检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2004年第8期21卷 995-997页

作者：童强松陈方敏曾甫清汪良郑丽端董继华鲁功成华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

目的克隆中国人UroplakinⅡ基因并构建其真核表达载体。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从1例GⅢ/T_3N_0M_0膀胱移行上皮癌(TCC)标本中扩增UroplakinⅡ全长cDNA后进行核酸序列分析,并构建其真核表达载体;重组子瞬时转染Uropla... 详细信息

目的克隆中国人UroplakinⅡ基因并构建其真核表达载体。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从1例GⅢ/T_3N_0M_0膀胱移行上皮癌(TCC)标本中扩增UroplakinⅡ全长cDNA后进行核酸序列分析,并构建其真核表达载体;重组子瞬时转染UroplakinⅡ基因缺陷型TCC EJ细胞株72h后,RT-PCR法检测癌细胞UroplakinⅡ表达水平。结果成功克隆了中国人UroplakinⅡ全长cDNA(555 bp),与国外报道的序列同源性高达100％。真核表达载体pcDNA-UPⅡ转染EJ细胞后,癌细胞UroplakinⅡmRNA水平显著增高(P<0.01)。结论从中国人TCC组织中克隆出UroplakinⅡ基因,为深入研究UroplakinⅡ基因在TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。

关键词：真核表达载体基因 TCC 中国人 EJ细胞克隆转染全长cDNA 重组子 mRNA水平

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Uroplakin Ⅱ基因在膀胱移行细胞癌中的表达及相关性研究

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中华实验外科杂志 2004年第3期21卷 270-272页

作者：陈方敏童强松曾甫清汪良郑丽端董继华鲁功成华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

目的　探讨UroplakinⅡ基因 (UPⅡ )在原发和转移性膀胱移行细胞癌 (TCC)中表达与意义。方法　收集 45例膀胱癌 (其中TCC 3 9例 ,非TCC 6例 )患者的癌组织 ,外周静脉血标本 ,提取总RNA ,行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR ) ,检测UPⅡ基因... 详细信息

目的　探讨UroplakinⅡ基因 (UPⅡ )在原发和转移性膀胱移行细胞癌 (TCC)中表达与意义。方法　收集 45例膀胱癌 (其中TCC 3 9例 ,非TCC 6例 )患者的癌组织 ,外周静脉血标本 ,提取总RNA ,行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR ) ,检测UPⅡ基因mRNA的表达。 2 5例其他部位肿瘤及 8例非肿瘤患者组织标本和静脉血作为对照。结果　 45例膀胱肿瘤组织标本中 ,UPⅡ基因在TCC组织中平均阳性率 82 .1% (3 2 /3 9) ,6例非TCC类型膀胱癌 0表达。在T1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者组织中UPⅡ基因阳性率分别为 76.5 %、71.4%、90 .9%、10 0 .0 % ;在患者外周血中UPⅡ基因阳性率分别为 5 .9%、14 .2 %、72 .7%、10 0 .0 %。在组织和外周血中低分期 (T1、T2 )与高分期 (T3、T4)TCC表达UPⅡ基因阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 )。其中 4例转移者均阳性 ,接受全身化疗后 3例未再表达。 2 5例其他部位肿瘤组织标本 ,7例肺癌在组织中有 1例阳性表达 ,外周静脉血中 0表达 ;5例肾移行细胞癌在组织中 2例阳性 ,外周静脉血 0表达 ;8例非肿瘤患者组织标本及外周静脉中 0表达。结论　组织及外周血中UPⅡ表达阳性率与肿瘤分期 ,是否转移呈相关性 ;检测TCC患者血中UPⅡ基因可作为监测TCC患者是否转移的指标 ,并可在一定程度上反映化疗疗效 ;

关键词： UroplakinⅡ基因膀胱移行细胞癌表达癌组织 RT-PCR

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人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响

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中华实验外科杂志 2011年第4期28卷 571-573页

作者：张桓瑜梁铸林郑丽端童强松董继华华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lip... 详细信息

目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR．145表达水平，黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配；重组质粒转染SGC．7901细胞后，miR-145表达分别上调20．45倍（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降51．5％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降30．4％（P〈0．01）。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。

