检索结果-内蒙古大学图书馆

中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 253-254页

作者：朱珉陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基... 详细信息

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基因小鼠上都成功实现了RNAi,更拓宽了这项技术的应用范围.虽然目前RNAi在移植学领域中的相关研究几乎处于空白阶段,但我们可以通过从相关学科RNAi的研究进展中触类旁通,探讨其在移植领域中的应用前景。

关键词：核糖核酸干扰技术移植免疫基因沉默现象哺乳动物细胞病毒载体系统 RNAi 双链RNA 靶基因表达转基因小鼠培养细胞

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探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

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食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞检测ABO血型抗体水平的新方法

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 300-305页

作者：王璐王军祥王筱啸陈松陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTE... 详细信息

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTEC与人血清血型抗体的结合能力以及比较人红细胞与RCTEC测定血型抗体滴度的差异。结果分离得到的肾皮质细胞绝大部分是RCTEC。39．90％～73．80％的RCTEC表达ABO组织-血型抗原，且能与人血清中的血型抗体特异性结合。较长时间冻存对RCTEC的ABO组织-血型抗原表达水平无明显影响，冻存前表达B型抗原的阳性细胞比例为39．90％，冻存10个月后复苏再培养9d，阳性细胞的比例为39．．65％。利用钥孔戚血蓝蛋白偶联的血型抗原A（KLH—A）致敏前后的食蟹猴血清对比原代RCTEC与人红细胞检测血型抗体滴度的效果，结果显示，在RCTEC检测组，未出现凝集现象，与两种血清中抗体结合的几何平均荧光强度（MFI）均在最低血清稀释度（1：16）时最高，其后均随血清稀释度的增加而逐渐降低，未致敏血清的MFI值在稀释度为1：128时降至基线水平，致敏血清的MFI值在1：8192稀释度时降至基线水平，在1：16～1：8192稀释度之间，未致敏血清的MFI值均低于致敏血清；在人红细胞检测组，当抗体滴度高时凝集现象明显，未致敏血清MFI值的最高峰出现在1：64稀释度时，致敏血清MFI值的最高峰出现存1：32稀释度时，且随血清稀释度的增加呈现无明显规律的波动，在1：64～1：512稀释度之间，未致敏血清MFI值高于致敏血清。利用RCTEC检测血型抗体滴度的MFI值能较准确地反映抗体滴度自；变化。结论食蟹猴RCTEC高表达AN）组织-血型抗原，比人红细胞更适用于血清中血型抗体滴度的流式细胞术检测，具有良好的临床与科研应用潜力。

关键词：肾皮质上皮细胞 ABO血型系统肾移植流式细胞术

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反义细胞外信号调节激酶对移植物血管的保护作用

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中华器官移植杂志 2006年第2期27卷 99-101页

作者：董冲陈知水宫念樵陈曦林郭晖华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨反义细胞外信号调节激酶(ERK1/2)基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1/2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1/2基因转染;腹主动脉移植术... 详细信息

目的探讨反义细胞外信号调节激酶(ERK1/2)基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1/2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1/2基因转染;腹主动脉移植术后1个月内受者每日从尾静脉或阴茎背静脉注入经脂质体包装的反义ERK1/2寡核苷酸100μl。对照组移植未经任何处理的血管段,移植后也无特殊处理。移植术后60d取移植段主动脉进行组织病理学观察内膜和胶原纤维变化;免疫组织化学法观察移植段血管ERK1/2基因的表达和CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润情况;ELISA法检测血清中细胞间粘附分子(ICAM-1)的变化。结果移植术后60d,对照组的移植动脉呈慢性移植物血管病表现,血管内膜显著增厚,移植血管中ERK1/2基因高表达,CD4+、CD8+T淋巴细胞大量浸润;反义ERK1/2基因治疗组移植动脉呈血管内膜炎改变,ERK1/2基因表达不明显,内膜有少量CD4+、CD8+T淋巴细胞;对照组ICAM-1表达显著高于反义ERK1/2治疗组(P<0.05)。结论反义ERK1/2基因治疗对移植物血管具有保护作用,可以减缓慢性移植物血管病的发生,这种保护机制可能和减少ICAM-1的表达以及减少移植血管T淋巴细胞的浸润有关。

关键词：细胞外信号调节激酶类移植物外周血管病

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肾移植患者发生移植肾功能延迟恢复的危险因素分析及预测

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中华器官移植杂志 2006年第8期27卷 456-459页

作者：陈杰曾凡军金昊明长生陈知水张伟杰林正斌刘敦贵陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究肾移植患者发生移植肾功能延迟恢复(DGF)的相关危险因素及预测方法。方法回顾性分析212例具有完整人类白细胞抗原(HLA)配型资料的尸体肾移植患者的临床资料,对患者的性别、年龄、血型、乙型肝炎病毒感染情况、心功能分级、是否... 详细信息

