检索结果-内蒙古大学图书馆

华南农业大学学报 2019年第6期40卷 22-28页

作者：林希刘若寒郝香琪郑清栩陶攀周沛李守军华南农业大学兽医学院/广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室

【目的】对广州和东莞市宠物犬感染犬瘟热病毒(CDV)的情况进行病原鉴定和分析,为监测CDV的遗传变异情况和防治犬瘟热(CD)提供数据基础。【方法】从表现CD症状的犬只中鉴定了17份CDV阳性样本,采用RT-PCR的方法克隆得到这些野毒株的血凝素... 详细信息

【目的】对广州和东莞市宠物犬感染犬瘟热病毒(CDV)的情况进行病原鉴定和分析,为监测CDV的遗传变异情况和防治犬瘟热(CD)提供数据基础。【方法】从表现CD症状的犬只中鉴定了17份CDV阳性样本,采用RT-PCR的方法克隆得到这些野毒株的血凝素(H)基因序列,采用生物信息学方法进行序列比对分析。【结果】17株CDV的H基因核苷酸与氨基酸序列的相似性分别为97.4%~100.0%和97.5%~100.0%,与Onderstepoort、Lederle和Convac等疫苗株相比,其核苷酸与氨基酸序列相似性分别为90.3%~91.5%和89.4%~90.8%。进化树分析结果显示,17株CDV野毒株均属于AsiaⅠ型,与疫苗株的分支较远;本研究鉴定的野毒株已进化形成9个潜在的N-糖基化位点。【结论】AsiaⅠ型CDV仍为该地区的流行基因型,基因型较稳定,但与疫苗株相比形成了一定的进化距离和出现了大量的变异。因此,继续监控CDV在犬群中的进化,掌握其遗传变异状况具有重要意义。

关键词：犬瘟热病毒犬瘟热血凝素基因序列分析变异

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基因修饰中国猕猴技术的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第11期41卷 1089-1098页

作者：马云瀚杨世华昆明理工大学医学院昆明650500 华南农业大学兽医学院广州510642 广东省兽医临床重大疾病综合防控实验室广州510642

实验动物是人类疾病研究的终身伴侣.由于在遗传进化、生理生化及病理方面与人类接近,猕猴成为不可或缺的实验动物.基因修饰猕猴(或称基因工程猕猴)是从基因和基因调控角度在机体整体发育水平上认识人类生理和病理分子机制的重要实验材... 详细信息

实验动物是人类疾病研究的终身伴侣.由于在遗传进化、生理生化及病理方面与人类接近,猕猴成为不可或缺的实验动物.基因修饰猕猴(或称基因工程猕猴)是从基因和基因调控角度在机体整体发育水平上认识人类生理和病理分子机制的重要实验材料和高等模型动物.目前,高效的猕猴辅助生殖技术(assisted reproductive technologies,ARTs)和精确的基因编辑技术成为研制基因修饰猕猴的唯一途径.在中国猕猴(或恒河猴)的ARTs方面,已经完成了精液采集与冷冻保存、超数排卵、体外受精和胚胎培养、胚胎移植和妊娠管理,高效完成了"试管猴".在基因编辑技术方面,最近创建了ZFN(zinc-finger nucleases)、TALEN(transcription activator-like effector nucleases)、CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9)载体,为制作基因修饰猕猴创造了条件.我国已经成功研制了转基因和基因敲除的中国猕猴.随着基因编辑技术的突破和发展,结合我国现有丰富的实验猕猴资源,研究避免猕猴的生殖生理障碍,我国有望成为国际化的、重要的基因修饰猕猴研发和生产基地.

关键词：中国猕猴 ARTs 基因编辑技术基因工程动物

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动物肠类器官培养技术

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2743-2750页

作者：陈奡蕾黄德如安娅菲李守军华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642

类器官被定义为三维(three-dimensional,3D)多细胞体外自组装组织结构,在细胞类型、结构和功能方面能模拟还原相应的体内器官,具有明显的组织特异性,可作为新型体外模型。随着技术的发展,肠类器官已被应用于器官发育、器官功能、器官修... 详细信息

