检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2005年第16期85卷 1133-1136页

作者：朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi... 详细信息

目的　评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法　将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果　SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论　PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。

关键词： RNA干扰补体介导流式细胞学检查猪半乳糖转移酶 RNAi 平均荧光强度 PED 细胞毒作用内皮细胞系 SiRNA 抗原表位 GT基因释放实验基因沉默异种移植表达量人血清转染小分子异构体统计学 Gal 溶解率靶细胞相比

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小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3^-T细胞凋亡

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第2期30卷 144-149页

作者：何文涛袁劲徐逸周鸿敏蔡兰军郭晖李超左利群宫念樵陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科

目的构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法常规分子克隆方法结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000... 详细信息

目的构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法常规分子克隆方法结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒***密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3^＋ T细胞的比例.结果重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3^＋ T细胞的比例.结论重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.

关键词：半乳糖凝集素-9 胞内染色凋亡 T细胞

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肾移植术后新生HLA-DQ抗体的临床意义

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中华医学杂志 2014年第42期94卷 3284-3288页

作者：朱兰陈刚谢林汪芯王大卫林正斌明长生陈孝平陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部重点实验室武汉430030

目的探讨临床肾移植术后新生HLA-DQ抗体的产生规律及临床意义.方法入选2012年1月至2013年12月期间在华中科技大学同济医学院附属同济医院长期随访的175例初次肾移植受者,移植前微量淋巴毒和群体反应性抗体（PRA）均为阴性,入组时间在... 详细信息

目的探讨临床肾移植术后新生HLA-DQ抗体的产生规律及临床意义.方法入选2012年1月至2013年12月期间在华中科技大学同济医学院附属同济医院长期随访的175例初次肾移植受者,移植前微量淋巴毒和群体反应性抗体（PRA）均为阴性,入组时间在肾移植术后6～18年（平均10年）.根据入组时移植肾功能分为3组：（1）移植肾功能正常的对照组（n=94）：血肌酐＜120 μmol/L;（2）慢性移植肾功能减退组（n=54）：血肌酐持续＞150μmol/L达6个月以上,但尚未透析;（3）移植肾失功能组（n=27）：患者恢复血液透析.所有病例在入组时收集血清,采用流式PRA或Luminex方法进行HLA抗体初筛,抗体阳性者进一步行Luminex单抗原包被的微球法检测分别针对HLA-A、B、DR、DQ位点的抗体水平.结果（1） HLA抗体的出现与慢性移植肾功能不全密切相关.慢性移植肾功能减退组HLA抗体阳性的出现率为48％（26/54）,移植肾失功能组为52％（14/27）,而对照组的HLA抗体阳性率只有17％（16/94）（P＜0.01）.（2）在3组HLA抗体阳性的病例中,相比于HLA-DR、HLA-Ⅰ类抗体,HLA-DQ抗体的出现频率均最高,在对照组、慢性移植肾功能减退组、移植肾失功能组分别为14/16、24/26及14/14,此外,HLA-DQ抗体的平均荧光强度也最高.（3） HLA-DQ抗体在对照组的HLA抗体阳性病例中以单独出现为主（10/16）,而在慢性移植肾功能减退组和移植肾失功能组都多数伴随有HLA-DR抗体和Ⅰ类抗体（17/26、14/14）,显示单独出现的HLA-DQ抗体与慢性移植肾功能不全没有直接相关性,而DQ抗体合并DR和（或）Ⅰ类抗体同时出现与慢性移植肾功能减退和失功能有关（均P＜0.05）.结论从移植肾功能状态而言,HLA-DQ抗体往往先于其他位点的抗体出现.在临床移植肾功能尚稳定时,早期发现HLA-DQ抗体对预警免疫系统的特异性激活及后者所致的慢性移植肾功能减退或失功能具有重要意义.监测HLA-DQ抗体将为早期干预治疗和去除免疫危险因素提供第一时机.

