检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2017年第11期47卷 1349-1356页

作者：袁丽霞饶明章张杰赵子君陈建陈杨一骏严立福郑晓翠谢暮晴曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

为了研究K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法,以ALV-K GDFX0603株为模板,扩增其gp85基因,构建原核表达质粒p ET-GDFX0603-gp85,筛选原核表达菌液的诱导条件,采用Ni柱纯化表达的重组蛋白;以纯化后重组蛋白作为包被抗原,研究ALV-K抗... 详细信息

为了研究K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法,以ALV-K GDFX0603株为模板,扩增其gp85基因,构建原核表达质粒p ET-GDFX0603-gp85,筛选原核表达菌液的诱导条件,采用Ni柱纯化表达的重组蛋白;以纯化后重组蛋白作为包被抗原,研究ALV-K抗体间接ELISA检测方法。结果显示,表达的gp85重组蛋白以包涵体形式存在,大小为53 ku。Western-blot分析表明,该蛋白具有良好的免疫反应性;重复性试验结果显示,板内重复性的CV最大值为10.41%;板间重复性的CV最大值为12.57%,CV值均小于15%。特异性试验结果显示,该方法除了对ALV-A阳性血清有弱的交叉反应外,对ALV-B、ALV-J、AIV、NDV、IBDV、MDV、REV、大肠杆菌和沙门菌的阳性血清均无交叉反应。结果表明,初步建立了检测ALV-K抗体的间接ELISA方法,该方法具有良好的板内和板间重复性及较强的特异性。

关键词： K亚群禽白血病病毒 gp85蛋白原核表达间接ELISA

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H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第2期34卷 124-127页

作者：郭泗虎王文华张亮权齐海涛曹楠闫明菲黄昌力张超轶张桂红华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州l510642

为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,... 详细信息

为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,与普通PCR进行比较。研究结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,R2为0.994,CV在0.17%～1.41%之间,具有良好稳定性。除H3亚型SIV外,对H1、H4、H6、H9亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒和猪圆环病毒2型的检测均为阴性,与普通PCR相比更灵敏。该方法特异性好,准确率高,适于临床分离鉴别H3亚型SIV。

关键词：猪流感 H3亚型实时荧光定量PCR

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Ⅱ群禽腺病毒pⅢa基因的原核表达及抗原性分析

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黑龙江畜牧兽医 2013年第12期 119-122页

作者：刘雪美秦建如赵海燕李育豪曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642

为了研究Ⅱ型禽腺病毒pⅢa基因的抗原性,试验根据Ⅱ型禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)VAS株的全基因序列(GenBank序列号为AY849321.1)设计了1对引物,采用PCR扩增出pⅢa的完整基因,将其连接到质粒表达载体pET-32a(+),获得的阳性克隆命名... 详细信息

为了研究Ⅱ型禽腺病毒pⅢa基因的抗原性,试验根据Ⅱ型禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)VAS株的全基因序列(GenBank序列号为AY849321.1)设计了1对引物,采用PCR扩增出pⅢa的完整基因,将其连接到质粒表达载体pET-32a(+),获得的阳性克隆命名为pET-32a-pⅢa,再将pET-32a-pⅢa转化至*** BL21(DE3),经37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导表达5 h,应用SDS-PAGE分析超声裂解后的上清液和沉淀。结果表明:目的蛋白以可溶性蛋白形式存在,蛋白分子质量约为76 ku,目的蛋白具有较好的抗原活性。

关键词： Ⅱ型禽腺病毒 pⅢa蛋白原核表达抗原性分析

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不同源鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒不相容性分群的初步研究

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 54-58页

作者：李静怡崔可琦冯赛祥贺现辉廖明徐成刚华南农业大学兽医学院、农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

试验利用PCR方法检测101株不同源鼠伤寒沙门氏菌携带质粒的不相容群,共设计18对引物,PCR分为5个三重PCR和3个单一PCR,用来检测识别FIA、FIB、FIC、HI1、HI2、I1、L/M、N、P、W、T、A/C、K、B/O、X、Y、F和FII复制子。101株不同源鼠伤寒... 详细信息

