检索结果-内蒙古大学图书馆

工业微生物 2025年第1期55卷 46-48页

作者：王琳李海洁王得朝李青梁雪爽马力华兰生物工程股份有限公司质量控制部河南新乡453003

文章为探究人血白蛋白对破伤风液体毒素稳定性的影响,取同一批次冻干破伤风毒素,分别配制成加入人血白蛋白和不加入人血白蛋白的2种破伤风液体毒素,并对其试验量测定结果进行对比分析。结果显示,不含人血白蛋白的破伤风液体毒素在6个月... 详细信息

文章为探究人血白蛋白对破伤风液体毒素稳定性的影响,取同一批次冻干破伤风毒素,分别配制成加入人血白蛋白和不加入人血白蛋白的2种破伤风液体毒素,并对其试验量测定结果进行对比分析。结果显示,不含人血白蛋白的破伤风液体毒素在6个月内毒素试验量下降了约34.5%;加入人血白蛋白的破伤风液体毒素试验量没有下降。由此表明,人血白蛋白可提高破伤风液体毒素的稳定性。

关键词：破伤风毒素人血白蛋白效价试验量

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气相色谱法对狂犬病疫苗灭活工艺中β-丙内酯研究

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中国生物工程杂志 2019年第6期39卷 25-31页

作者：高彦杜晶晶王斌刘琦申志强华兰生物工程股份有限公司

目的:基于GC-FID法,对狂犬病疫苗生产过程中采用的β-丙内酯灭活剂进行了含量及稳定性研究。方法:气相色谱条件,采用Agilent DB-624(30m×0.530mm×3.00μm)毛细管柱;升温程序,初始温度为80℃,保持1min,以20℃/min的速率升温至... 详细信息

目的:基于GC-FID法,对狂犬病疫苗生产过程中采用的β-丙内酯灭活剂进行了含量及稳定性研究。方法:气相色谱条件,采用Agilent DB-624(30m×0.530mm×3.00μm)毛细管柱;升温程序,初始温度为80℃,保持1min,以20℃/min的速率升温至200℃,保持3min;色谱柱流量,3ml/min;检测器温度,250℃;进样口温度,150℃;载气,氮气,线速度,25cm/s;进样量,1μl,分流比为2∶1;进样方式,手动进样。结果:以乙腈作为稀释剂,BPL在1∶100~1∶32 000范围内线性关系良好(R 2≥0.999)。在1∶200、1∶1 000、1∶8 000 三个浓度水平下,加标回收率在95.04%~116.86%,相对标准偏差(RSD)为2.6%~3.2%,检测限为0.112μg/ml。结论:方法简便、专属性强、稳定且在室温条件下操作,大大降低了对试验条件和技术操作的要求,能够满足灭活狂犬病病毒工艺中对BPL检测的需求。

关键词：狂犬病疫苗 β-丙内酯气相色谱

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狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2019年第2期32卷 147-151页

作者：郭冰峰张少宁安文琪梁雪爽张静静马小伟华兰生物工程股份有限公司河南新乡453000

目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,... 详细信息

目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒基质蛋白密码子优化原核表达亲和层析多克隆抗体

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不同纳米过滤系统过滤静注人免疫球蛋白的效果评价

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中国生物制品学杂志 2023年第1期36卷 81-84页

作者：马力李冠军张学成范蓓马小伟王志刚华兰生物工程股份有限公司研发中心河南新乡453003

目的评价不同纳米过滤系统对静注人免疫球蛋白(Intravenous human immunoglobulin,IVIG)的过滤效果,以筛选最佳纳米过滤系统。方法采用不同纳米过滤器进行IVIG过滤,确定最佳纳米过滤器;选用不同预过滤器和优选的纳米过滤器组合,进行IVI... 详细信息

目的评价不同纳米过滤系统对静注人免疫球蛋白(Intravenous human immunoglobulin,IVIG)的过滤效果,以筛选最佳纳米过滤系统。方法采用不同纳米过滤器进行IVIG过滤,确定最佳纳米过滤器;选用不同预过滤器和优选的纳米过滤器组合,进行IVIG过滤,确定最佳纳米过滤系统。结果切向流(错流)纳米过滤器过滤效果优于死端(直流)纳米过滤器,纳米过滤器C为最佳纳米过滤器;深层过滤预过滤器的过滤效果优于绝对过滤预过滤器,预过滤器Y1串联纳米过滤器C为最佳纳米过滤系统。结论通过不同纳米过滤系统对IVIG过滤效果的评价,筛选出了最佳纳米过滤系统。

关键词：静注人免疫球蛋白预过滤纳米膜过滤

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鲤RNF14基因的生物学功能及其对病原刺激的免疫响应

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河南农业大学学报 2025年第2期 255-265页

作者：张美娜张子豪洪佳乐郭朝辉李海洁于光晴董鹏生黄小城杨振江王延晖刘变枝河南农业大学动物科技学院华兰生物工程股份有限公司河南省水产科学研究院水产养殖与遗传育种研究室

