肝脏无明显损伤作用。

关键词：雷帕霉素缺血再灌注损伤肝再生

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反义ERK2基因对结缔组织生长因子诱导肾小管上皮细胞向间充质转化的调控效应

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第2期38卷 153-157页

作者：丁召陈知水宫念樵陈曦林蔡明郭晖华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应。方法腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定最适感染强度... 详细信息

目的研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应。方法腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定最适感染强度。按作用因素的不同将HK-2细胞分为对照组、Ad-LacZ组、CTGF组和Adanti-ERK2组。免疫组织化学检测E-Cadherin和Vi mentin的表达,Western blot法检测E-Cadherin、Vi mentin及ERK2的表达变化;细胞接种Boyden小室1、3、5 d时检测各组HK-2细胞迁移数目的变化。结果①Adanti-ERK2转染HK-2细胞最适感染强度为100。②HK-2细胞在CTGF刺激下E-Cadherin蛋白表达明显减少,Vi mentin表达增加,同时细胞内的ERK2蛋白表达显著增加;而Adanti-ERK2组E-Cadherin和Vi mentin表达变化不明显,ERK2蛋白表达较对照组明显减少。③接种5 d,HK-2细胞在CTGF刺激下细胞运动能力显著高于其他各组,而Adanti-ERK2组与对照组和Ad-LacZ组相比差异无显著性意义。结论以反义ERK2基因治疗可以有效阻断CTGF诱导的肾小管上皮细胞向间充质转化。提示ERK2信号转导通路在该转化中发挥重要作用。

关键词：反义ERK2基因结缔组织生长因子上皮细胞-间充质转化纤维化

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染料木黄酮在减轻肾间质纤维化中的作用

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中华实验外科杂志 2008年第10期25卷 1326-1328页

作者：何凡蒋继贫徐胜元郑翔陈必成陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部重点实验室武汉430030

目的探讨染料木黄酮（Genistein）在减轻单侧输尿管结扎模型（UUO）诱导肾间质纤维化中的作用及可能机制。方法将30只SD大鼠随机分为5组，A组：假手术＋DMSO1ml／d×14d；B组：假手术＋Genistein每日20mg／kg体重×14d；C组：UU... 详细信息

目的探讨染料木黄酮（Genistein）在减轻单侧输尿管结扎模型（UUO）诱导肾间质纤维化中的作用及可能机制。方法将30只SD大鼠随机分为5组，A组：假手术＋DMSO1ml／d×14d；B组：假手术＋Genistein每日20mg／kg体重×14d；C组：UUO＋DMSO1ml／d×14d；D组：UUO＋Genistein5mg／kg体重每日×14d；E组：UUO＋Genistein20mg／kg体重每日×14d。术后14d比较各组大鼠左／右肾重量和长度的比值；酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清INF-γ和TGF-β1表达；病理观察肾小管扩张和肾间质增生的程度，免疫组织化学观察肾脏α-SMA和ED-1表达。结果C、D、E组左／右肾重量及长度比值均明显高于A、B组，但E组左／右肾重量及长度比值、血清TGF-β1及INF-γ浓度、肾小管扩张分数和肾小管容量分数、α-SMA和ED-1的表达均低于C组。结论染料木黄酮可明显降低由单侧输尿管结扎模型所导致的肾间质纤维化的病理改变，其可能机制是染料木黄酮抑制TGF-β1及INF-γ的表达，从而抑制肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化。

关键词：染料木黄酮肾间质纤维化 TGF-β1

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重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig转染延长同种大鼠心脏移植存活时间

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中华器官移植杂志 2005年第2期26卷 68-71页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖孔强汪道文陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科实验室武汉430030

目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉... 详细信息

目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉全身注射1×109斑点形成单位(PFU)的rAAV-CTLA4Ig.观察移植心存活时间;ELISA法检测血清CTLA4Ig、干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;免疫组织化学法(SABC法)检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润.对移植心存活时间明显延长的受者,用其脾细胞与供者脾细胞进行混合淋巴细胞培养,观察受者对供者的免疫反应状态.结果转染组移植心存活时间较对照组明显延长(P＜0.05);转染组血清CTLA4Ig蛋白一直维持在26.67～35.47 mg/L,移植后转染组血清IFN-γ水平下调,血清IL-4水平上调(P＜0.05);对照组出现典型的急性排斥反应表现,转染组心肌组织基本正常,间质内无炎性细胞浸润或血管外周及心肌间质内有局灶性炎性细胞浸润,未见坏死:对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于转染组(P＜0.01);转染组受者对供者的脾细胞增殖反应明显低于对照组(P＜0.05).结论重组腺相关病毒载体可以介导CTLA4Ig基因的持续表达,通过全身途径转染受者可以明显延长同种移植心的存活时间,降低受者对供者的免疫反应性.