关键词：微小RNA145 胃癌表达载体

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稳定高表达UroplakinⅡ基因人膀胱癌细胞株的建立及其意义

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中华实验外科杂志 2004年第11期21卷 1333-1336页

作者：陈方敏童强松曾甫清郑丽端汪良董继华鲁功成华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀... 详细信息

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果　所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论　通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。

关键词：细胞株高表达人膀胱癌细胞基因 EJ细胞 TCC 真核表达载体亚克隆 pcDNA3 酶切

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肾细胞癌中bcl-2、p53、增殖细胞核抗原表达与细胞增殖和凋亡

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中华实验外科杂志 2003年第6期20卷 559-560页

作者：朱朝辉邢诗安程平李国胜杨郁曾甫清鲁功成华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022

目的　探讨肾细胞癌 (RCC)中bcl 2、p5 3、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与细胞增殖、凋亡及病理参数之间的关系。方法　应用链霉亲和素辣根过氧化物酶 (SABC)法分析 3 4例RCC标本中bcl 2、p5 3和PCNA蛋白的表达 ,应用末端脱氧核苷酸转移... 详细信息

目的　探讨肾细胞癌 (RCC)中bcl 2、p5 3、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与细胞增殖、凋亡及病理参数之间的关系。方法　应用链霉亲和素辣根过氧化物酶 (SABC)法分析 3 4例RCC标本中bcl 2、p5 3和PCNA蛋白的表达 ,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)缺口末端标记 (TUNEL)法检测细胞凋亡。结果　 3 4例RCC标本中 ,15 ( 4 4.1% )例bcl 2阳性表达 ,表达阳性率与增殖指数 (PI)、凋亡指数 (AI)及RCC病理学参数无关 ;仅有 3例p5 3表达阳性 ;PI为 6.0 %～ 2 4.0 % (平均为 12 .3 % ) ,AI为 2 .0 %～ 8.0 % (平均为 5 .4% ) ;PI与肿瘤分级、分期密切关系 ,AI与肿瘤分级有明显关系。结论　明显增高的PI和AI与肿瘤恶性表型有关 ,提示在RCC中肿瘤细胞过度增殖伴有频繁的凋亡发生。

关键词：肾细胞癌 bcl—2 p53 增殖细胞核抗原细胞增殖细胞凋亡

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肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第4期37卷 431-434页

作者：郑丽端童强松蔡嘉斌蒋国松刘媛董继华华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全... 详细信息

目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全长 HIMF cDNA ,克隆至 T 载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点 EcoR Ⅰ ;重组子在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞 MLE-12、血管内皮细胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法检测细胞HIMF表达水平.结果 HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠 HIMF 全长 cDNA(336 bp),与 GenBank 报道的序列一致.真核表达载体 pcDNA3.1-HIMF 转染细胞后,细胞内 HIMF mRNA 和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论从小鼠肺组织中克隆出 HIMF 这一组织特异性基因,为深入研究 HIMF 的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础.

关键词：缺氧诱导丝裂原因子组织特异性肺基因表达

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靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

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中华实验外科杂志 2010年第5期27卷 623-625页

作者：蒋国松曾甫清郑丽端童强松董继华侯晓华华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科武汉430022

目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Li... 详细信息

目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。

关键词：肝素酶短发卡状RNA 肿瘤基因表达

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Smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响

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中华放射医学与防护杂志 2005年第3期25卷 245-247页

作者：郑丽端汪良童强松费世宏熊宙芳伍钢华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心放疗科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科武汉430022

目的探讨转染Smac基因过表达对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响,寻求改善宫颈癌放疗疗效的新途径。方法将Smac基因转染入宫颈癌HeLa细胞株,G418筛选获得亚克隆细胞,RTPCR、Westernblot法检测癌细胞Smac基因表达。X射线照射后,采用MTT比色法... 详细信息