【目的】探究鲤环指蛋白14(ring finger protein 14,RNF14)基因的生物学功能，为阻断鲤春季病毒血症病毒（spring viremia of Cyprinus carpio virus, SVCV）感染提供新思路。【方法】采用PCR技术、生物信息学分析和实时荧光定量PCR方... 详细信息

【目的】探究鲤环指蛋白14(ring finger protein 14,RNF14)基因的生物学功能，为阻断鲤春季病毒血症病毒（spring viremia of Cyprinus carpio virus, SVCV）感染提供新思路。【方法】采用PCR技术、生物信息学分析和实时荧光定量PCR方法，对鲤RNF14基因功能进行初步分析，研究其在病毒刺激后的表达规律。【结果】鲤RNF14基因编码区全长1 362 bp，编码453个氨基酸；鲤RNF14与犀角金线鲃亲缘关系较近，与原鸽亲缘关系较远；该蛋白属酸性不稳定亲水性蛋白；功能结构域预测显示该蛋白为典型的RBR E3s；泛素化底物分析结果显示，该蛋白与RBCK1、Nedd4l、Notch1a等蛋白相互作用的置信度较高。组织表达谱分析表明，鲤RNF14基因在各组织或器官中广泛表达，以心脏中相对表达量最高。与对照组相比，高剂量SVCV在体感染鲤24 h后，RNF14基因的mRNA表达水平在肌肉中显著升高；多肌胞苷酸（polyinosinic acid-polycytidylic acid,ploy(I:C)）在体刺激鲤24 h后，RNF14基因的mRNA表达水平在肾脏和头肾中显著升高。与对照组相比，低剂量SVCV和poly(I:C)离体刺激下，鲤RNF14基因mRNA表达水平在各取样时间点均极显著升高。在体和离体病原刺激结果表明，鲤RNF14基因参与了病原刺激后的免疫应答过程，提示鲤RNF14基因可能是阻断SVCV感染的潜在靶点。【结论】成功克隆了鲤RNF14基因的基因编码区，揭示了鲤RNF14基因在SVCV和poly(I:C)刺激下免疫响应规律。

关键词：鲤环指蛋白14 生物信息学鲤春季病毒血症病毒多肌胞苷酸病原刺激免疫响应

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静注巨细胞病毒人免疫球蛋白原料血浆的筛选及制备

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中国生物制品学杂志 2020年第9期33卷 1009-1013页

作者：郭冰峰张剑涛李冠军张静静李光飞张学成马小伟潘若文华兰生物工程股份有限公司河南新乡453000

目的筛选获得高效价血浆并制备静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(intravenous immunogloblin against cytomegalovirus,CMV-IVIG)。方法分别使用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法及微量细胞中和法对113份人血浆巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)IgG抗体进行结合效价及中和效价的检测,将两种方法获得的高效价血浆分别制备CMV-IVIG,采用常规微量细胞中和法检测抗CMV中和效价,并与IVIG中和效价进行比较,确定符合要求的免疫球蛋白成品,确立血浆筛选方法。结果对113份血浆进行效价检测,将结合效价≥20 IU/mL以及中和效价≥1∶32的血浆分别收集并制备5%CMV-IVIG,成品批号分别20190401和20190402;20190401批CMV-IVIG成品中和效价为498.28 IU/mL,20190402批CMV-IVIG成品中和效价为2357.56 IU/mL,而5%IVIG中和效价为259.53 IU/mL。结论ELISA法筛选获得的血浆制备的CMV-IVIG中和效价为普通IVIG的1.92倍,不符合特异性免疫球蛋白不低于普通免疫球蛋白4倍的效价判定标准,微量细胞中和法筛选获得的血浆制备CMVIVIG中和效价为普通IVIG的9.08倍,符合效价判定标准,表明微量细胞中和法可用于CMV高中和效价血浆的筛选,为CMV-IVIG的制备提供合格的血浆原料。

关键词：巨细胞病毒免疫球蛋白血浆酶联免疫吸附微量细胞中和效价

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静注人免疫球蛋白纯化用层析介质使用寿命的验证

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中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1392-1396页

作者：张宝献刘亚芳张剑涛李冠军李光飞孙振国张学成华兰生物工程重庆有限公司研发部重庆408102 华兰生物工程股份有限公司开发部河南新乡453003

目的验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel®EMD TMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命。方法建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和... 详细信息

目的验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel®EMD TMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命。方法建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳(total organic carbon,TOC)进行趋势分析。对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命。结果IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和>95.0%,均符合产品质量标准。层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求。结论用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次。

关键词：静注人免疫球蛋白 Fractogel®EMD TMAE层析介质使用寿命

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SARS-CoV-2收获液滴度稳定性及灭活动力学分析

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中国生物制品学杂志 2023年第2期36卷 129-132,144页

