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血小板裂解液联合国产多孔钽对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响

中国组织工程研究 2017年第34期21卷 5430-5436页

作者：孙福斋王少华邓华民王茜李琪佳甘洪全王志强华北理工大学附属医院骨科河北省唐山市063000 华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北省唐山市063000 华北理工大学医学中心实验室河北省唐山市063000

背景:课题组前期研究发现国产多孔钽有利于MG63细胞的早期黏附、增殖,可用作骨组织工程支架材料。血小板裂解液是富血小板血浆进一步优化后的产物,更适合用于诱导修复骨缺损。目的:在前期研究基础上,深入探索血小板裂解液联合国产多孔... 详细信息

背景:课题组前期研究发现国产多孔钽有利于MG63细胞的早期黏附、增殖,可用作骨组织工程支架材料。血小板裂解液是富血小板血浆进一步优化后的产物,更适合用于诱导修复骨缺损。目的:在前期研究基础上,深入探索血小板裂解液联合国产多孔钽支架材料对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响。方法:培养MG63细胞并接种在国产多孔钽支架上,加入3%、5%、7%、10%血小板裂解液,应用CCK-8法筛选出最佳的体积分数7%进行以下实验。实验分组:空白对照组MG63细胞培养;血小板裂解液组:7%血小板裂解液与MG63细胞共同培养;多孔钽组:多孔钽支架材料与MG63细胞共同培养;血小板裂解液-多孔钽组:7%血小板裂解液、多孔钽与MG63细胞共同培养。扫描电镜观察国产多孔钽及血小板裂解液-多孔钽-MG63细胞复合物的表面形态;CCK-8法检测MG63细胞的增殖状态;q PCR、免疫细胞化学染色、Western-blot检测MG63细胞ITGβ1、Vinculin、F-actin的m RNA和蛋白表达。结果与结论:①扫描电镜显示,MG63细胞均良好地黏附在多孔钽支架表面;②与空白对照组比较,血小板裂解液组与多孔钽组均可促进MG63细胞的增殖(P<0.05);4组中,血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的增殖最显著(P<0.05);③q PCR、免疫细胞化学染色、Western-blot结果显示,4组中血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的ITGβ1、Vinculin、F-actin的m RNA及蛋白表达最多(P<0.05)。说明血小板裂解液和国产多孔钽支架材料能协同促进MG63细胞的增殖,并能上调ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路m RNA及蛋白的表达,该信号通路的激活可能有助于MG63细胞的增殖、黏附及分化。

关键词：钽整合素类生物相容性材料组织工程生物材料骨生物材料血小板裂解液多孔钽 MG63细胞整合素黏着斑蛋白束状肌动蛋白

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刺五加内生放线菌Streptomyces sp. CWJ-256次生代谢产物研究

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中国医药生物技术 2018年第5期13卷 404-411页

作者：王新位郭文强赵建元余利岩席楠何宁王珊珊袁丽杰解云英中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 华北理工大学基础医学院/河北省慢性疾病重点实验室/唐山市慢性病临床基础研究重点实验室唐山063000

目的研究刺五加植物内生放线菌CWJ-256次级代谢产物及其生物活性。方法采用16S rRNA基因同源进化分析对菌株CWJ-256进行初步分类鉴定,采用抗菌活性追踪方式,对CWJ-256发酵液通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层色谱显色以及高效液相色谱... 详细信息

目的研究刺五加植物内生放线菌CWJ-256次级代谢产物及其生物活性。方法采用16S rRNA基因同源进化分析对菌株CWJ-256进行初步分类鉴定,采用抗菌活性追踪方式,对CWJ-256发酵液通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层色谱显色以及高效液相色谱等方法对目标化合物分离纯化,利用核磁共振波谱法和质谱法鉴定化合物的结构。采用MTT法测试其抗肿瘤细胞增殖活性。基于Gluc报告系统对化合物3的体外抗流感病毒药效学进行初步评价。结果菌种鉴定显示***-256为生黑孢链霉菌Streptomyces melanosporofaciens;从该菌株的发酵代谢产物中分离得到3个活性化合物,经结构鉴定为efomycin G(化合物1)、11,11'-O,O-dimethylelaiophylin(化合物2)、elaiophylin(化合物3);抗肿瘤细胞增殖活性评价显示,化合物1和3对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有增殖抑制作用(IC50分别为4.385和2.118μmol/L)。体外抗流感病毒药效学评价显示,化合物3对流感病毒A/WSN/33(H1N1)具有一定抑制效果。结论刺五加内生放线菌***-256可产生多个洋橄榄叶素类次生代谢产物,显示出抗细胞增殖、抗病毒等多种活性。