目的探讨转染Smac基因过表达对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响,寻求改善宫颈癌放疗疗效的新途径。方法将Smac基因转染入宫颈癌HeLa细胞株,G418筛选获得亚克隆细胞,RTPCR、Westernblot法检测癌细胞Smac基因表达。X射线照射后,采用MTT比色法检测癌细胞体外生长活性;透射电镜、AnnexinV-FITC和碘化丙啶双染色流式细胞仪法检测癌细胞凋亡及比率;Westernblot、比色法检测细胞内Caspase-3蛋白表达和活性水平。结果RTPCR和Westernblot证实所获宫颈癌亚克隆细胞HeLaSmac的SmacmRNA、蛋白表达水平均显著高于HeLa(P<0.01)。8GyX射线照射后,HeLaSmac细胞生长活性较HeLa细胞减弱10.19%(P<0.01),透射电镜下可见部分HeLaSmac细胞发生典型凋亡形态学改变,凋亡率为16.4%,显著高于对照组HeLa细胞(凋亡率为6.2%,P<0.01)。与HeLa细胞比较,HeLaSmac细胞内Caspase3表达显著增加(P<0.01),活性水平提高3.42倍(P<0.01)。结论稳定转染外源性Smac基因使其在宫颈癌细胞株中过表达,能提高癌细胞中Caspase3的表达和活性,增强放疗对癌细胞的诱导凋亡作用,有望成为改善宫颈癌放疗效果的新途径。

关键词：宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性基因过表达 Caspase-3表达 Western RT-PCR HeLa细胞株 Annexin X射线照射 MTT比色法流式细胞仪法细胞生长活性宫颈癌细胞株 Smac基因诱导凋亡作用克隆细胞活性水平蛋白表达 c基因表达

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二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G_2/M期的阻滞作用

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中国药理学通报 2003年第10期19卷 1147-1151页

作者：袁静萍凌晖张孟贤苏琦程爱兰刘瑶周建国武汉市中心医院病理科武汉430030 南华大学肿瘤研究所衡阳421001 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科武汉430030

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)对人胃癌MGC80 3细胞G2 /M期的阻滞作用及分子机制。方法　体外培养MGC80 3细胞 ,采用MTT比色实验、细胞计数法 ,流式细胞光度术和Westernblot分析DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用 ,细胞周期分布的影响... 详细信息

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)对人胃癌MGC80 3细胞G2 /M期的阻滞作用及分子机制。方法　体外培养MGC80 3细胞 ,采用MTT比色实验、细胞计数法 ,流式细胞光度术和Westernblot分析DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用 ,细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达。结果　MTT法显示 ,2 0mg·L-1DADS、30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 72h后 ,生长抑制率分别达2 5 7%、5 8 6 %。细胞计数法表明常规培养MGC80 3细胞群体倍增时间为 2 9 92h ,30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞后 ,其细胞群体倍增时间延长到 5 5 5 8h。流式细胞仪分析结果显示DADS呈浓度依赖性将MGC80 3细胞阻滞在G2 /M期。 30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 36h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多。Westernblot分析表明在G2 /M期阻滞同时有Cdc2 5C蛋白表达下降 ,但CDK1蛋白表达不受DADS作用的影响。结论　DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用与G2 /M期阻滞有关 ,DADS对MGC80 3细胞G2 /M期阻滞的分子机制可能与降低Cdc2

关键词：二烯丙基二硫胃肿瘤 MGC803细胞细胞周期 Cdc25C蛋白

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Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 215-220页

作者：郑丽端童强松杨渝珍陈方敏曾甫清汪良董继华华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022

合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著... 详细信息

合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著茎环结构的 4个位点 ,合成互补性反义寡核苷酸AS ODN1、AS ODN2 、AS ODN3 、AS ODN4并转染高表达survivin基因的胃癌细胞株MKN 4 5 .逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测发现MKN 4 5细胞的survivinmRNA和蛋白水平均有显著的下降 ;MTT比色法证实 6 0 0nmol LAS ODN1～AS ODN4转染 2 4h后细胞生长受到明显抑制 ,透射电镜、annexinⅤ FITC和PI双染色流式细胞术均检测到细胞凋亡 .说明运用随机寡核苷酸文库 RNaseH酶切割与计算机分析相结合的方法 ,在体外有效筛选出survivin的反义核酸结合位点 ,其相应的反义寡核苷酸能阻断survivin基因的生物学功能 .

关键词： survivin基因反义结合位点随机寡核苷酸文库基因表达

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