作者：郭冰峰韩斌郝一楠王魁殷吉祥李岩李楠凌相平潘若文华兰生物疫苗股份有限公司河南新乡453003

目的对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)收获液在2~8℃环境下的滴度稳定性及β-丙内酯灭活剂对病毒的灭活效果进行研究。方法将3批(批号:202111001、202111002和202111003)SARS-CoV-2收获液于2~8℃放置12 d,每隔3 d(0、3、6、9、12 d)取样,采用Karber法检测病毒滴度;2~8℃过夜平衡的3批病毒收获液按1∶4000的体积分数加入β-丙内酯进行灭活,在不同的灭活时间点(0、0.5、1、1.5、2、3、4、8、16、24 h)取样检测病毒滴度,取灭活8.0、16、24 h的病毒液进行灭活验证,取灭活24 h的病毒灭活液进行透射电镜观察。结果2~8℃环境下,SARS-CoV-2的滴度随放置时间的延长不断降低,0~3 d滴度下降不明显,第12天滴度由最初的7.75、6和7.5 lgCCID50/mL降至5.75、4.625和6.25 lgCCID50/mL,表明2~8℃环境下病毒活力呈逐渐降低的趋势;随着灭活时间的增加,病毒滴度不断降低,灭活3 h后,病毒滴度已无法检出。透射电镜观察显示,灭活后的病毒颗粒完整,刺突蛋白分布均匀。结论2~8℃环境下保存的SARS-CoV-2毒力不稳定,应尽快进行后续的灭活纯化工艺;病毒灭活3 h后滴度已无法检出,可为灭活工艺的确定提供参考。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 病毒滴度灭活动力学灭活验证

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H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数的优化

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中国畜牧兽医 2016年第3期43卷 805-813页

作者：徐银兰王三虎董永军张鹏飞杨猛新乡医学院三全学院新乡453003 河南科技学院新乡453003 华兰生物工程股份有限公司新乡453003

为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究。其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素... 详细信息

为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究。其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素,结果显示,蛋重为55～65g,蛋形指数为1.30～1.35,种蛋保存期为1～4d,保存温度为16～18℃,保存湿度为70%～80%,保存期种蛋的甲醛熏蒸消毒时间为30min时,可以为H1N1亚型流感疫苗生产提供最佳的种蛋。孵化过程中孵化参数对H1N1亚型流感病毒产毒量的影响,本试验主要将孵化温度、湿度、翻蛋、通风等参数作为研究对象,结果显示在生产H1N1亚型流感疫苗时,最佳孵化参数设定为：温度1～7d为38.2℃、8～9d为38.0℃、10d为37.8℃,湿度1～10d为65%～70%,翻蛋频率为1次/2h,前后倾角各为45°,通风风门设定为1～5d为4、6～10d为5。本试验结果为H1N1亚型流感疫苗生产提供优质的鸡胚孵化技术,确保鸡胚尿囊液的质量和收获量。

关键词： H1N1亚型流感病毒鸡胚孵化参数病毒增殖

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2010年中国人免疫球蛋白中EV71中和抗体效价的比较研究

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药物分析杂志 2011年第10期31卷 1918-1923页

作者：毛群颖郭增兵李青梁争论李凤祥王军志中国食品药品检定研究院北京100050 华兰生物工程股份有限公司新乡453003

目的:了解2010年我国生产的静注人免疫球蛋白(IVIG)中抗-EV71中和抗体效价的情况,为治疗EV71引起的手足口病(HFMD)提供特异性治疗药物。方法:采用经典微量细胞病变法,应用近2年分离自中国大陆的2株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对我国不同... 详细信息

目的:了解2010年我国生产的静注人免疫球蛋白(IVIG)中抗-EV71中和抗体效价的情况,为治疗EV71引起的手足口病(HFMD)提供特异性治疗药物。方法:采用经典微量细胞病变法,应用近2年分离自中国大陆的2株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对我国不同血液制品厂家生产的97批IVIG进行抗-EV71中和效价检测,比较不同批次IVIG的EV71中和效价。结果:19家生产企业生产的97批IVIG的EV71中和效价几何平均滴度(GMTs)为1∶180(1∶170～1∶191)。其中有7家生产企业生产的12批制品的中和效价大于1∶256,以S公司生产的20100406批制品效价最高为1∶543,以A公司生产的含有1∶256以上效价的IVIG批数最多(5批),使该公司生产的IVIG的平均EV71中和抗体效价显著高于其他10家企业(P<0.05)。进一步分析显示,该2个公司分别是通过对献血员的EV71中和效价进行筛选,挑选出高效价血浆和选择人群抗体水平较高地区作为血浆来源地进行投料,而制备出了含有高效价EV71中和抗体的IVIG。结论:本研究显示,生产企业只要对原料血浆进行合理控制,制备出含有高效价EV71中和抗体的IVIG是可行的。

关键词：人免疫球蛋白手足口病(HFMD) 人肠道病毒71型(EV71) 中和抗体

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