目的构建膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)尿液差异蛋白数据集,筛选核心差异蛋白并初步验证。方法于2015年1月至2016年11月在天津医科大学第二医院泌尿外科住院病房,采集膀胱上皮癌患者术前尿液标本78例,其中男性55人,女性23人,年龄(68.9±6.6)岁。同时收集51例健康志愿者尿液标本用于对照组分析,其中男性34人,女性17人,年龄(60.6±11.0)岁。采用同位素相对标记和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)对BUC组混合尿液样本4例和对照组混合尿液样本2例,共6例尿液混合标本进行比较蛋白质组学研究,找出两组间的尿液差异蛋白,选取差异倍数前20的差异蛋白进行质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术验证;应用R语言cluster profiler包等进行差异蛋白的京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析、应用R语言的***包等进行基因本体(Gene ontology,GO)分析,初步选取有意义的差异蛋白,构建BUC尿液差异蛋白数据集。应用R语言绘制蛋白间相互作用(protein protein interaction,PPI)图,筛选核心差异蛋白。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)验证核心差异蛋白在尿液中的差异存在。结果通过分析得到101个BUC尿液差异蛋白,其中37个蛋白表达上调,64个蛋白表达下调。MRM检测到10个差异蛋白;KEGG分析显示差异蛋白显著富集在其他聚糖降解,补体和凝血级联这两个代谢通路,包含11个差异蛋白;GO分析显示差异蛋白主要参与细胞黏附分子结合、羧酸结合、有机酸结合、糖胺聚糖结合、肽链内切酶激活等生物过程,涉及54个差异蛋白;三者共同构成BUC尿液差异蛋白数据集,包括69个蛋白。通过蛋白互作分析筛选出APOE和APOA4为核心差异蛋白。ELISA结果显示:BUC组和对照组的APOE平均浓度分别为0.55和0.30 pg/mL。BUC组和对照组的APOA4平均浓度分别为3.33和7.01 ng/mL。与对照组相比,BUC组尿液中APOE和APOA4浓度均增高,差异有统计显著性(P<0.05)。结论应用iTRAQ-MRM-R语言策略可以辅助构建BUC尿液差异蛋白数据集,并进一步筛选出核心差异蛋白,为BUC的诊断及治疗提供新的靶点。
结节性硬化症(tuberoussclerosis,TSC)是一种常染色体显性或散发性多系统疾病,由TSC1或TSC2突变引起,出生发病率为1∶6000,其特征是全身受累和多变的表现,可出现在任何年龄,并可影响多个器官系统,主要器官包括大脑、皮肤、肺、肾脏和心脏,所有器官受累率和严重程度都不同。这种疾病通常在婴儿和儿童中根据特征性皮肤损伤、癫痫发作或心脏、大脑和肾脏中的错构瘤来识别。这些年随着医疗技术的进步,新的诊断标准已经建立,越来越多无症状或症状不明显的TSC患者被发现诊断并治疗。雷帕霉素(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号在所有TSC相关病变中具有组成性活性,mTOR抑制剂成为治疗TSC的理想靶向疗法,同时,对于TSC患者的管理也同样重要。本综述总结了TSC的临床表现和治疗管理的最新进展。
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