关键词：重组腺相关病毒载体介导 CTLA4Ig 转染大鼠心脏移植

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仿生学在移植免疫研究中的应用

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医学与哲学（B） 2007年第8期28卷 59-60页

作者：朱珉王璐谢林陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植国家教育部卫生部重点实验室湖北武汉430030

世界正在进入仿生学时代。在生命科学领域中进行仿真学研究,将极大地促进人类对生命现象的认知,并揭示其普遍规律。运用仿生学原理在天然模型面前扬其利,避其害,将为科学工作者提供一个崭新的科研思维平台。从仿生角度洞悉并破解移植免... 详细信息

世界正在进入仿生学时代。在生命科学领域中进行仿真学研究,将极大地促进人类对生命现象的认知,并揭示其普遍规律。运用仿生学原理在天然模型面前扬其利,避其害,将为科学工作者提供一个崭新的科研思维平台。从仿生角度洞悉并破解移植免疫奥秘将是一个具有广阔前景的创新源泉。

关键词：仿生学移植耐受

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不成熟树突状细胞体外诱导T细胞表达转录因子Foxp3

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中华器官移植杂志 2007年第6期28卷 339-342页

作者：汤高枫张伟杰陈必成张翔华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 温州医学院附属第一医院移植中心福建医科大学附属第一医院

目的探讨不成熟树突状细胞(imDCs)能否在体外诱导T细胞高表达转录因子Foxp3。方法体外无菌培养BALB/c小鼠骨髓来源的不成熟树突状细胞,并通过脂多糖(LPS)刺激诱导其分化为成熟树突状细胞(miDCs)。在96孔细胞培养板中分别以不成熟树突状... 详细信息

目的探讨不成熟树突状细胞(imDCs)能否在体外诱导T细胞高表达转录因子Foxp3。方法体外无菌培养BALB/c小鼠骨髓来源的不成熟树突状细胞,并通过脂多糖(LPS)刺激诱导其分化为成熟树突状细胞(miDCs)。在96孔细胞培养板中分别以不成熟树突状细胞(imDCs)2×10~4/孔和成熟树突状细胞(mDCs)2×10~4/孔与C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞以1:5、1:10、1:50、1:100的比例共同培养6 d。流式细胞术检测混合培养6 d后的淋巴细胞CD4、CD25及转录因子Foxp3的表达。结果imDCs及mDCs和淋巴细胞混合培养6 d后,淋巴细胞表面CD25的表达水平较正常淋巴细胞明显升高(P<0.05);mDCs与淋巴细胞混和培养6 d后,淋巴细胞表达Foxp3的水平与正常淋巴细胞差异无统计学意义(P>0.05),而用imDCs诱导则可使淋巴细胞表达Foxp3显著升高(P<0.05)。结论imDCs可以在体外诱导T细胞上调转录因子Foxp3的表达。

关键词：树突细胞 T淋巴细胞,辅助诱导

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染料木黄酮的免疫调节作用及其在器官移植中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 689-691页

作者：朱国超陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室湖北武汉430030

染料木黄酮(genistein,Gen)是从大豆中提取的异黄酮类化合物,其化学名为4',5,7-三羟基异黄酮。Akiyama等于1987年发现Gen是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂,且具有抗肿瘤、抑制血管生成、抗氧化、抑制细胞免疫和... 详细信息

染料木黄酮(genistein,Gen)是从大豆中提取的异黄酮类化合物,其化学名为4',5,7-三羟基异黄酮。Akiyama等于1987年发现Gen是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂,且具有抗肿瘤、抑制血管生成、抗氧化、抑制细胞免疫和体液免疫以及调节细胞凋亡等作用。其作用机制涉及抑制酪氨酸蛋白激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)及DNA拓扑异构酶Ⅱ活性、激活抗氧化酶、消除氧自由基形成及具有植物雌激素的作用等,由于染料木黄酮具有免疫抑制作用以及可有效地抑制多种慢性疾病,故在器官移植中具有广阔的应用前景。[第一段]

关键词：染料木黄酮免疫抑制器官移植植物雌激素

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RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

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中华肝胆外科杂志 2010年第10期16卷 767-769页

作者：陈栋张艳郭晖刘斌陈刚张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科

目的观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体... 详细信息

目的观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛（MDA）以及超氧化物岐化酶（SOD）含量.结果与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低（P＜0.05）,Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平（56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05）、肝组织中MDA含量（93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05）显著降低,SOD活性显著升高（22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05）.结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.

关键词：再灌注损伤肝脏肿瘤坏死因子 Kupffer细胞 RNA干扰

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