关键词：刺五加△ 内生放线菌洋橄榄叶素抗肿瘤活性抗流感病毒活性

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CpG ODN疫苗佐剂的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第3期37卷 235-239页

作者：闫江泓李淑英朱武洋华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室唐山063000 中国疾病预防控制中心病毒病所北京100052

CpG ODN是人工合成非甲基化的CpG寡聚脱氧核苷酸链，可以与B细胞、树突状细胞、单核细胞和巨噬细胞等免疫细胞中内质网膜上的Toll样受体9（TLR9）结合，是TLR9受体激动剂。CpG ODN是一种具有促进Th1免疫应答特点的疫苗佐剂，能够提高疫... 详细信息

CpG ODN是人工合成非甲基化的CpG寡聚脱氧核苷酸链，可以与B细胞、树突状细胞、单核细胞和巨噬细胞等免疫细胞中内质网膜上的Toll样受体9（TLR9）结合，是TLR9受体激动剂。CpG ODN是一种具有促进Th1免疫应答特点的疫苗佐剂，能够提高疫苗的免疫原性并且具有较好的安全性。对感染、肿瘤和过敏等疾病的预防和治疗具有应用前景。本文主要从CpG ODN简介、分类及结构特性、免疫机制、安全性和疫苗佐剂在临床中应用方面展开，为进一步的研究和应用CpG ODN佐剂提供参考。

关键词：免疫佐剂 CpG ODN 疫苗免疫应答

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DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义

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实用医学杂志 2017年第24期33卷 4105-4109页

作者：曹佳宇白洁董建新邵婷陈燕华北理工大学基础医学院、河北省慢性疾病重点实验室、唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北省唐山市063000 华北理工大学附属医院妇产科

目的探讨DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义。方法选取病理学诊断的正常宫颈(NC)、宫颈低级别上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织各30例,采用Western blot法、实时荧光聚合酶... 详细信息

目的探讨DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义。方法选取病理学诊断的正常宫颈(NC)、宫颈低级别上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织各30例,采用Western blot法、实时荧光聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测各组DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白的表达。结果 DNMT1 mRNA和蛋白表达量在LSIL、HSIL及SCC组织中均高于NC组织(F=117.93,P<0.05;F=61.24,P<0.05),随着病变程度的增加,DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平逐渐上升(χ~2趋势=26.25,P<0.05;χ~2趋势=26.60,P<0.05)。CCNA1 mRNA和蛋白的表达水平在HSIL、SCC组织中均低于NC、LSIL组织(F=77.04,P<0.05;F=57.15,P<0.05),随着病变程度的增加,CCNA1 mRNA和蛋白表达量逐渐下降(χ~2趋势=64.19,P<0.05;χ~2趋势=60.24,P<0.05)。DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白在LSIL、HSIL、SCC组织中的表达呈负相关(r=-0.75、-0.56,P<0.05)。结论 DNMT1 mRNA、蛋白的高表达,CCNA1 mRNA、蛋白低表达,二者可能与宫颈癌的发生发展有关。

关键词： DNA甲基转移酶1 细胞周期蛋白A1 宫颈癌宫颈癌前病变

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NKT细胞发育过程中microRNA表达谱变化

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中国免疫学杂志 2017年第7期33卷 979-984页

作者：王姗郑全辉田枫闫振宇孙贺军王佳骥左蓉洁刘遄陈光华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室唐山063000 北京大学医学部实验动物科学部北京100191 华北理工大学附属医院血液病学科唐山063000

目的:探讨自然杀伤性T细胞(NKT)发育、成熟过程中microRNA表达谱变化。方法:采用流式细胞仪分选小鼠胸腺不同发育阶段NKT细胞,提取细胞总RNA,经反转录和预扩增后利用Taq Man低密度microRNA表达谱分析阵列检测NKT发育、成熟过程中发生表... 详细信息