类器官被定义为三维(three-dimensional,3D)多细胞体外自组装组织结构,在细胞类型、结构和功能方面能模拟还原相应的体内器官,具有明显的组织特异性,可作为新型体外模型。随着技术的发展,肠类器官已被应用于器官发育、器官功能、器官修复与移植、疾病诊断和药物筛选等多个研究领域。目前除了小鼠肠类器官外,关于其他种属动物肠类器官培养的研究较少。但在临床中,其他动物,特别是家畜动物仍存在多种传染性或非传染性的肠道疾病,亟待新型的体外模型用于揭示致病机理或开发新的治疗方案。为此,本文对近十年动物肠类器官培养的研究进展进行综述,总结了动物肠类器官培养的优、缺点并对动物肠类器官培养进行了小结与展望,以期为动物肠类器官的培养提供参考。

关键词：动物肠类器官 3D培养

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牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的调控机制

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华南农业大学学报 2019年第4期40卷 1-7页

作者：窦燚萍赵琰平晓坤罗静龙贾坤华南农业大学兽医学院/广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室/广东省宠物工程技术研究中心

[目的]研究牛分枝杆菌Mycobacterium bovis PtpA蛋白对免疫应答相关的NF-κB信号通路的影响,以揭示PtpA蛋白在机体免疫应答中的作用。[方法]构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,并将其转染到HEK293T中,进行SDS-PAGE分析及Western blot... 详细信息

[目的]研究牛分枝杆菌Mycobacterium bovis PtpA蛋白对免疫应答相关的NF-κB信号通路的影响,以揭示PtpA蛋白在机体免疫应答中的作用。[方法]构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,并将其转染到HEK293T中,进行SDS-PAGE分析及Western blot检测。激活NF-κB信号通路后,通过双荧光素酶试验和qPCR方法探究PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响。[结果]成功构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,转染HEK293T后经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为22 000处可见特异性蛋白条带。Western blot结果显示,表达产物可与一抗特异性结合,证明该蛋白是PtpA蛋白。双荧光素酶试验中,转染2~24 h,试验组与对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光强度的比值差异显著(P<0.05);转染2 h后,对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光值是试验组的2.93倍,说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路激活早期具有显著的抑制作用。qPCR结果显示,转染2 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的3.93、3.42、2.17和2.30倍(P<0.01);转染4 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的4.26、3.93、2.36和2.50倍(P<0.01),说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路相关的细胞因子(IL-6、GM-CSF、BIRC-2、BIRC-3)在免疫早期具有显著抑制作用。[结论]qPCR结果与双荧光素酶试验结果一致,表明牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响主要发生在早期。本研究为后续研究有效的结核病防控药物提供了理论基础。

关键词：牛结核病牛分枝杆菌 PtpA蛋白 NF-κB信号通路细胞因子免疫应答

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动物疼痛识别与评估研究进展

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畜牧兽医学报 2014年第10期45卷 1592-1599页

作者：远立国熊惠军贾坤汤有志王衡孙凌霜孙垚韩太光李守军华南农业大学兽医学院广州510642 广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642

动物疼痛发生率高,且常被饲养者和兽医忽视,然而由疼痛引发的不良影响广泛存在,不仅会引发动物机体多系统强烈的应激反应,而且严重影响动物生存质量和工作质量,继而影响与动物密切相关的人类日常生活及社会生活。此外,实验动物疼痛还会... 详细信息

动物疼痛发生率高,且常被饲养者和兽医忽视,然而由疼痛引发的不良影响广泛存在,不仅会引发动物机体多系统强烈的应激反应,而且严重影响动物生存质量和工作质量,继而影响与动物密切相关的人类日常生活及社会生活。此外,实验动物疼痛还会使科研数据出现偏差,准确性降低。因此,科学有效地管理动物疼痛,对动物自身及人类社会均具有十分重要的现实价值和社会意义。笔者通过文献检索,概述了动物疼痛识别与评估的研究现状,分析了未来发展趋势,为实现动物疼痛最小化、提高动物福利和开展动物疼痛干预研究奠定基础,同时为消除国际贸易动物福利壁垒,使中国更好地履行世界动物卫生组织的权利和义务,乃至为提高人类生活幸福感和人类疼痛医学研究提供支持。

关键词：动物疼痛疼痛识别疼痛评估动物福利

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Let-7a对犬流感病毒诱导细胞凋亡调控作用的初步研究

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畜牧兽医学报 2016年第6期47卷 1247-1252页