关键词：肾移植移植物排斥 HLA-DQ抗体同种异体抗体慢性移植肾功能不全

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肝癌患者肝移植术后早期激素撤离对肿瘤复发的影响

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中华器官移植杂志 2006年第3期27卷 156-159页

作者：陈知水何凡曾凡军明长生蒋继贫杜敦峰刘斌张伟杰刘敦贵陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨肝癌患者肝移植术后激素撤离对肿瘤复发的影响。方法对54例中、晚期原发性肝癌患者施行了肝移植,术后根据3个月内是否撤离激素分为激素撤离组(28例)和激素维持组(26例)。比较两组间排斥反应发生率、半年及1年的肿瘤复发率、1年... 详细信息

目的探讨肝癌患者肝移植术后激素撤离对肿瘤复发的影响。方法对54例中、晚期原发性肝癌患者施行了肝移植,术后根据3个月内是否撤离激素分为激素撤离组(28例)和激素维持组(26例)。比较两组间排斥反应发生率、半年及1年的肿瘤复发率、1年存活率、血他克莫司(FK506)浓度及生化指标的平均值,运用统计学方法分析两组间差异。结果激素撤离组和激素维持组排斥反应发生率、半年肿瘤复发率、1年存活率相比,差异无统计学意义;激素维持组1年肿瘤复发率明显高于激素撤离组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后半年,两组FK506浓度的差异无统计学意义。术后1周及术后半年,两组丙氨酸转氨酶、胆红素总量及肌酐分别相比,差异均无统计学意义。术后半年,两组胆固醇总量、中餐前血糖水平相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌患者肝移植术后3个月内撤离激素是安全的,并不增加排斥反应的发生率,也不需要增加其它免疫抑制剂的用量,可明显降低肿瘤复发率,提高患者的长期存活率。

关键词：肝移植肿瘤复发,局部激素肝肿瘤

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体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 559-563页

作者：廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/教育部器官移植重点实验室/卫生部器官移植重点实验室

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC... 详细信息

目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。

关键词：酶联免疫斑点法 B淋巴细胞 HLA抗体美洲商陆丝裂原

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小鼠CD4^+CD25^+T细胞的分离、鉴定和体外功能的检测

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 92-95,99页

作者：周洁袁劲周鸿敏杜敦峰陈必成昌盛陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院同济器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用... 详细信息

目的　建立CD4 + CD2 5 + T细胞的免疫磁性分离(MACS)方法,并检测其体外免疫抑制功能。方法　分离C5 7BL 6小鼠和Balb c小鼠脾脏细胞后运用MACS法分离CD4 + CD2 5 + T淋巴细胞,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,用淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能。结果　MACS分选法分选出的CD4 + CD2 5 + T细胞活性>97% ,纯度>95 % ;此方法获得的CD4 + CD2 5 + T细胞在体外不增殖,经丝裂原活化后可以抑制同品系小鼠和异品系小鼠的CD4 + CD2 5 -T细胞增殖,这种抑制作用具有剂量依赖性。结论　MACS法可简单迅速分选出高纯度无菌CD4 + CD2 5 + T细胞,且不影响细胞活力。CD4 + CD2 5 + T调节性细胞在体外具有免疫无能和免疫抑制作用;丝裂原活化的该细胞免疫抑制功能具有剂量依赖性,但不具有抗原特异性。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞免疫磁性分离 AlamarBlue 免疫无能免疫抑制

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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

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中华医学杂志 2006年第21期86卷 1460-1463页

作者：李荣陈刚郭晖王大卫谢琳王树森王婉瑜熊郁良陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030 中国科学院昆明动物研究所毒素室

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给... 详细信息

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子（Y-CVF）对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组，实验组（n=8）于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg／kg；对照组（n=7）不用Y-CVF。观察移植心的生存时间，移植心停跳后病理学检查排斥类型，免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1：1028～1：2056。对照组移植心存活时间为12．71h±13．94h，实验组移植心存活时间为99．50h±38．72h，与对照组比较差异有统计学意义（t=5．599，P〈0．01）。病理检查结果证实，实验组均未发生急性体液排斥，仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性，C3染色对照组为阳性，而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。

关键词：眼镜蛇毒素心脏移植移植排斥

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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建立同种大鼠心脏移植超急性排斥反应动物模型

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 235-236页

作者：李荣郭晖王大卫谢林曾梦华王树森王璐陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏... 详细信息

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏后的受者体内抗供者抗体滴度明显升高。7只受者心脏移植后有6只移植心在24h内被排斥,病理学证实为超急性排斥反应。结论供、受者间连续3次皮肤移植预致敏后,再行心脏移植可以建立稳定的同种移植超急性排斥反应模型。

关键词：心脏移植模型动物移植物排斥大鼠

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