目的:探讨自然杀伤性T细胞(NKT)发育、成熟过程中microRNA表达谱变化。方法:采用流式细胞仪分选小鼠胸腺不同发育阶段NKT细胞,提取细胞总RNA,经反转录和预扩增后利用Taq Man低密度microRNA表达谱分析阵列检测NKT发育、成熟过程中发生表达变化的microRNAs,并采用real-time PCR进一步验证。结果:NKT细胞发育、成熟过程中,共有92个microRNAs表达发生显著变化。表达显著增加的microRNAs有71个,其中有36个表达持续增加;而表达显著降低的microRNAs有21个,其中有12个表达持续降低。选取Let-7f、miR-150、miR-155、miR-223、miR-24和miR-29进行real-time PCR,发现Let-7f、miR-150、miR-24、miR-29在NKT细胞发育、成熟过程中表达增加,而miR-223和miR-155表达降低,其表达变化趋势与表达谱分析一致。结论:NKT细胞发育、成熟过程中伴随大量特异microRNAs的不同表达变化,提示特异microRNA调控NKT细胞的发育和功能。

关键词：自然杀伤性T细胞 microRNA 细胞发育

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荞麦发酵物对2型糖尿病db/db小鼠肾VEGF、MMP-9表达的影响

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现代预防医学 2017年第6期44卷 1102-1105+1144页

作者：黄菡雪蒋志鹏石亚静成曦爽陈雪品韩淑英郭兰华北理工大学药学院华北理工大学临床医学院华北理工大学基础医学院和河北省慢性疾病重点实验室及唐山市慢性病临床基础研究重点实验室华北理工大学冀唐学院

目的观察荞麦发酵物(Fermented Buckwheat Extract,FBE)对2型糖尿病db/db小鼠肾组织血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法30只8周龄雄性db/db小鼠随机分为FBE高、低剂量组和模型组,10只同周龄同源雄性db/m小鼠作为正常对照组,FBE高低剂量组分别灌胃FBE 100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d),正常与模型组灌胃等量纯水,连续给药8周。血糖仪测定0、4、8周随机血糖;免疫组化和Western blot法检测肾组织VEGF和MMP-9蛋白表达位置及表达水平。结果模型组小鼠随机血糖明显高于正常对照组(P<0.001),高低剂量FBE治疗组小鼠的随机血糖值明显低于模型组(P=0.009),并且给药8周血糖值降低幅度更大;与正常组相比,模型组小鼠肾脏VEGF蛋白的表达水平明显升高(P<0.001),高、低剂量FBE均能下调VEGF的表达(P均<0.001);MMP-9蛋白表达水平在模型小鼠肾脏明显下降(P<0.001),FBE高、低剂量均可上调小鼠肾脏MMP-9的表达(P均<0.001)。结论 FBE可降低db/db小鼠随机血糖,对db/db小鼠肾组织VEGF蛋白表达有下调作用,对MMP-9蛋白表达有上调作用。

关键词：荞麦发酵物糖尿病肾病血管内皮生长因子(VEGF) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9)

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刺五加内生放线菌对5种苹果病原真菌的拮抗作用初探

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西北农业学报 2017年第1期26卷 94-100页

作者：刘爱华徐红艳王彬王卫周波袁丽杰华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063009 土肥资源高效利用国家工程实验室山东农业大学生命科学学院山东泰安271018

以苹果病原真菌尖孢镰刀菌、层出镰刀菌、串珠镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对265株刺五加内生放线菌进行抗菌活性筛选。结果表明:供试的265株内生放线菌抗菌谱广,抗菌活性强,至少具有1种抗菌活性的菌株... 详细信息

以苹果病原真菌尖孢镰刀菌、层出镰刀菌、串珠镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对265株刺五加内生放线菌进行抗菌活性筛选。结果表明:供试的265株内生放线菌抗菌谱广,抗菌活性强,至少具有1种抗菌活性的菌株占菌株总数的51.0%。对层出镰刀菌和串珠镰刀菌具有抑制活性的菌株较多,分别占检测总菌株的38.9%和48.7%。对尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌有抑制作用的菌株数量接近,分别占检测菌株总数的23.4%、31.7%、28.7%。对强活性菌株的PKSⅠ、PKSⅡ、NRPS、Helo、CYP功能基因筛选结果提示,菌株大多具有至少1种功能基因。10株强活性菌株系统发育分析表明,这些菌株都属于链霉菌属菌株。

关键词：刺五加内生放线菌苹果病原真菌拮抗作用生物防治

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双反相色谱串联平行反应监测靶向定量蛋白质组方法的建立

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生物工程学报 2017年第11期33卷 1859-1868页