试验利用PCR方法检测101株不同源鼠伤寒沙门氏菌携带质粒的不相容群,共设计18对引物,PCR分为5个三重PCR和3个单一PCR,用来检测识别FIA、FIB、FIC、HI1、HI2、I1、L/M、N、P、W、T、A/C、K、B/O、X、Y、F和FII复制子。101株不同源鼠伤寒沙门氏菌中94株(93.1%)携带质粒不相容群,共携带10种质粒不相容群,分别是Inc HI1、Inc HI2、Inc I1、Inc FIA、Inc FIB、Inc N、Inc Y、Inc P、Inc FIIA和Inc FrepB,其中76.6%的菌株携带2个或2个以上质粒不相容群。结合药物敏感性试验结果,追踪鼠伤寒沙门氏菌耐药传播机制。本研究调查了耐药性质粒在鼠伤寒沙门氏菌的水平传播特性,不同环境中大量的菌株介导特定多重耐药性质粒的扩散,对调查跟踪质粒赋予耐药的流行病学有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌质粒分型质粒不相容群

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鸡白痢沙门菌的分离鉴定、耐药性及分子分型研究

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动物医学进展 2014年第2期35卷 29-33页

作者：李静怡崔可琦冯赛祥贺现辉廖明徐成刚华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

为了解广东和广西两省鸡白痢沙门菌的耐药现状及其分子流行病学信息,对疑似鸡白痢沙门菌进行了病原菌分离鉴定.根据鸡白痢沙门菌invA基因进行PCR扩增鉴定,应用PFGE方法对菌株进行分型研究、采用纸片法检测菌株对18种抗菌药的药物敏感性... 详细信息

为了解广东和广西两省鸡白痢沙门菌的耐药现状及其分子流行病学信息,对疑似鸡白痢沙门菌进行了病原菌分离鉴定.根据鸡白痢沙门菌invA基因进行PCR扩增鉴定,应用PFGE方法对菌株进行分型研究、采用纸片法检测菌株对18种抗菌药的药物敏感性.结果表明,分离到40株鸡白痢沙门菌;PFGE分型结果显示可分为22个不同型别,其相似值约为62％～100％,聚类分析和流行病学发现,广东和广西两省的11个不同地区间存在同源菌株,同个地区也有同源菌株;菌株对青霉素G、利福平、红霉素、等药物等常用药物高度耐药.临床治疗建议避免使用青霉素G、利福平和红霉素,应重视鸡白痢沙门菌的耐药情况;鸡白痢的流行与种鸡感染具有相关性,在防控该病时应加强种鸡的防疫措施.

关键词：鸡白痢沙门菌耐药性脉冲场凝胶电泳

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靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究

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中国畜牧兽医 2012年第8期39卷 16-19页

作者：李娇冯少珍黄武吴晓婵李育豪曹伟胜廖明华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检... 详细信息

试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%～63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%～45.41%。

关键词： J亚群禽白血病病毒 env基因 LTR基因 siRNA

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鹅细小病毒SS/10株的分离鉴定及生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2012年第8期39卷 56-60页

作者：胡自立刘海玲黄武饶雷罗开健华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

2010年从佛山市某专业户送检的雏鹅肝组织中分离到1株鹅细小病毒(命名为SS/10株),并对其生物学特性进行了研究。该毒株的番鸭胚半数致死量为10-4.6/0.3 mL,动物回归试验显示其对10日龄雏鹅没有致死性,从组织切片观察肠、肝脏、肾脏和脑... 详细信息

2010年从佛山市某专业户送检的雏鹅肝组织中分离到1株鹅细小病毒(命名为SS/10株),并对其生物学特性进行了研究。该毒株的番鸭胚半数致死量为10-4.6/0.3 mL,动物回归试验显示其对10日龄雏鹅没有致死性,从组织切片观察肠、肝脏、肾脏和脑组织均有明显的病理变化。对该毒株测序分析结果发现,其VP1、VP2和VP3基因与GenBank收录的番鸭分离株DY株的同源性较其他参考毒株(鹅分离株)的同源性低,NS1和NS2基因的同源性没有这种差异;其VP3基因与82-0321V,VG32/1和标准株B株在同一分支上,与82-0321V亲缘关系最近,与番鸭细小病毒GD株亲缘关系最远;其VP3基因与B株相比少了505-507位的糖基化位点NRT。