目的研究肾移植患者发生移植肾功能延迟恢复(DGF)的相关危险因素及预测方法。方法回顾性分析212例具有完整人类白细胞抗原(HLA)配型资料的尸体肾移植患者的临床资料,对患者的性别、年龄、血型、乙型肝炎病毒感染情况、心功能分级、是否再次移植、透析时间长短、HLA配型情况、供肾热缺血时间、供肾冷缺血时间以及血管开放后泌尿时间进行严格的记录和评估。用一元logistic回归方法初步找出与DGF发生相关的因素,再用多元逐步logistic回归方法找出导致DGF发生的各项高危险因素,建立移植肾功能延迟恢复的logistic回归模型。结果本组患者DGF发生率为16.51%。由一元logistic回归方法分析发现在α=0.05的水准上,DGF与心功能分级、透析时间、HLA-Ⅰ类错配、HLA总错配及移植肾冷缺血时间有关,但与是否再次移植、性别、年龄、血型、乙型肝炎病毒感染情况、肾脏热缺血时间、血管开放后泌尿时间等均无明显的相关性。用多元逐步lo-gistic回归分析方法发现患者心功能分级、HLA-Ⅰ类抗原错配和移植肾冷缺血时间是影响DGF的重要因素。结论DGF的发生不是移植肾冷保存时间过长或其它任何单一因素导致的,而是由供肾质量、免疫学因素和受者功能状况等多种因素决定的。应用DGF的多元回归预测模型,可以计算出患者发生DGF的概率,从而进行必要的临床干预,预防DGF的发生。

关键词：肾移植危险因素 Logistic模型

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肝胰十二指肠器官簇移植(附一例报道)

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中华器官移植杂志 2005年第6期26卷 325-328页

作者：陈知水魏来刘敦贵杜敦峰明长生曾凡军张伟杰林正斌蒋继贫陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院器官移植教育部卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常... 详细信息

目的探讨肝胰十二指肠联合移植术治疗1例原发性肝癌合并胰头转移的疗效。方法2004年9月,对1例原发性肝癌合并胰头转移的患者行病肝、全胰腺十二指肠、远端胃及脾脏切除后,进行肝胰十二指肠原位器官簇移植。结果移植术后胰腺功能恢复正常,未应用胰岛素维持;术后1周肝功能恢复正常。患者目前已存活5个月,肝脏和胰腺功能均正常,未发生排斥反应,未见肿瘤复发迹象,一般情况好。结论肝胰十二指肠器官簇移植为上腹部晚期恶性肿瘤患者提供了延长生命的机会,同时更为晚期肝病伴有胰腺功能不良患者的彻底治愈探索出新的手术术式。

关键词：胰十二指肠器官簇原发性肝癌胰腺十二指肠恶性肿瘤患者联合移植术 2004年肝功能恢复生排斥反应移植术后胰腺功能肿瘤复发手术术式功能不良晚期肝病切除后远端胃胰岛素上腹部转移胰头

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凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和***+细胞中仅部分细胞表达***刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

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核因子-κB抑制剂熊果酸延长小鼠心脏移植物存活时间

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武汉大学学报（医学版） 2011年第1期32卷 20-23,F0002页

作者：刘勇李尧李超黄霞薛承彪胡昕鹏杨涛周平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所/卫生部器官移植重点实验室/器官移植教育部重点实验室湖北武汉430030

目的:研究熊果酸对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的作用。方法:体外实验:CD3、CD28单抗刺激B6小鼠T细胞,实验组加入不同浓度的熊果酸。24h后检测P65核转位程度;48h后检测T细胞表面CD25、CD69表达情况。体内实验:熊果酸用0.5%羧甲基纤维... 详细信息

目的:研究熊果酸对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的作用。方法:体外实验:CD3、CD28单抗刺激B6小鼠T细胞,实验组加入不同浓度的熊果酸。24h后检测P65核转位程度;48h后检测T细胞表面CD25、CD69表达情况。体内实验:熊果酸用0.5%羧甲基纤维素钠混悬。行BALB/c到B6的小鼠心脏移植。实验组使用10mg/(kg·d)、30mg/(kg·d)的熊果酸灌胃。对照组使用相同剂量的0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。观察术后7d时移植心CD4+、CD8+T细胞浸润情况,IFN-γ、IL-4mRNA水平和移植心存活时间。结果:熊果酸剂量依赖性抑制P65核转位。25μmol/L的熊果酸可将T细胞表面的CD25下调92.4%,CD69下调89.3%。10mg/(kg·d)熊果酸可将移植心平均存活时间(MST)延长至(23.8±1.3)d[P<0.05,与对照组(7.4±0.3)d相比]。而30mg/(kg·d)的熊果酸可将MST延长至(68.5±2.8)d。熊果酸组移植心内CD4+和CD8+T细胞浸润数量显著减少(P<0.05,与对照组比较),且IFN-γmRNA水平显著下调(P<0.05,与对照组比较),而IL-4mRNA水平无明显变化。结论:熊果酸可抑制T细胞NF-κB活化。体内应用熊果酸能显著延缓同种异体移植心排斥时间,这与熊果酸抑制T细胞活化,下调Th1反应相关。