作者：胡仁峻涂黎晴孙凌霜贾坤远立国李守军华南农业大学兽医学院广州510642 广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642

犬流感(CI)是由犬流感病毒(CIV)感染犬引起的传染性疾病,感染犬主要表现为急性呼吸道症状。为了探究犬microRNA let-7a对CIV诱导细胞凋亡的调控作用,在体外用CIV对MDCK细胞进行感染,通过AO/EB染色和流式细胞术检测是否能引起细胞凋亡,... 详细信息

犬流感(CI)是由犬流感病毒(CIV)感染犬引起的传染性疾病,感染犬主要表现为急性呼吸道症状。为了探究犬microRNA let-7a对CIV诱导细胞凋亡的调控作用,在体外用CIV对MDCK细胞进行感染,通过AO/EB染色和流式细胞术检测是否能引起细胞凋亡,并用荧光定量PCR测定let-7a的转录水平,最后通过转染let-7a来评价其对于细胞凋亡的影响。结果表明,CIV能够引起MDCK细胞发生凋亡且被感染细胞内let-7a转录下调,而过转录细胞内let-7a则能够有效地抑制病毒诱导的凋亡。研究结果显示,犬let-7a在CIV感染细胞中起着抗凋亡作用,而let-7a的低转录促进了细胞凋亡,并且这一机制可能在CIV感染犬的呼吸道损伤中扮演了一定的角色。

关键词： let-7a H3N2 犬流感 MDCK 细胞凋亡

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博来霉素致小鼠肺纤维化模型的建立及生物标志物的筛选

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畜牧兽医学报 2021年第4期52卷 1134-1140页

作者：王国辽张洁饶家榕莫睿文远立国华南农业大学兽医学院广州510642 广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642

研究博来霉素(BLM)致小鼠肺纤维化模型中MMP-7、KL-6、SP-A、SP-D的表达和临床意义,探讨靶向性近红外荧光MMP-7探针及4种生物标志物联合检测在肺纤维化模型中的应用,旨在为肺纤维化的诊断、预后、动态监测及治疗提供参考。40只雄性C57B... 详细信息

研究博来霉素(BLM)致小鼠肺纤维化模型中MMP-7、KL-6、SP-A、SP-D的表达和临床意义,探讨靶向性近红外荧光MMP-7探针及4种生物标志物联合检测在肺纤维化模型中的应用,旨在为肺纤维化的诊断、预后、动态监测及治疗提供参考。40只雄性C57BL/6小鼠随机分为BLM模型组和对照组,模型组气管滴注100μL低(2.0 mg·kg^(-1))、中(3.5 mg·kg^(-1))、高(5.0 mg·kg^(-1))剂量的盐酸博来霉素注射液建立肺纤维化模型,依次记为L组、M组和H组,对照组给予等量生理盐水。于建模后28 d,进行肺组织肺泡炎和肺纤维化评分,使用ELISA及RT-PCR技术检测MMP-7、KL-6、SP-A、SP-D的表达量,免疫组化法和Western blot检测MMP-7和KL-6蛋白在肺组织中的表达;腹腔注射近红外荧光MMP-7探针,于1.0、1.5、2.0、12.0、24.0、48.0 h进行荧光活体成像,观察MMP-7探针在体内的动态分布。结果表明,BLM摄入剂量与肺泡炎(P=0.008)及肺纤维化程度(P=0.03)显著相关(P<0.05), 2.0、3.5、5.0 mg·kg^(-1)剂量的BLM在一定程度上均能引起MMP-7、KL-6、SP-A、SP-D表达异常(P<0.05);近红外荧光MMP-7探针能特异性结合MMP-7靶点,探针注射12 h后靶向分布于肺部,信号稳定。4种生物标志物在肺纤维化模型小鼠肺组织中的表达随肺泡炎或纤维化的严重程度而增高或降低,提示它们是肺纤维化的生物标志物,联合检测可以提高方法的准确率和敏感性,非侵入性的MMP-7探针可用于小鼠肺纤维化的动态监测。

关键词：博来霉素肺纤维化小鼠模型生物标志物近红外荧光成像

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犬流感病毒重组核蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 611-614页

作者：李陆涛袁子国孙凌霜涂黎晴闫中山李秀珍李守军华南农业大学兽医学院/广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广东广州510642