关键词：鹅细小病毒分离鉴定组织切片序列分析生物学特性

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冰鲜鸡生产链中沙门氏菌的分离鉴定及PFGE分型研究

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中国畜牧兽医 2014年第12期41卷 62-66页

作者：崔可琦李静怡冯赛祥贺现辉廖明徐成刚华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

为揭示冰鲜鸡生产链中沙门氏菌的分布及传播机制,本研究于2013年7月~2013年12月采集广东某大型一体化养鸡企业下属2个种鸡场、2个孵化场、2个肉鸡场、1个屠宰场和5个销售点样品,用常规法和PCR进行沙门氏菌的分离鉴定,并对分离出的沙门... 详细信息

为揭示冰鲜鸡生产链中沙门氏菌的分布及传播机制,本研究于2013年7月~2013年12月采集广东某大型一体化养鸡企业下属2个种鸡场、2个孵化场、2个肉鸡场、1个屠宰场和5个销售点样品,用常规法和PCR进行沙门氏菌的分离鉴定,并对分离出的沙门氏菌进行血清学鉴定和PFGE分子分型。种鸡场、肉鸡场、屠宰场和销售点的沙门氏菌的检出率分别为1.46%(7/480)、7.00%(21/300)、62.86%(22/35)和54.67%(41/75),孵化场雏鸡胎粪检出率为1.11%(2/180),死胚检出率为12.00%(9/75)。屠宰和销售环节是沙门氏菌污染的重要环节,食品安全风险较高。102株沙门氏菌共产生24种不同的PFGE谱型,从不同环节分离到多组相似度为100%的沙门氏菌,表明冰鲜鸡生产链中存在沙门氏菌沿生产链传播的现象。

关键词：沙门氏菌 PFGE 冰鲜鸡生产链

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麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒的分离与遗传鉴定

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中国兽医杂志 2015年第3期51卷 3-5,8页

作者：谭利强冯敏郝建勇秦建如廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以... 详细信息

为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以这13份CEF+细胞培养物的基因组DNA为模板,经PCR扩增克隆测序最终得到了1株内源性ALV前病毒序列。将经ELISA、PCR和IFA等方法鉴定的该内源性ALV命名为HN1301株。基于遗传分析表明,HN1301株的前病毒基因序列与已知的E亚群毒株ev1、SD0501的相似性均为99.4%。表明该麻黄肉种鸡品系中存在有复制能力的内源性ALV,因而易干扰基于p27抗原的ELISA检测;本研究对于麻黄肉种鸡禽白血病的防控与净化有参考价值。

关键词：麻黄肉种鸡内源性禽白血病病毒分离遗传鉴定

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Ⅱ群禽腺病毒五邻体蛋白单因子血清的制备

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中国畜牧兽医 2013年第10期40卷 16-20页

作者：刘雪美秦建如李育豪曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642

通过PCR方法扩增得到Ⅱ群禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)的五邻体(penton)基因,并构建了原核表达载体pET-32a-penton,将其转化至*** BL21中,通过诱导表达,以切胶回收的方式纯化蛋白,获得约70ku的重组融合蛋白,Western blotting检测纯... 详细信息

通过PCR方法扩增得到Ⅱ群禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)的五邻体(penton)基因,并构建了原核表达载体pET-32a-penton,将其转化至*** BL21中,通过诱导表达,以切胶回收的方式纯化蛋白,获得约70ku的重组融合蛋白,Western blotting检测纯化后的重组蛋白具有较好的抗原性。将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备了五邻体蛋白单因子血清,间接ELISA检测结果显示所制备的抗血清效价大于1∶40000。本试验获得的高效单因子血清,为Ⅱ群禽腺病毒特异性检测方法的研究奠定了基础。

关键词： Ⅱ群禽腺病毒五邻体蛋白单因子血清

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