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华中科技大学学报（医学版） 2009年第5期38卷 581-584,589页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体... 详细信息

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平。免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况。结果RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达。免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌。结论Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。

关键词：移植排斥反应 Th17细胞白细胞介素17 核孤独受体γt 干扰素-γ

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猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 712-715页

作者：谢林尹注增胡枫王璐朱珉向莹陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检... 详细信息

目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度,并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定。采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较。在体外,用3H-TdR摄入法检测人PB-MCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PB-MCs共同培养,连续4d检测人PBMCs的增殖变化。结果采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%。光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征。经Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%,高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09±0.75)%(P<0.01)。并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义。结论采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞。在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用。

关键词：异种移植猪睾丸支持细胞人外周血单个核细胞细胞凋亡细胞增殖

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基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子在移植肝慢性排斥反应中的表达

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中华器官移植杂志 2006年第7期27卷 441-442页

作者：聂明张伟杰张成德徐崇松华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室器官移植卫生部重点实验室武汉430030

基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质(ECM)的酶,它在组织纤维化、肿瘤侵袭、缺血-再灌注损伤及器官移植后慢性移植物功能丧失中的作用,近年日益引起人们的重视,成为新的研究热点.迄今有关基质金属蛋白酶对肾移植后慢性排斥反应的影响... 详细信息

基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质(ECM)的酶,它在组织纤维化、肿瘤侵袭、缺血-再灌注损伤及器官移植后慢性移植物功能丧失中的作用,近年日益引起人们的重视,成为新的研究热点.迄今有关基质金属蛋白酶对肾移植后慢性排斥反应的影响以及在肝纤维化中的作用的报道较多,但它在肝移植后慢性排斥反应中的作用尚不明了.为此,我们以正常肝组织、发生肝硬化的肝组织、移植后发生慢性排斥反应的肝组织为观察对象,应用免疫组化的方法,观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制因子(TIMP-2)在肝组织中的表达,以期探讨其在肝移植慢性排斥反应中可能起到的作用。

关键词：基质金属蛋白酶-2 慢性排斥反应组织抑制因子移植肝细胞外基质(ECM) 正常肝组织缺血-再灌注损伤组织纤维化慢性移植物移植后

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NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 708-711,F0003页

作者：徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。

关键词：核转录因子κB启动子双顺反子 p27基因真核表达载体细胞周期

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抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第2期39卷 197-201页

作者：雷钧何凡吴敏郑翔李舒媛陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验章器官移植卫生部重点实验室武汉430030

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移... 详细信息

目的观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水)。ELISA法检测受鼠移植术后第3、6天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6I、FN-γI、L-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。结果①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γI、L-6I、L-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+CD25+Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间。

关键词：心脏移植急性排斥反应白细胞介素6 单克隆抗体

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老龄亲属活体供肾移植疗效观察

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肾脏病与透析肾移植杂志 2009年第4期18卷 338-342页

作者：孟凡迎陈知水陈孝平吴敏杜敦峰魏来蒋继贫曾凡军张伟杰林正斌周平明长生宫念樵刘敦贵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的：探讨老龄亲属活体供肾移植的疗效。方法：我院自2006年1月至2006年12月共施行亲属活体肾移植74例,收集该74例活体供肾移植的临床资料,按供者年龄大小分为2组：老龄组（≥55岁）11例,低龄组（〈55岁）63例。分别对两组受体术后不... 详细信息

目的：探讨老龄亲属活体供肾移植的疗效。方法：我院自2006年1月至2006年12月共施行亲属活体肾移植74例,收集该74例活体供肾移植的临床资料,按供者年龄大小分为2组：老龄组（≥55岁）11例,低龄组（〈55岁）63例。分别对两组受体术后不同时间点临床资料和两组供体术前术后的临床资料进行分析比较,探讨老龄活体供肾移植的疗效。结果：（1）受者情况：老龄组有1例术后发生移植肾功能延迟恢复,低龄组有7例,组间比较无差别（P〉0.05）,两组受者移植术后肾功能恢复情况比较无差异,1年人/肾存活率均为100%。供者情况：两组供者术后一周血肌酐均明显升高,老龄组术前血肌酐（85.6±13.7）μmol/L,术后1周升高至（106.4±15.6）μmol/L,而低龄供者术前血肌酐（73.7±6.8）μmol/L,术后1周升高至（101.8±13.1）μmol/L。但术后1年随访,两组供者血肌酐恢复术前水平。结论：在严格供体筛查的前提下,老龄供肾（5565岁）对供者是安全的;而对受者,接受老龄供肾术后近期肾功能恢复情况良好,远期效果有待进一步观察。

关键词：肾移植老龄供肾疗效

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提倡亲属活体肾移植力推“家庭内自救”方案

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中华器官移植杂志 2006年第5期27卷 260-261页

作者：陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

由于全球范围内的供移植器官短缺,亲属活体肾移植已成为治疗终末期肾病的主要手段之一.与其它器官来源相比,亲属活体供肾移植的供、受者基因相近,供肾缺血时间短,因而具有人/肾存活率高、排斥反应发生率低、术前透析时间短及手术可择期... 详细信息

由于全球范围内的供移植器官短缺,亲属活体肾移植已成为治疗终末期肾病的主要手段之一.与其它器官来源相比,亲属活体供肾移植的供、受者基因相近,供肾缺血时间短,因而具有人/肾存活率高、排斥反应发生率低、术前透析时间短及手术可择期安排等优点显而易见.Terasaki的研究表明,活体肾移植病例中,即使HLA配型不好,其长期效果也优于尸体肾移植中配型较好者,这也提示,活体供肾的热缺血时间、冷缺血时间及运输时间均较短,从而使供肾的缺血损伤减轻,这是活体肾移植的重要优势之一。