关键词： NF-κB 心脏移植排斥反应 T细胞活化

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Blimp1-短发夹RNA基因转染对骨髓源性树突状细胞前体细胞分化的影响

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中华器官移植杂志 2013年第12期34卷 749-753页

作者：李幸戴晓敏姜汉英周平陈知水宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点实验室器官移植教育部重点实验室武汉430030

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒... 详细信息

目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中。实验分为3组：空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体，空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预，实验组培养体系中进行lenti—Blimp1-短发夹RNA干预。转染1周内观察转染效率，观察细胞的形态变化，记录细胞的生长曲线；于培养第4、5天收集细胞，实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况；检测培养第8天CD11c^＋、CD86^＋及主要组织相容性复合物Ⅱ（MHC-Ⅱ）＋细胞的百分率。结果病毒转染后第3天细胞出现荧光，其后荧光持续存在；培养过程中出现典型DC形态，接受病毒转染的细胞有形态受损表现。空白对照组细胞在培养的前3d内呈对数增长，第4天细胞数目达到峰值，为（2．45±0．26）×10^6／孔，第8天为（2．27±0．19）×10^6／孔；空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞，细胞数目稳定在（1．69±0．39）×10^6／孔。空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76％和1％以及105％和74％。在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c^＋细胞分别占（69．2±5．0）％、（68．6±5．9）％和（72．8±5．5）％（P〉0．05）；CD86^＋细胞分别占（51．1±4．9）％、（49．5±4．3）％和（50．2±6．0）％（P〉0．05）；MHC-Ⅱ^＋细胞分别占（56．3±7．3）％、（69．4±4．5）％和（46．5±5．7）％，3组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段；Blimp1基因的下调不影响DC前体细胞的定向分化，但能够抑制DC的成熟。

关键词：树突细胞慢病毒载体小鼠

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供心过表达微小RNA-499减轻心脏缺血再灌注损伤的研究

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中华实验外科杂志 2014年第10期31卷 2217-2219,F0004页

作者：张玄黄霞栾宙王平良陈知水杨军华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察供心过表达微小RNA-499 （miR-499）对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用聚合酶链反应（PCR）行miR-499转基因小鼠鉴定.分别获取野生型C57BL/6小鼠（WT）和同系（C57BL/6背景）miR-499转基因小鼠（Tg）来源的供心,均置于... 详细信息

目的观察供心过表达微小RNA-499 （miR-499）对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用聚合酶链反应（PCR）行miR-499转基因小鼠鉴定.分别获取野生型C57BL/6小鼠（WT）和同系（C57BL/6背景）miR-499转基因小鼠（Tg）来源的供心,均置于4℃生理盐水中保存16h,检测保存液中心肌酶谱：肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的释放量.实验分为WT供心组和Tg供心组,建立同系小鼠腹部异位心脏移植模型,通过视诊和触诊观察不同小鼠供心经过冷保存,移植给相同受体后心功能的恢复,并于移植后24h获取供心,行苏木素-伊红（HE）染色,观察移植心脏组织病理学改变.结果 PCR结果显示miR-499转基因小鼠能检测到miR-499基因及相关载体片段,在图中呈现阳性条带;WT小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为（5 043.0±523.8） U/L和（1 068.0±150.0）U/L,Tg小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为（3 667.0±194.7） U/L和（684.0±19.1） U/L,Tg小鼠心脏在冷缺血过程中,两种心肌酶谱的释放值均明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.移植后相同时间点观测结果显示,WT小鼠来源心脏的临床功能评分明显低于Tg小鼠,15 min时的平均评分分别为0.9分和2.3分,24 h的平均评分分别为2.1分和3.4分（P＜0.05）.移植后24 h,WT小鼠来源供心有大量炎性细胞浸润并伴有心肌细胞坏死,而Tg小鼠供心的炎性细胞浸润和心肌细胞坏死较少（P＜0.05）.结论供心过表达miR-499能减轻心脏在冷缺血和热灌注过程中造成的炎性损伤和心肌细胞凋亡,有利于再灌注后心功能的恢复,在心脏移植过程中具有保护作用.

关键词：微小RNA-499 缺血再灌注损伤心脏移植

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