为建立H3N2亚型犬流感病毒（cIv）血清学检测方法，本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白（rNP）作为检测抗原，通过优化反应条件，建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0．288。该方... 详细信息

为建立H3N2亚型犬流感病毒（cIv）血清学检测方法，本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白（rNP）作为检测抗原，通过优化反应条件，建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0．288。该方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感毒、犬腺病毒II型、狂犬病病毒、犬弓形虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫的阳性血清均为阴性，具有良好的特异性，但与H1N1、H3N8和H9N2亚型CIV有交叉反应。该方法检测H3N2CIV血清抗体的灵敏度为血凝抑制试验（HI）的3～12．5倍；而且其批内批间变异系数为1．85％～6．57％，重复性良好。通过对H3N2CIV攻毒犬血清进行分析，表明该检测方法具有滞后性，检测到CIV抗体的时间晚于HI试验。利用本研究建立的方法和以H3N2CIV为诊断抗原的HI检测方法对450份血清样品进行检测，结果显示该方法对血清样品具有初筛作用，两者阳性符合率为58-3％，阴性符合率为100％。本研究可以结合其它血清学方法为CIV流行病学调查进行快速、高效的检测。

关键词：犬流感病毒重组核蛋白间接ELISA

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白狐源星状病毒RdRp基因的鉴定及遗传演化分析

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华南农业大学学报 2021年第1期42卷 12-16页

作者：冀锦朝黄勉卢刚欧嘉俊彭仕明萨家祺李守军华南农业大学兽医学院/广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广东广州510642 广州动物园广东广州510070

【目的】探究广州动物园一例死亡白狐Alopex lagopus肾脏中鉴定出的星状病毒的遗传变异情况。【方法】对死亡白狐进行剖检,利用半巢式RT-PCR对内脏器官进行病原学检测,对扩增出的病毒株的RdRp基因序列进行相似性分析。【结果】死亡白狐... 详细信息

【目的】探究广州动物园一例死亡白狐Alopex lagopus肾脏中鉴定出的星状病毒的遗传变异情况。【方法】对死亡白狐进行剖检,利用半巢式RT-PCR对内脏器官进行病原学检测,对扩增出的病毒株的RdRp基因序列进行相似性分析。【结果】死亡白狐的肾脏苍白肿大,被膜难以剥离,肾脏中检测出的星状病毒RdRp基因呈阳性。RdRp基因与9株参考毒株的核苷酸相似性为67.5%~96.2%,其中与香港猫源星状病毒1637F的核苷酸相似性(96.2%)最高。【结论】本研究为星状病毒在野生哺乳动物间的跨种传播及肠外器官中的感染提供了依据。

关键词：白狐星状病毒肾脏野生哺乳动物 RdRp基因

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犬乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定

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华南农业大学学报 2015年第6期36卷 35-38页

作者：胡静思袁榕李守军广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室/华南农业大学兽医学院广东广州510642

【目的】建立方便、经济的犬乳腺上皮细胞体外培养方法,用于犬乳腺癌的研究.【方法】以新产犬乳汁为材料,离心并收集乳汁中细胞,进行分离培养.用CCK-8法绘制细胞生长曲线,细胞角蛋白8免疫荧光染色鉴定上皮细胞.【结果和结论】试验材料... 详细信息

【目的】建立方便、经济的犬乳腺上皮细胞体外培养方法,用于犬乳腺癌的研究.【方法】以新产犬乳汁为材料,离心并收集乳汁中细胞,进行分离培养.用CCK-8法绘制细胞生长曲线,细胞角蛋白8免疫荧光染色鉴定上皮细胞.【结果和结论】试验材料培养后第3天即可见岛屿状的细胞克隆并伴有少量吞噬细胞.继续培养至单克隆细胞汇合后,可见细胞呈典型的石铺路状,单层平铺生长,且在细胞表层产生乳滴,细胞传代后吞噬细胞消失.CCK-8结果显示,细胞生长曲线呈"S"型.细胞免疫荧光结果显示,细胞角蛋白8呈阳性.表明从犬乳汁中可以分离培养出高纯度、生长迅速的犬乳腺上皮细胞.本试验建立了短时间内获得大量纯犬乳腺上皮细胞的方法.

关键词：犬乳汁乳腺上皮细胞体外培养角蛋白8

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