关键词：亲属活体肾移植亲属活体供肾移植家庭内热缺血时间 HLA配型自救终末期肾病尸体肾移植冷缺血时间器官短缺

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染料木黄酮对大鼠移植动脉血管平滑肌细胞的影响

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中华器官移植杂志 2007年第2期28卷 95-97页

作者：丁召朱国超陈曦林董冲郭晖陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部／卫生部重点实验室武汉430030

目的研究染料木黄酮（Gen）对大鼠移植动脉血管平滑肌细胞的影响。方法以BN大鼠为供者，Lewis大鼠为受者，建立腹主动脉移植模型，将受者随机分为3组。实验组（n=8）：受者术后腹腔注射Gen20mg·kg^-1·d^-1×60d；对照1... 详细信息

目的研究染料木黄酮（Gen）对大鼠移植动脉血管平滑肌细胞的影响。方法以BN大鼠为供者，Lewis大鼠为受者，建立腹主动脉移植模型，将受者随机分为3组。实验组（n=8）：受者术后腹腔注射Gen20mg·kg^-1·d^-1×60d；对照1组（n=8）：受者术后腹腔注射溶剂二甲基亚砜0．5ml×60d；对照2组（n=6）：受者术后不给予任何处理。腹主动脉移植后60d取移植血管进行组织学观察，测量血管内膜厚度；免疫组织化学染色检测血管平滑肌细胞的增殖和迁移情况；酶联免疫（ELIA）法检测血清中血管内皮生长因子（VEGF）、γ干扰素（INF-γ）的变化。结果验组与两个对照组比较，内膜增厚不明显且巨噬细胞浸润减少；血管平滑肌细胞增殖和迁移减少（P均〈0．01）；两个对照组血清中VEGF、INF-γ表达显著高于实验组（P〈0．01）。结论染料木黄酮在预防和治疗移植动脉硬化的过程中，对移植动脉血管平滑肌细胞的增殖和迁移有抑制作用，其机理可能与影响VEGF等的表达有关。

关键词：染料木黄酮肌,平滑,血管蛋白质酪氨酸激酶酶抑制剂

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猪睾丸Sertoli细胞的分离、培养及其免疫豁免相关细胞因子的检测

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中华器官移植杂志 2008年第9期29卷 522-525页

作者：胡枫尹注增王璐谢林向莹徐婧陈松李俊华陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型... 详细信息

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型胶原酶以及2．5g／L胰蛋白酶和0．5g／L DNaseI消化（两步法）分离Sertoli细胞，于37℃、含体积分数为5％CO2的培养箱中培养。采用倒置相差显微镜观察细胞形态，透射电镜进行超微结构鉴定，流式细胞仪检测细胞体外活率，逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子B（TGF-β）及Clusterin的表达，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞的活性。结果猪睾丸经分离、培养，所获得的Sertoli细胞纯度达90％以上。培养后的细胞凋亡率为（2．61±0．96）％，死亡率为（2．12±0．74）％；培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin，而FasL表达较弱。体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21d。结论采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞，该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子。

关键词：塞尔托利细胞细胞培养技术抗原 CD95 转化生长因子β 猪

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肝移植术后早期神经系统并发症的相关因素分析

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中华器官移植杂志 2010年第7期31卷 418-421页

作者：魏来陈知水曾凡军明长生杜敦峰蒋继贫刘斌宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨肝移植术后早期发生神经系统并发症（NC）的相关因素及改善其预后的措施。方法回顾分析155例终末期肝病患者接受成人尸体肝移植的临床资料，其中男性131例，女性24例，平均年龄47．4岁（18-67岁）。受者原发病为：乙型肝炎导致... 详细信息

目的探讨肝移植术后早期发生神经系统并发症（NC）的相关因素及改善其预后的措施。方法回顾分析155例终末期肝病患者接受成人尸体肝移植的临床资料，其中男性131例，女性24例，平均年龄47．4岁（18-67岁）。受者原发病为：乙型肝炎导致的急、慢性肝功能衰竭60例，原发性肝癌（包括胆管癌）73例，丙型肝炎肝硬化12例，其他（包括原发性胆汁性肝硬化、肝豆状核变性及多囊肝等）10例。肝移植术后将发生NC的受者分为NC组，将未发生NC的受者设为对照组，观察和比较两组受者术前原发病和终末期肝病模型（MELD）评分、术后肝功能、住院期间感染发生率及死亡率。结果住院期间，共有36例受者发生NC，总发病率为23．2％（36／155）。原发性肝癌患者的NC发病率为12．3％（9／73），明显低于乙型肝炎导致的急、慢性肝功能衰竭的33．3％（20／60）和多囊肝、原发胆汁性肝硬化和肝豆状核变性等的40％（4／10）以及丙型肝炎肝硬化的25％（3／12）（P〈0．05）。NC组受者中非肝癌和肝癌患者分别为22．9±8．2和17．1±5．4，均明显高于对照组的8，3±8．5和13±3．4（P〈0．05）。术后2周内，两组患者在丙氨酸转氨酶、胆红素总量、凝血酶原时间、血浆白蛋白及血清钠离子和氯离子浓度水平的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。住院期间，NC组感染发生率和死亡率分别为36．1％（13／36）和30．5％（11／36），对照组分别为17．6％（21／119）和5．9％（7／119），两组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论NC是肝移植术后早期常见的并发症，其发生与患者原发病和术前肝功能状态密切相关，严重影响患者的预后；术后积极的对症治疗和防治感染对降低患者死亡率尤为重要。

关键词：肝移植手术后并发症神经系统疾病

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