作者：李恺宋雷石文昊田喜凤华北理工大学基础医学院河北唐山063009 军事医学科学院放射与辐射医学研究所国家蛋白质科学中心·北京北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000

近年来质谱技术的持续进步促进了靶向蛋白质组的发展,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)靶向蛋白质组定量方法的基础上衍生出平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)技术。该技术靶向定量灵敏度和通量更高,重现... 详细信息

近年来质谱技术的持续进步促进了靶向蛋白质组的发展,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)靶向蛋白质组定量方法的基础上衍生出平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)技术。该技术靶向定量灵敏度和通量更高,重现性也更好,但其对于高复杂性样本在定量速度和深度上均存在一定的局限性。改善PRM定量的色谱方法包括:色谱柱的优化,增加色谱柱内径、降低柱长;色谱洗脱条件的优化,提高液相洗脱流速、缩短洗脱时间;最终建立了一种简单高效的双反相色谱串联PRM靶向蛋白质组定量平台。该平台使用150μm内径和8 cm长的短色谱柱,在800 nL/min的高流速下和35 min有效洗脱梯度内,可实现对293T全细胞裂解液蛋白样本中多达400条低丰度肽段的快速定量。该研究优化了PRM靶向定量方法,将有利于PRM技术的推广,尤其为低丰度蛋白的精准定量提供了一种技术选择。

关键词：双反相色谱平行反应监测靶向定量

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CpG寡聚脱氧核苷酸佐剂对狂犬病疫苗免疫效果的影响

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中国生物制品学杂志 2017年第6期30卷 566-570页

作者：闫江泓于鹏程陶晓燕刘淑清吴未辰卢学新李淑英朱武洋华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000 中国疾病预防控制中心病毒病所北京100052

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复... 详细信息

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复合物作为疫苗佐剂,按Essen程序经腿部肌肉免疫BALB/c小鼠。免疫前2 d及首次免疫后分别于第6、8、10、14、35和42天采血,分离血清,通过快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体效价;并经ELISPOT法分析首次免疫第6和14天小鼠脾细胞分泌IFNγ的情况。结果低、中剂量的CpG ODN及其与Al(OH)_3联合使用均可使小鼠在首次免疫后第8天产生具有保护水平的中和抗体,第10天阳转率均达100%;在首次免疫后第35及42天,小鼠产生抗狂犬病病毒中和抗体水平均明显升高(P<0.05);在首次免疫后第6及14天,低、中剂量的CpG ODN可明显提高小鼠脾细胞的IFNγ分泌水平(P<0.05)。结论 CpG ODN对RV具有免疫增效作用,可能成为一种新型的RV佐剂。

关键词： CpG寡聚脱氧核苷酸佐剂狂犬病疫苗体液免疫细胞免疫

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大鼠蛛网膜下腔出血后兴奋性氨基酸对脑微循环的影响

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中国现代医学杂志 2017年第5期27卷 28-32页

作者：高建亮刘振刚孙林林付爱军李建民庬智寅张中原田景瑞华北理工大学附属医院神经外科河北唐山063000 河北省遵化市人民医院神经外科河北遵化064200 华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000

目的探讨蛛网膜下腔出血后氧化应激链中兴奋性氨基酸对脑微循环的影响。方法颈内血管穿刺法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型。实验共分3组,出血模型3天组与急性期组(对照)。其中,出血后3天组又分2组,一组大鼠确定海马CA3区,另一组确定侧脑室... 详细信息

目的探讨蛛网膜下腔出血后氧化应激链中兴奋性氨基酸对脑微循环的影响。方法颈内血管穿刺法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型。实验共分3组,出血模型3天组与急性期组(对照)。其中,出血后3天组又分2组,一组大鼠确定海马CA3区,另一组确定侧脑室区,分别采用微量进样器直接注射兴奋性氨基酸类似物海人酸(KA)与肾上腺髓质素(ADM),激光多普勒监测,观察并对比三者脑表面局部血流灌注量的变化趋势。结果ADM能提高SAH后脑表面局部微循环血流灌注量,KA能、降低其脑表面局部微循环血流灌注量。结论SAH后产生的氧化应激链中兴奋性氨基酸能够显著降低脑表面局部微循环血流灌注量。

关键词：激光多普勒兴奋性氨基酸肾上腺髓质素海人酸

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